乙肝病毒感染對男性精液參數及相關功能的影響*

戚青林，彭 潔，王 晶

江西省萍鄉市婦幼保健院生殖健康科，江西萍鄉 337000

乙型肝炎(簡稱乙肝)作為一種由乙肝病毒(HBV)感染所導致的傳染性疾病，給人民的身體健康帶來嚴重威脅[1]。有研究表明，HBV可以自由通過血睪屏障侵入到男性生殖細胞核中整合在宿主染色質中，對男性生殖功能造成不同程度損傷，影響其精子質量[2]。目前，對HBV感染影響精子質量的程度及發病機制尚未完全闡明，且僅研究HBV對精液常規、精子畸形率等精液基本參數的影響[3]。本研究對HBV感染男性患者精液常規參數、抗精子混合球蛋白試驗結合率(R)、精子存活率、精子自發性頂體反應率、精子正常形態率及精子DNA碎片率變化情況，以及HBV感染與精子運動、精子表面結合抗體水平、精子頂體反應潛能、精子形態功能及精子染色體完整性的關系進行分析比較，綜合探討HBV感染與男性精液參數及相關功能的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年1月至2021年9月來本院生殖健康科就診的HBV感染男性患者50例作為研究對象，根據HBV感染情況分為小三陽組(乙肝表面抗原、乙肝e抗體、乙肝核心抗體陽性)和大三陽組(乙肝表面抗原、乙肝e抗原、乙肝核心抗體陽性)，每組各25例。另選取同期HBV未感染男性患者50例作為對照組。所有患者年齡20～46歲，平均 (33.54±5.52 )歲；沒有采取任何避孕措施患者夫妻雙方性生活正常1年以上未孕，未感染其他病原微生物，排除睪丸附睪等異常。本研究獲得本院倫理委員會批準同意。

1.2 參數及檢測方法 所有患者取精液前禁欲2～7 d，采用手淫法取精液，將精液全部射入取精液杯中，置于37 ℃恒溫培養箱中，精液完全液化后按照《WHO人類精液檢查與處理實驗室手冊》(第 5 版)標準對所有精液標本進行精液常規、R、精子存活率、精子自發性頂體反應率、精子正常形態率及精子DNA碎片率等檢測。

1.2.1 精液常規 采用上海北昂彩色精子質量檢測分析儀進行精液常規分析并計算精液量、精子濃度、精子活力[包括前向運動精子比率(PR)、非前向運動精子比率、不動精子比率3個級別]。

1.2.2 R 采用安徽安科生物工程(集團)股份有限公司抗精子結合抗體檢測試劑盒(混合抗球蛋白凝集法)進行R檢測，參照《WHO人類精液檢查與處理實驗室手冊》(第 5 版)標準，R=黏附于膠乳顆粒的活動精子數/計數的總活動精子數×100%，R>50%為抗精子抗體(AsAb)陽性，R≤50%為AsAb陰性。

1.2.3 精子存活率 采用伊紅染色法檢測精子存活率，精子存活率≥58.00%為正常，<58.00%為異常。精子存活率檢測試劑盒購于安徽安科生物工程(集團)股份有限公司。

1.2.4 精子自發性頂體反應率 采用精子頂體染色試劑盒(PSA-FITC染色法)檢測精子自發性頂體反應率，精子自發性頂體反應率≥10%為陽性,<10%為陰性。精子頂體染色試劑盒購于安徽安科生物工程(集團)股份有限公司。

1.2.5 精子正常形態率 采用改良巴氏染色法檢測精子正常形態率，精子正常形態率≥4%為正常，<4%為異常。精子正常形態率檢測試劑購于珠海貝索生物技術有限公司。

1.2.6 精子DNA碎片率 采用染色質擴散法檢測精子DNA碎片率，精子DNA碎片率≤15%為正常，>15%為陽性。精子 DNA 碎片率檢測染色試劑盒購于安徽安科生物工程(集團)股份有限公司。

2 結 果

2.1 3組患者年齡和精液常規參數比較 對照組、小三陽組、大三陽組患者年齡和精液量比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子濃度、PR、精子活力均有不同程度降低，差異均有統計學意義(P<0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子濃度有所下降，差異有統計學意義(P<0.05)；大三陽組患者PR、精子活力雖稍有變化，但差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 3組患者年齡和精液常規參數比較

2.2 3組患者R和AsAb陽性結果比較 與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者R雖稍有變化,但差異均無統計學意義(P>0.05)；與小三陽組比較，大三陽組患者R雖稍有降低，但差異無統計學意義(P>0.05)。3組患者AsAb陽性均為0例，AsAb陽性率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 3組患者R和AsAb陽性結果比較

2.3 3組患者精子存活率比較 與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子存活率均有不同程度降低，差異均有統計學意義(P<0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子存活率雖有所升高，但差異無統計學意義(P>0.05)。對照組、小三陽組、大三陽組患者精子存活陽性率(精子存活率<58.00%)分別為14.00%、56.00%、36.00%，小三陽組和大三陽組均高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；但小三陽組和大三陽組患者精子存活陽性率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表3。

表3 3組患者精子存活率比較

2.4 3組患者精子自發性頂體反應率比較 與對照組比較，小三陽組患者精子自發性頂體反應率雖有所降低，大三陽組患者雖有所升高，但差異均無統計學意義(P>0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子自發性頂體反應率雖稍有升高，但差異無統計學意義(P>0.05)。對照組、小三陽組和大三陽組患者精子自發性頂體反應陽性患者均為0例，3組患者精子自發性頂體反應陽性率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表4。

