長鏈非編碼RNAFOXP 4-AS 1表達與腫瘤患者預后關系的Meta分析△

高晶晶，方雪，張晨陽，于志豪，李梟晗，韓松，張瑩

沈陽醫學院公共衛生學院流行病學教研室，沈陽 110034

近年來腫瘤的發病率和病死率均逐年上升，已成為世界范圍內的主要公共衛生問題，同樣也成為中國人死亡的主要原因[1]。雖然近年來腫瘤的診斷和治療取得了很大的進展，但腫瘤患者的預后仍然很差，即使是相同部位、相同病理類型的腫瘤患者，其預后仍有較大差異。因此，探索腫瘤特異性生物標志物用于腫瘤預后判斷顯得尤為重要。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一類長度超過200個核苷酸的轉錄RNA分子，不具有編碼蛋白質的能力[2]。越來越多的證據表明，lncRNA表達失調與惡性腫瘤的病理特征、預后及各種生物學過程有關[3-5]，并且預示著lncRNA可能是腫瘤特異性的預后生物標志物和治療靶點[6]。lncRNA FOXP4-AS1位于染色體6p21.1，編碼588 bp的轉錄本[7]。以往的研究表明，lncRNA FOXP4-AS1與各種腫瘤的預后具有相關性，但由于研究方案及樣本量的限制，lncRNA FOXP4-AS1對腫瘤預后的預測價值尚未確定。本研究對12項包含1506例腫瘤患者的研究進行Meta分析，旨在探討lncRNA FOXP4-AS1表達與腫瘤患者預后的關系，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 檢索策略

通過 PubMed、Embase、Cochrane Library、Web of Science、CNKI、萬方數據庫、維普數據庫、中國生物醫學文獻數據庫檢索符合條件的出版文獻，檢索時間為建庫至2022年1月20日。英文文獻檢索詞為“Neoplasm”“Tumor”“Neoplasia”“Cancer”“FOXP4 antisense RNA 1”“long non-coding RNA FOXP4-AS1”“lncRNA FOXP4-AS1”“FOXP4-AS1 lncRNA”“prognosis”“prognostic”“outcome”“survival”“recurrence”。中文文獻檢索詞為“腫瘤”“癌癥”“長鏈非編碼RNA FOXP4-AS1”“lncRNA FOXP4-AS1”“預后”“生存”。

1.2 文獻納入和排除標準

納入標準：①觀察性研究；②有關lncRNA FOXP4-AS1在惡性腫瘤中預后的關系；③報告總生存期（overall survival，OS）、無病生存期（diseasefree survival，DFS）或無復發生存期（relapse-free survival，RFS）。排除標準：①綜述；②會議摘要；③重復出版物；④細胞實驗；⑤動物實驗；⑥數據不足的文獻。

1.3 數據提取

數據提取由兩名研究者獨立完成，并根據預先設計的數據提取準則提取相關數據。如果出現分歧則與第3個研究者進行討論或協商。研究資料包括第一作者姓名、發表年份、地理區域、樣本量、腫瘤類型、RNA檢測方法、生存分析類型、結局指標、風險比（hazard ratio，HR）及其95%置信區間（confidence interval，CI）。當所包含的文獻只有生存曲線時，使用Engauge Digitizer軟件及Tierney等[8]描述的方法提取生存信息。

1.4 文獻質量評估

采用Newcastle-Ottawa量表（Newcastle-Ottawa scale，NOS）評價納入文獻的質量，包括研究人群選擇、組間可比性和結果測量3個類別的8個條目。質量評估得分為0～9分，6分及以上表明文獻質量較好。質量評估同樣由兩名研究者獨立完成，通過討論解決分歧。

1.5 數據分析

采用Review Manager 5.3軟件和Stata SE 12.0（Stata，College Station，TX）軟件進行Meta分析，應用HR及相應的95%CI評估lncRNA FOXP4-AS1與各種腫瘤預后的關系。采用χ2值和I2值評價各研究之間的異質性，當I2≤50%或P﹥0.05時，采用固定效應模型進行分析；當I2﹥50%或P≤0.05時，采用隨機效應模型進行分析；采用漏斗圖以及Egger檢驗驗證發表偏倚，P﹤0.05時表明具有較明顯的發表偏倚；采用敏感性分析評估檢驗結果的穩健性；此外，對OS進行亞組分析，以P﹤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 檢索結果

