枸櫞酸莫沙必利片質(zhì)量標準中含量及其均勻度檢測方法修訂探討

仝桂平 畢天琛 楊國寧 蔡文利

枸櫞酸莫沙必利片是一種新型胃動力藥，主要用于功能性消化不良伴有的胃灼熱、噯氣、惡心嘔吐、早飽、上腹脹痛等消化道癥狀，現(xiàn)行標準的含量及含量均勻度采用紫外分光光度法測定，收載于《國家藥品標準》新藥轉(zhuǎn)正標準第43冊[1]。為貫徹國家對藥品檢驗標準嚴謹?shù)囊螅P者在以往的檢驗工作中發(fā)現(xiàn)，紫外分光光度法測定所用溶劑操作過程中易揮發(fā)，結(jié)果存在不穩(wěn)定性。參考有關(guān)文獻[2-5]，經(jīng)過試驗，本文建立了枸櫞酸莫沙必利片的含量及含量均勻度測定的高效液相色譜法（HPLC），并與紫外分光光度法進行了比較，方法驗證結(jié)果表明，建立的方法準確可靠，專屬性強，可為該藥品質(zhì)量標準修訂提供參考。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

XS105型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多，精密度0.01 mg），Agilent1260高效液相色譜儀（美國安捷倫），F(xiàn)RQ-1010T型號超聲波清洗儀（杭州法蘭特超聲波科技有限公司），Advantage A10超純水儀（德國默克密理博）。

1.2 試藥與試劑

枸櫞酸莫沙必利對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100656-20193，按C21H25ClFN3O3·C6H8O7計，含量94.2%）；枸櫞酸莫沙必利片（規(guī)格：5 mg/片，企業(yè)A批號：25201212、25201207，企業(yè)B批號：124191004、124191013，企業(yè)C批號：200506、210408）；枸櫞酸鈉為分析純，水為超純水，乙腈為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：枸櫞酸鹽溶液（取枸櫞酸鈉8.82 g，加水至1 000 ml，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至4.0）-乙腈（60∶40）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：274 nm；柱溫：30 ℃；進樣量：20 μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 精密稱取枸櫞酸莫沙必利對照品0.100 3 g，置50 ml容量瓶中，加乙腈-水（40∶60）適量，超聲（功率：500 W，頻率：42 kHz）溶解稀釋至刻度，搖勻，即得對照品貯備液；精密量取5 ml，置50 ml容量瓶中，加乙腈-水（40∶60）稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 取供試品20片，精密稱定，研細，精密稱取（約相當(dāng)于枸櫞酸莫沙必利10 mg）適量，置50 ml容量瓶中，加乙腈-水（40∶60）適量，超聲（功率：500 W，頻率：42 kHz）溶解并定容，搖勻，濾過，作為供試品溶液。

2.2.3 陰性溶液 按處方比例，同“供試品溶液”項下的方法制備不含枸櫞酸莫沙必利的陰性溶液。

2.3 系統(tǒng)適用性

精密量取2.2.1項下對照品溶液20 μl，注入液相色譜儀，理論板數(shù)按莫沙必利峰計算應(yīng)不低于5 000，主峰和相鄰雜質(zhì)峰的分離度大于1.5。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系 精密量取2.2.1項下對照品貯備液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0 ml，分別置10 ml量瓶中，加乙腈-水（40∶60）稀釋至刻度，制成不同濃度的對照品溶液，按2.1項下色譜條件依法測定，記錄峰面積。以濃度（X，mg/ml）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸分析，枸櫞酸莫沙必利濃度在0.020 06～0.802 4 mg/ml內(nèi)線性關(guān)系良好，得回歸方程Y=29 491X+237.64（r=0.999 5，n=6）。

2.4.2 精密度 取2.2.1項下對照品溶液，按2.1項下色譜條件依法測定6次，測得枸櫞酸莫沙必利峰面積的相對標準偏差（RSD）為0.22%（n=6），表明儀器進樣精密度良好。

2.4.3 專屬性 精密吸取2.2項下對照品溶液、供試品溶液、陰性溶液各適量，按2.1項下色譜條件進樣測定，結(jié)果陰性溶液色譜圖中無干擾峰，表明本方法的專屬性良好。見圖1。

圖1 高效液相色譜

2.4.4 重復(fù)性 精密稱取企業(yè)A批號25201212的樣品適量，按2.2.2項下方法制備6份供試品溶液，按2.1項下色譜條件依法測定，記錄峰面積，計算含量。結(jié)果枸櫞酸莫沙必利標示含量平均值為99.10%，RSD為0.24%（n=6）。

