抗人球蛋白微柱凝膠法和凝聚胺法用于交叉配血的價值對比

吳會娥

輸血治療常應(yīng)用于危重患者搶救或者嚴(yán)重貧血患者，可及時補(bǔ)充失血量、維持血容量，改善貧血狀態(tài)，糾正休克[1]。臨床輸血前需進(jìn)行交叉配血檢測，通過交叉配血可判斷受血者與供血者血液是否匹配，從而減少輸血反應(yīng)，保障輸血安全[2]。臨床上常用的交叉配血方法包括凝聚胺法和抗人球蛋白微柱凝膠法。凝聚胺法是通過凝聚胺分子溶解后大量正電荷中和紅細(xì)胞表面負(fù)電荷發(fā)生凝集，加入解聚液后可分散凝聚胺發(fā)生的凝集，而抗體間特異性凝集不分散，檢測受血者與供血者間抗原及抗體反應(yīng)[3]?？谷饲虻鞍孜⒅z法是利用抗人球蛋白與紅細(xì)胞發(fā)生抗原抗體反應(yīng)后特異性凝集，在離心機(jī)向下離心力作用下分離凝集和游離紅細(xì)胞，之后通過觀察凝膠柱中紅細(xì)胞凝集的位置來判斷配血是否相合[4]。兩種方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，可能適用于不同情況?；诖?，本研究對比抗人球蛋白微柱凝膠法和凝聚胺法應(yīng)用于交叉配血中的價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料 獲得患者及家屬同意并簽署知情同意書后，隨機(jī)抽取我院2020年6月～2021年6月收治的需輸血治療患者360例，分別采用凝聚胺法、抗人球蛋白微柱凝膠法進(jìn)行交叉配血。其中男177例，女183例；年齡0～76歲，平均（37.74±9.62）歲；既往史：輸血史165例，妊娠史100例；病因：血液系統(tǒng)疾病77例，自身免疫系統(tǒng)疾病62例，腫瘤49例，手術(shù)需要113例，其他59例。本研究經(jīng)我院倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法 凝聚胺法及抗人球蛋白微柱凝膠法的實(shí)驗操作均嚴(yán)格按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》、試劑及儀器產(chǎn)品說明書規(guī)范操作流程進(jìn)行。

1.2.1 試劑及儀器 凝聚胺法中使用的試劑由中山生科試劑儀器有限公司提供，紅細(xì)胞懸液濃度約為4%；抗人球蛋白微柱凝膠法中使用的試劑和儀器由西班牙戴安娜公司提供，紅細(xì)胞懸液濃度為1%。

1.2.2 凝聚胺法 將血液標(biāo)本放置于離心機(jī)離心處理后配置為紅細(xì)胞懸液，準(zhǔn)備主、次側(cè)試管，取受血者2滴血漿和供血者1滴紅細(xì)胞懸液加入主側(cè)試管中，同時取供血者2滴血漿和受血者1滴紅細(xì)胞懸液加入次側(cè)試管中；之后分別加入0.6ml低離子介質(zhì)液在主、次側(cè)試管中混勻，于室溫下靜置1min，然后分別取1滴凝聚胺溶液加入主、次側(cè)管中混勻，靜置20s后，在離心機(jī)內(nèi)以3 500r/min的轉(zhuǎn)速離心15s；棄上清液，輕搖試管，觀察試管內(nèi)是否出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，若無則重復(fù)以上操作直至凝集；取1滴解聚液分別滴入主、次側(cè)管中，輕搖試管，若在60s內(nèi)肉眼及鏡下凝集均散開，表明配血相合，試驗結(jié)果為陰性；若在60s內(nèi)凝集未散開，表明配血不合，試驗結(jié)果為陽性。

1.2.3 抗人球蛋白微柱凝膠法 將血液標(biāo)本放置于離心機(jī)離心處理后配置為紅細(xì)胞懸液，準(zhǔn)備抗人球蛋白檢測卡，標(biāo)記主、次側(cè)。取供血者50μl的1%紅細(xì)胞懸液和受血者25μl血清或血漿滴入主側(cè)凝膠管中，取受血者50μl紅細(xì)胞懸液和供血者25μl血清或血漿滴入次側(cè)凝膠管中；分別放置于孵育器37℃下溫孵15min后，在離心機(jī)內(nèi)以1 500r/min離心9min；于白色背景下觀察結(jié)果，若紅細(xì)胞全部沉積于主、次側(cè)凝膠底部，表明配血相合，試驗結(jié)果為陰性；若主、次側(cè)任一凝膠管表面或中部有紅細(xì)胞，表明配血不合，試驗結(jié)果為陽性。

1.3 觀察指標(biāo)和評價標(biāo)準(zhǔn) 比較兩種不同配血方法的操作時間、試驗結(jié)果（總陽性率、主側(cè)陽性率、次側(cè)陽性率）并分析配血不合的原因。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料用%表示，采用χ2檢驗；計量資料用±s表示，采用t檢驗，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩種不同配血方法操作時間對比 抗人球蛋白微柱凝膠法操作時間為（31.35±5.65）min，長于凝聚胺法的（15.06±3.34）min，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=47.092，P<0.001）。

2.2 兩種不同配血方法試驗結(jié)果對比 抗人球蛋白微柱凝膠法總陽性率、主側(cè)陽性率、次側(cè)陽性率均高于凝聚胺法，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 兩種不同配血方法試驗結(jié)果對比[n（%）]

2.3 兩種不同配血方法配血不合原因?qū)Ρ?抗人球蛋白微柱凝膠法與凝聚胺法配血不合原因?qū)Ρ?，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表2。

