人源性多肽、可溶性E-鈣黏蛋白在乳腺癌中的表達及對患者預后的預測價值

李俊強，文小強，代引海

陜西中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院腫瘤乳腺外科，陜西 咸陽 712000

乳腺癌屬于臨床常見的惡性腫瘤，主要發(fā)生于乳腺上皮組織，臨床主要表現為乳房腫塊、乳房皮膚異常等，若控制不及時，病情進展至晚期腫瘤細胞會發(fā)生轉移，器官出現病變，嚴重威脅患者的生命健康。研究顯示，乳腺癌的發(fā)病率正逐年上升，居女性惡性腫瘤首位，病死率居女性惡性腫瘤第二位[1]。目前，乳腺癌多采用手術切除治療，術后需進行放化療等輔助治療，不良反應明顯，且乳腺癌康復時間較長，康復過程中患者疼痛明顯，可嚴重影響患者的預后[2]。有研究認為，采用敏感的乳腺癌預后生物標志物對評估腫瘤病情和預后尤為重要，人源性多肽（dermcidin，DCD）、可溶性E-鈣黏蛋白（soluble E-cadherin，sE-cadherin）表達與乳腺癌細胞的侵襲轉移密切相關，可作為評估乳腺癌患者預后的生物標志物[3-5]。因此，本研究探討DCD、sE-cadherin在乳腺癌中的表達及對患者預后的預測價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年10月至2020年12月陜西中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院收治的乳腺癌患者。納入標準：①經CT、病理學檢查確診為乳腺癌；②病歷資料完整。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②合并臟器功能異常；③合并精神障礙；④已接受治療。依據納入和排除標準，本研究共納入298例乳腺癌患者，年齡24～65歲，平均（43.59±8.49）歲；病程6～15個月，平均（10.26±2.96）個月；TNM分期：Ⅰ期124例，Ⅱ期100例，Ⅲ期74例。取所有患者乳腺癌組織和相應的癌旁組織。本研究經醫(yī)院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組化法檢測DCD、sE-cadherin的表達情況

取所有患者乳腺癌組織和相應的癌旁組織，對組織標本進行切片、脫蠟、水化處理后，將標本浸泡于3%過氧化氫中20 min，封閉內源性過氧化物酶活性。高壓枸櫞酸鹽抗原修復，溫水清洗后使用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗3次，每次5 min，同時滴加10%血清以阻斷非特異性的結合，37℃孵育10 min。滴加一抗DCD、sE-cadherin兔抗人單克隆抗體（濃度1∶100）4℃過夜，PBS再次清洗，滴加二抗DCD、sE-cadherin兔抗人單克隆抗體，37℃孵育10 min，PBS清洗3次后，滴加過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液孵育10 min，二氨基聯苯胺顯色，蘇木素復染，脫水、干燥后中性樹脂封片，用PBS代替一抗作為陰性對照。

結果判定：細胞質呈棕黃色或棕褐色染色，或染色明顯強于背景色為陽性，選取5個不同視野進行全面觀察，每個視野中細胞應不低于200個，觀察完成后計算每個視野中陽性細胞所占比例，陽性細胞所占比例﹤5%為陰性，陽性細胞所占比例為5%～50%為弱陽性，陽性細胞所占比例﹥50%為強陽性，弱陽性和強陽性判定為陽性表達。

1.3 隨訪

采用門診復查等方式對所有患者進行為期半年的隨訪，記錄患者的預后情況，將遠處轉移、病情加重或死亡判定為預后不良。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0軟件對所有數據進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；乳腺癌患者預后的影響因素采用多元Logistic回歸分析；繪制受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線，計算曲線下面積（area under the curve，AUC），評估DCD、sE-cadherin單獨及聯合檢測對乳腺癌患者預后的預測價值；以P﹤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 乳腺癌組織和癌旁組織中DCD、sE-cadherin表達情況的比較

乳腺癌組織中DCD的陽性表達率明顯高于癌旁組織，sE-cadherin的陽性表達率明顯低于癌旁組織，差異均有統計學意義（P﹤0.01）。（表1）

表1 乳腺癌組織和癌旁組織中DCD、sE-cadherin陽性表達率的比較[ n（%）]

2.2 不同預后情況乳腺癌患者乳腺癌組織中DCD、sE-cadherin表達情況的比較

隨訪半年，298例乳腺癌患者中，預后良好209例，預后不良89例；預后不良乳腺癌患者乳腺癌組織中DCD的陽性表達率明顯高于預后良好患者，sE-cadherin的陽性表達率明顯低于預后良好患者，差異均有統計學意義（P﹤0.05）。（表2）

表2 不同預后情況乳腺癌患者乳腺癌組織中DCD、sE-cadherin陽性表達率的比較[ n（%）]