表4 3組患者精子自發性頂體反應率比較

2.5 3組患者精子正常形態率比較 與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子正常形態率均有不同程度降低，差異均有統計學意義(P<0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子正常形態率雖有所降低，但差異無統計學意義(P>0.05)。對照組、小三陽組、大三陽組患者精子異常形態陽性率分別為20.00%、56.00%、40.00%，小三陽組和大三陽組患者精子異常形態陽性率均高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；但小三陽組和大三陽組患者精子異常形態陽性率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表5。

表5 3組患者精子正常形態率比較

2.6 3組患者精子DNA碎片率比較 與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子DNA碎片率均有不同程度升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子DNA碎片率雖有所升高，但差異無統計學意義(P>0.05)。對照組、小三陽組、大三陽組患者精子DNA碎片陽性率分別為8.00%、56.00%、36.00%，小三陽組和大三陽組均高于對照組，差異均有統計學意義(P<0.05)；但小三陽組和大三陽組患者精子DNA碎片率比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表6。

表6 3組患者精子DNA碎片率比較

3 討 論

近年來，隨著不育人群數量增多，對其不育的影響的研究也越來越廣泛[4]。有研究發現，病毒感染是導致人類生育力降低的重要原因之一[5]。HBV不但可以自由通過血睪屏障進入到男性睪丸生殖細胞中，而且還可以通過整合到男性生殖細胞的染色體上垂直傳給后代，并導致男性自身精子功能降低[6]。

關于HBV感染對男性精液質量影響的報道不多，且大部分相關研究僅籠統將HBV感染患者作為試驗組，未將其進一步細化分為小三陽和大三陽進行研究。對于HBV感染后是否會對男性造成免疫性不育，是否會影響精子功能，是否會導致精子染色質異常的研究目前國內外報道甚少。相關研究僅探討了HBV感染對精液常規、精子畸形率等精液基本參數的影響，且各研究結果不一致[7]。有研究表明,HBV感染使男性患者精液常規各參數(如精液量、精子濃度、精子活力)降低[8]。最近有研究分析發現，HBV陽性組和陰性組精液量、精子濃度比較，差異均無統計學意義(P>0.05)，但是陽性組精子活率明顯低于陰性組，差異有統計學意義(P<0.05)[9]。本研究結果顯示，3組患者年齡和精液量比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子濃度、PR、精子活力均有不同程度降低，差異均有統計學意義(P<0.05)。本研究證實，HBV感染對男性患者精子濃度、精子活力均產生負面影響。本研究發現，與小三陽組比較，大三陽組患者精子濃度有所下降，差異有統計學意義(P<0.05)，表明HBV處于復制活躍期對精子濃度的負面影響更大。

監測精子表面結合抗體水平是診斷男性免疫性不育的重要指標，其中最常用的檢測方法為混合抗球蛋白凝集法[10]。本研究結果顯示，與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者R雖稍有變化,但差異無統計學意義(P>0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者R雖稍有降低，但差異無統計學意義(P>0.05)。本研究結果表明，HBV感染不會引起男性患者精子表面AsAb發生明顯變化，不會導致男性免疫性不育。

精子存活率能夠間接反映男性精子受精能力[11]。本研究發現，與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子存活率均有不同程度降低，差異均有統計學意義(P<0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子存活率雖有所升高，但差異無統計學意義(P>0.05)。本研究結果表明，HBV感染會導致男性患者精子活力降低，這與相關研究結果一致[12]。

精子發生頂體反應，使精子頂體酶溶解卵子透明帶，幫助精子穿越卵子透明帶實現精子和卵子結合，進而完成受精[13]。有研究表明，HBV感染會影響精子頂體酶活性，使精子頂體酶活性明顯降低[14]。本研究發現，與對照組比較，小三陽組患者精子自發性頂體反應率雖有所降低，大三陽組患者精子自發性頂體反應率雖有所升高,但差異均無統計學意義(P>0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子自發性頂體反應率雖稍有升高，但差異無統計學意義(P>0.05)。本研究結果表明，HBV感染不會影響精子頂體反應功能，推測HBV感染可能只導致了精子質膜破損，并未對頂體結構本身造成損傷。

男性精子形態學觀察是不育診斷的主要指標，畸形精子比率過高會導致精子體外受精成功率降低，從而降低男性的生育能力[15]。有研究報道發現，HBV感染會導致男性精子形態率降低[16]。本研究發現，與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子正常形態率均有不同程度降低，差異均有統計學意義(P<0.05)。本研究結果進一步證實了HBV感染會影響精子形態，使精子正常形態率降低。

精子DNA完整性對維持男性精子功能正常起重要作用[17]。有研究結果表明，HBV感染會降低精子染色體結構的穩定性，導致精子非整倍體增加，從而加重精子DNA損傷，使精子DNA碎片增加[18]。本研究發現，與對照組比較，小三陽組和大三陽組患者精子DNA碎片率均有不同程度升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。與小三陽組比較，大三陽組患者精子DNA碎片率雖有所升高，但差異無統計學意義(P>0.05)。本研究結果表明，HBV感染會增加男性患者精子DNA損傷，使精子DNA碎片率增加，這與相關研究結果一致[19]。

綜上所述，HBV感染不僅會對精子濃度、PR、精子活力、精子畸形率等精液常規參數造成負面影響，并且還會影響精子染色體結構的穩定性，導致精子DNA碎片率增加，從而降低男性生育力。因此，臨床醫生應該對HBV感染男性患者進行積極治療，對改善其精子質量起重要作用。