本研究初步檢索文獻66篇（中文文獻12篇，英文文獻54篇），經過剔重、閱讀摘要、全文復篩等最終納入文獻12篇，共1506例腫瘤患者。（圖1）

圖1 文獻檢索及篩選流程圖

2.2 納入文獻的基本情況及質量評價

納入的12篇文獻[9-20]均為英文文獻，9項研究[10-12,15-20]的研究對象來自中國，2項研究[13-14]的研究對象來自美國，其余1項研究[9]未交代研究對象來源；這些研究的樣本量最少為24例，最多為384例；9項研究[10-12,15-20]采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測RNA表達情況，其余3項研究[9,13-14]未交代檢測方法；10項研究[9-11,13-14,16-20]采用了中位數作為截斷值，其余2項研究[12,15]沒有詳細介紹截斷值；其中lncRNA FOXP4-AS1高表達患者736例，lncRNA FOXP4-AS1低表達患者770例；12項研究均采用了OS作為評估患者預后的指標，6項研究[9,11-13,16,18]采用了DFS作為評估患者預后的指標，1項研究[15]采用了RFS作為評估患者預后的指標；納入的12篇文獻NOS評分均≥6分，文獻質量較好。（表1）

表1 納入12篇文獻的基本情況及質量評價

2.3 lncRNA FOXP 4-AS 1與腫瘤患者OS關系的Meta分析結果

12項研究報告了OS，因此均納入分析。異質性檢驗結果顯示，I2=87%，存在異質性，采用隨機效應模型，結果顯示，lncRNA FOXP4-AS1高表達患者的OS明顯短于lncRNA FOXP4-AS1低表達患者，差異有統計學意義（HR=1.65，95%CI：1.26～2.16，P﹤0.01）（圖2）；敏感性分析結果顯示，逐個排除各項研究后結論未發生改變，說明Meta分析的結果是穩健的（圖3）；應用Egger檢驗進行發表偏倚檢測，結果顯示P=0.0051，漏斗圖的分布也顯示了不對稱性（圖4），提示存在一定的發表偏倚。

圖2 lncRNAFOXP 4-AS 1與腫瘤患者OS關系的森林圖

圖3 OS研究的敏感性分析

圖4 OS研究的漏斗圖

2.4 lncRNA FOXP 4-AS 1表達與腫瘤患者OS關系的亞組分析結果

為探索異質性來源，根據上述研究的樣本量、腫瘤類型和分析類型對OS進行亞組分析。結果顯示，不同樣本量亞組中，樣本量﹤100亞組（HR=1.78，95%CI：1.21～2.62，I2=89%）和樣本量﹥100亞組（HR=1.49，95%CI：1.00～2.22，I2=85%）中lncRNA FOXP4-AS1表達均與OS有關（P﹤0.05）；不同腫瘤類型亞組中，消化系統腫瘤（HR=1.63，95%CI：1.06～2.51，I2=82%）和其他類型腫瘤（HR=1.68，95%CI：1.17～2.42，I2=91%）中lncRNA FOXP4-AS1表達均與OS有關（P﹤0.05）；不同分析類型的亞組中，多變量分析（HR=1.75，95%CI：1.35～2.26，I2=80%）和單變量分析（HR=1.65，95%CI：1.12～2.42，I2=86%）中lncRNA FOXP4-AS1表達均與OS有關（P﹤0.05）。（表2）