2.3 乳腺癌患者預后影響因素的單因素和多因素分析

單因素分析結果顯示，年齡、病程均可能與乳腺癌患者的預后無關（P﹥0.05），淋巴結轉移情況、腫瘤直徑、TNM分期、DCD表達情況、sE-cadherin表達情況均可能與乳腺癌患者的預后有關（P﹤0.05）。多因素Logistic回歸分析結果顯示，淋巴結轉移、腫瘤直徑≥5 cm、TNM分期為Ⅱ～Ⅲ期、DCD陽性表達、sE-cadherin陰性表達均為乳腺癌患者預后不良的獨立危險因素（P﹤0.05）。（表3）

2.4 DCD、sE-cadherin單獨及聯合檢測對乳腺癌患者預后的預測價值

DCD、sE-cadherin、DCD+sE-cadherin預測乳腺癌患者預后的AUC分別為0.795、0.711、0.887，DCD+sE-cadherin聯合預測的AUC最大，此時的靈敏度、特異度分別為0.576、0.619。（表4、圖1）

表4 DCD、sE-cadherin單獨及聯合檢測對乳腺癌患者預后的預測價值

3 討論

隨著社會生活水平的提高，女性的工作生活壓力不斷升高，與女性相關的健康問題也逐漸顯現。乳腺癌是女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤，權威數據顯示，近年來，乳腺癌的發(fā)病率居女性惡性腫瘤首位[6-7]。同時，乳腺癌也是女性惡性腫瘤死亡原因的第二位，這主要是因為腫瘤細胞增殖指數較高，病情進展迅速，對女性和社會造成的危害日漸突出。臨床常采用觸診、病理學檢查、鉬靶X線、正電子發(fā)射計算機斷層顯像（position emission tomography，PET）/CT、MRI等對乳腺癌進行檢查，但觸診準確度較低，受主觀因素的影響較大；病理學檢查雖準確度高，但是一種術后有創(chuàng)檢查，無法及時了解藥物的效果，甚至會延誤治療；X線對致密型乳腺癌診斷不準確；PET/CT及MRI檢查費用昂貴。早期乳腺癌多無明顯臨床表現，多數患者確診時已進展至中晚期，失去了最佳的手術治療時機，且多數患者預后不良[8-9]。上述檢查方法無法及時有效評估患者的預后情況，因此需尋找一種更有效的檢測方法。

有研究發(fā)現，血清腫瘤生化指標檢測特異度、靈敏度均較高，便于臨床持續(xù)監(jiān)測預后及輔助診斷[10-12]。有研究認為，sE-cadherin是一種跨膜糖蛋白，其表達下調時，可減輕腫瘤細胞間的黏附能力，可促進腫瘤細胞的侵襲轉移[13-14]。研究認為，sE-cadherin在乳腺癌組織中高表達，其表達與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉移、預后密切相關，可作為臨床診斷與預后的評價指標。國外研究表明，DCD在多種腫瘤中發(fā)揮致癌基因的作用，被認為與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展及轉移有關[16]。

鄧奔騰等[17]研究認為，DCD在乳腺癌組織中表達明顯上調，可成為臨床診斷的生物標志物。本研究結果顯示，DCD在乳腺癌組織中的陽性表達率較高，而sE-cadherin在癌旁組織中的陽性表達率較高，同時DCD陽性表達、sE-cadherin陰性表達均是乳腺癌患者預后不良的獨立危險因素。同時，本研究還就DCD、sE-cadherin單獨及聯合檢測對乳腺癌患者預后的預測價值進行評估，DCD+sE-cadherin預測乳腺癌患者預后的AUC為0.887，分別高于二者單獨檢測。主要是因為sE-cadherin為轉移抑制基因，存在于表皮組織中，對腫瘤細胞維持高黏附特性和抑制腫瘤細胞的轉移侵襲發(fā)揮重要作用；sE-cadherin水平升高時能夠使細胞間的黏附增加，使腫瘤細胞難以遠離原發(fā)灶，從而明顯抑制腫瘤細胞轉移，若sE-cadherin水平降低，則會促進腫瘤細胞的增殖、轉移，對患者的預后產生不良影響[18]。而DCD由人類汗液中分離，是一種天然活性的多肽物質，具有抗細菌和真菌的活性，在腫瘤發(fā)生及人體天然免疫系統疾病、神經系統疾病、妊娠相關疾病的病理生理過程中發(fā)揮作用，可通過ERBB信號通路促進乳腺癌的發(fā)生發(fā)展[19]。因此DCD、sE-cadherin水平變化可作為乳腺癌診斷、治療及預后評估的生物標志物。

綜上所述，乳腺癌組織中DCD的陽性表達率較高，sE-cadherin的陽性表達率較低，二者聯合檢測對乳腺癌患者的預后評估的預測價值較高。