2.4.5 加樣回收 精密稱取企業(yè)A批號2520121的樣品6份，分置50 ml容量瓶中，分別精密加入枸櫞酸莫沙必利對照品貯備液2.5 ml，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，2.1項下色譜條件依法測定，記錄峰面積，計算回收率。平均回收率為99.02%，RSD為0.60%，表明回收率符合要求。見表1。

表1 枸櫞酸莫沙必利加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2.4.6 穩(wěn)定性 取2.2.2項下供試品溶液，分別于室溫下放置0、2、4、6、8、10、12、24 h，按2.1項下色譜條件依法測定，記錄峰面積。結(jié)果枸櫞酸莫沙必利峰面積的RSD為0.28%（n=8），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 檢出限與定量限

取2.2.1項下對照品溶液，加乙腈-水（40∶60）逐步稀釋，以10倍信噪比與3倍信噪比計算定量限與檢測限，結(jié)果分別為0.2 μg/ml、0.1 μg/ml。

2.6 樣品含量及含量均勻度測定

含量測定：分別取1.2項下提供的6批枸櫞酸莫沙必利片，按2.2.2項下方法制備供試品溶液，按2.1項下色譜條件依法測定，按外標法以峰面積計算無水枸櫞酸莫沙必利的標示量，所得結(jié)果與紫外分光光度法的含量結(jié)果進行比較。兩種方法的含量測定結(jié)果無明顯差異。見表2。

含量均勻度測定：取1.2項下提供的6批枸櫞酸莫沙必利片，每批10片，分別置25 ml量瓶中，加乙腈-水（40∶60）適量，超聲（功率：500 W，頻率：42 kHz）溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過；按2.1項下色譜條件依法測定，記錄峰面積，計算含量，按2020年版《中華人民共和國藥典》（四部）含量均勻度檢查法[6]，計算A+2.2S的值，所得結(jié)果與紫外分光光度法測定的含量均勻度結(jié)果進行比較。兩種方法的含量均勻度結(jié)果無明顯差異。見表2。

表2 兩種方法枸櫞酸莫沙必利含量及含量均勻度測定結(jié)果

2.7 耐用性

考察3根不同型號的色譜柱，結(jié)果表明不同型號的色譜柱對枸櫞酸莫沙必利片含量測定結(jié)果無明顯影響。見表3。

表3 耐用性試驗結(jié)果(%,n=6)

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

利用DAD的在線掃描功能，在190～400 nm波長范圍內(nèi)對對照品溶液進行掃描。莫沙必利在225 nm、274 nm、318 nm波長處有最大吸收。225 nm波長處溶劑峰較大，310 nm波長處與主峰相鄰雜質(zhì)峰未檢測出。因此測定波長確定為274 nm。

3.2 流動相的選擇

預(yù)實驗中比較了0.2%十二烷基硫酸鈉的乙腈-水-甲醇-冰醋酸、0.05 mol/L枸櫞酸溶液（用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至4.0）-乙腈、枸櫞酸鹽溶液（取枸櫞酸鈉8.82 g，加水至1 000 ml，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至4.0）-乙腈、枸櫞酸鹽溶液（pH3.3）-乙腈等多組流動相系統(tǒng)，結(jié)果以枸櫞酸鹽溶液（pH4.0）-乙腈為流動相時，莫沙必利色譜峰對稱性好，拖尾因子在0.99～1.01。考察了枸櫞酸鹽溶液（pH4.0）-乙腈體系3種流動相比例（50∶50、60∶40、70∶30）對測定結(jié)果的影響，綜合系統(tǒng)適用性要求及檢驗時間成本，選擇枸櫞酸鹽溶液（pH4.0）-乙腈（60∶40）作為本研究流動相。

3.3 方法的評價

將紫外分光光度法與HPLC測定的含量結(jié)果兩兩進行配對樣品t檢驗（α=0.05），P值為0.744，說明兩種方法測得結(jié)果無顯著性差異。

紫外分光光度法采用乙醇為溶劑，在測定過程中 溶劑易揮發(fā)，穩(wěn)定性差，導(dǎo)致含量測定結(jié)果不穩(wěn)定。本研究建立的試驗方法，克服了這一現(xiàn)象，測定結(jié)果的穩(wěn)定性明顯提高，該方法結(jié)果準確可靠，靈敏度高，專屬性強，可為該藥品質(zhì)量標準修訂提供參考。

（收稿日期：2022-01-27）