表2 兩種不同配血方法配血不合原因?qū)Ρ萚n（%）]

3 討論

輸血治療可增加患者血容量，糾正休克，挽救患者生命，但若輸血不當(dāng)，引起的不良反應(yīng)也會危及患者生命[5]。輸血治療的前提是進(jìn)行交叉配血檢測，若配血試驗結(jié)果顯示主側(cè)陽性，則不能輸血；若次側(cè)陽性，則需減少輸血[6]。目前常采用的交叉配血檢測方法為凝聚胺法及抗人球蛋白微柱凝膠法。凝聚胺法操作簡單、快捷，便于觀察，但準(zhǔn)確度較低；抗人球蛋白微柱凝膠法標(biāo)準(zhǔn)化較高，可重復(fù)檢測，結(jié)果穩(wěn)定，敏感性較好，但耗時較長[7]。有研究顯示[8]，輸血不良反應(yīng)的發(fā)生與免疫性疾病、血液系統(tǒng)疾病等有關(guān)，因此輸血前需充分了解患者病情、輸血史及用藥等情況，從而選擇既適用于患者病情，又可以提高準(zhǔn)確性及敏感性的配血方法，進(jìn)而加強(qiáng)輸血安全性。

在本研究中，抗人球蛋白微柱凝膠法的操作時間長于凝聚胺法，抗人球蛋白微柱凝膠法總陽性率（8.61%）、主側(cè)陽性率（3.33%）、次側(cè)陽性率（5.28%）均高于凝聚胺法（3.33%、1.11%、2.22%），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），說明抗人球蛋白微柱凝膠法較費(fèi)時，但敏感性更高，而凝聚胺法更省時，但準(zhǔn)確率較低。可能的原因是凝聚胺法操作簡單，等待時間較短，可短時間內(nèi)觀察到試驗結(jié)果，凝聚胺分子是帶有高價陽離子的多聚季銨鹽，溶解后大量的正電荷被釋放，之后與紅細(xì)胞表面的唾液酸負(fù)電荷中和，縮短紅細(xì)胞間距，發(fā)生非特異性凝集，期間IgG抗體也會直接凝集紅細(xì)胞；加入解聚液后使凝聚胺發(fā)生的凝集分散，表明配血相合，試驗結(jié)果為陰性；而抗原抗體間的引力增加，特異性凝集不散，表明配血不合，試驗結(jié)果為陽性。但其操作過程中易受環(huán)境影響，穩(wěn)定性較差，且對紅細(xì)胞懸液濃度要求較高，又依賴于操作人員對反應(yīng)終點(diǎn)與結(jié)果的經(jīng)驗判斷，準(zhǔn)確率較低?？谷饲虻鞍孜⒅z法的原理是紅細(xì)胞可與相應(yīng)抗體在凝膠柱上方反應(yīng)發(fā)生特異性凝集，在離心力的作用下，若紅細(xì)胞與抗體結(jié)合凝集成團(tuán)，則無法通過凝膠顆粒間縫隙，停留于凝膠表面或中部，表明配血不相合，試驗結(jié)果為陽性；若紅細(xì)胞未與抗體反應(yīng)，呈分散狀態(tài)，則可通過凝膠顆粒間縫隙抵達(dá)凝膠底部，表明配血相合，試驗結(jié)果為陰性[9]。其操作簡單，客觀性較好；也可重復(fù)檢測，結(jié)果穩(wěn)定，可避免標(biāo)本資源浪費(fèi)；同時可減少人為誤差，敏感度較高，但操作過程中需要溫孵及離心時間較長，不利于急診重癥患者搶救。馬慶宗等[10]研究指出，抗人球蛋白微柱凝膠法敏感性較高，但操作耗時較長，不適合在急診配血過程中應(yīng)用，更適合應(yīng)用于批量標(biāo)本配血；而凝聚胺法相對更為快速，但是存在漏檢，適合于在急診配血過程中應(yīng)用，與本研究結(jié)果一致。

妊娠史、輸血史及血液系統(tǒng)疾病患者由于輸血、妊娠等刺激產(chǎn)生免疫性抗體，吸附于紅細(xì)胞上，從而引起配血次側(cè)凝集現(xiàn)象；腫瘤患者自身易暴露紅細(xì)胞相關(guān)抗原，纖維蛋白升高，進(jìn)而發(fā)生凝集反應(yīng)；自身免疫系統(tǒng)疾病患者易產(chǎn)生自身紅細(xì)胞、白細(xì)胞抗體，可凝集自身及他人紅細(xì)胞，使交叉配血不合率增加[11]。在本研究中，抗人球蛋白微柱凝膠法與凝聚胺法配血不合原因?qū)Ρ炔町悷o統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），說明疾病對兩種方法配血不合無明顯影響。彭鈺茹等[12]研究也指出，抗人球蛋白微柱凝膠法與凝聚胺法配血不合的原因主要有血液疾病、自身免疫性疾病，且兩種方法對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。本研究選取的樣本量相對較少，研究結(jié)果可能存在偏倚，可擴(kuò)大樣本量進(jìn)行下一步研究，進(jìn)而提供更有價值的研究結(jié)果。

綜上所述，抗人球蛋白微柱凝膠法敏感性高，重復(fù)性好，結(jié)果穩(wěn)定，便于保存結(jié)果，可在常規(guī)輸血中使用，但其操作較耗時，不適用于急診輸血，而凝聚胺法可節(jié)省時間，適用于搶救輸血。