表2 腫瘤患者OS的亞組分析結果

2.5 lncRNA FOXP 4-AS 1與腫瘤患者DFS和RFS關系的Meta分析

6項研究[9,11-13,16,18]被納入DFS的Meta分析中，結果顯示，lncRNA FOXP4-AS1表達與DFS無關（HR=1.27，95%CI：0.83～1.94，P=0.27，I2=86%）；1項研究[15]被納入RFS的Meta分析中，結果顯示，lncRNA FOXP4-AS1高表達與較短的RFS有關（HR=2.67，95%CI：1.45～4.91，P﹤0.01）（圖 5）。漏斗圖的分布顯示一定的不對稱性（圖6），說明本研究納入的文獻存在一定的發表偏倚，DFS研究的Egger檢驗結果也驗證了這一結果（P=0.0379）。

圖5 lncRNAFOXP 4-AS 1與腫瘤患者DFS和RFS關系的森林圖

圖6 DFS和RFS研究的漏斗圖

3 討論

通過閱讀大量文獻發現，lncRNA在各種腫瘤中發揮促癌基因或抑癌基因的作用[21-23]。lncRNA通過與DNA、RNA或蛋白質相互作用發揮分子支架、海綿或輔助活化劑的功能。許多lncRNA在腫瘤的發展過程中具有至關重要的作用，它們參與了腫瘤的增殖、侵襲和轉移過程[24]。因此，鑒定腫瘤相關lncRNA對于了解其在腫瘤發生中的作用以及為腫瘤患者提供有希望的治療靶點具有重要意義。

本研究發現，與lncRNA FOXP4-AS1低表達患者相比，lncRNA FOXP4-AS1高表達腫瘤患者的OS和RFS更短。lncRNA FOXP4-AS1表達與腫瘤患者的DFS無關（P﹥0.05），這可能是由于納入研究數較少且納入研究的結論不一致。本研究結果提示，lncRNA FOXP4-AS1高表達可能是影響腫瘤患者預后的不利因素，說明lncRNA FOXP4-AS1高表達可用于預測各種類型腫瘤的不良預后。OS的亞組分析也能夠驗證以上結論，根據分析類型進行亞組分析時，各亞組合并的I2均小于總體合并時的I2，提示納入研究的不同分析類型可能是異質性較高的原因。其次，納入的12項研究定義lncRNA FOXP4-AS1表達高低的標準不同，其中還有2項研究未對定義標準進行交代，這也有可能是造成本研究異質性較高的原因。此外，納入研究的結論不一致、不同類型腫瘤預后有一定差異也可能是本研究異質性較高的原因。OS及DFS研究的漏斗圖和Egger檢驗均提示存在一定的發表偏倚，這可能是由于納入的陰性結果（lncRNA FOXP4-AS1的表達是腫瘤的保護因素）文獻數較少或者是缺少相關中文文獻。

雖然許多研究已經探索了lncRNA FOXP4-AS1的表達與人類腫瘤預后的關系，但lncRNA FOXP4-AS1的作用機制仍然不清楚。國內的一項研究發現，lncRNA FOXP4-AS1可以通過競爭性結合微小RNA（microRNA，miRNA）-298上調TMPO基因表達，從而促進尤文肉瘤細胞的增殖、遷移、侵襲過程[25]。國外的一項研究結果顯示，lncRNA FOXP4-AS1可通過抑制miRNA-423-5p的表達，上調NACC1基因的表達，從而促進被套區細胞淋巴瘤細胞的增殖、遷移和侵襲過程[16]。到目前為止，只有少數研究探索了lncRNA FOXP4-AS1在腫瘤中的作用機制。此外，很少進行活體動物實驗。因此，還需要進行更多的基礎研究來闡明lncRNA FOXP4-AS1在腫瘤中的預后價值。

此外，本研究存在一定的局限性。首先，lncRNA FOXP4-AS1表達沒有公認的臨界值，這可能會影響研究結論在臨床上的應用，本研究只是初步研究，lncRNA FOXP4-AS1在腫瘤中的確切作用仍有待隨機對照試驗的進一步證實。其次，部分文獻沒有直接提供HR值，本研究根據Tierney等[8]描述的生存曲線提取方法間接獲得了幾篇文章中OS的HR和相應的95%CI，結果可能受到一定的影響。

綜上所述，lncRNA FOXP4-AS1高表達與腫瘤患者較短的OS和RFS有關，其可能成為腫瘤患者的預后標志物和潛在的治療靶點。