黃顙魚養殖中遲鈍愛德華細菌的抗生素、生物防治試驗

簡康

（濟寧市漁業發展和資源養護中心，山東 濟寧 272115）

黃顙魚（），俗稱昂刺魚（黃骨魚，黃拉丁，嘎魚），屬鯰形目，鲿科，黃顙魚屬，是常見的底棲雜食性魚類，在我國大部分地區的天然水體中均有分布。其肉質嫩、細刺少、味鮮美、營養價值高，在日本、韓國、東南亞等國家有巨大的市場，是出口創匯的優良品種，也是濟寧地區近幾年主要推廣品種之一。黃顙魚在自然水域中生長速度緩慢，上市規格小，無法滿足市場的需求,因而黃顙魚市場售價高，養殖效益較好。在養殖過程中，黃顙魚體常感染遲鈍愛德華細菌，出現“紅頭病”癥狀，給漁業養殖戶造成了損失。濟寧市漁業發展和資源養護中心于2015年對黃顙魚養殖過程中出現的主要病害“紅頭病”，進行了致病菌的鑒定以及抗生素、生物防治試驗，旨在解決黃顙魚“紅頭病”難防難治的問題。

1 材料與方法

1.1 池塘

試驗地位于濟寧市水產良種繁育基地3個標準化池塘，分別為1—3號，其中3號池塘為對照池塘。面積均約0.1 hm，水深均約1.5 m，底泥厚均約25 cm，其進水排水方便，水質良好，每個池塘均符合標準化池塘相關要求。

放魚前15 d，對池塘干法清塘消毒，每667 m使用生石灰75～90 kg全池潑灑。每個池塘中心位置安裝1臺3 kW的增氧機。池塘消毒后第2 d，加注水至0.8～1.0 m深；第3 d，按4 500 kg/hm投入發酵好的腐熟有機肥，培育水體天然餌料；第10天，加注水至1.5 m深，再用225 kg/hm漂白粉全池潑灑；第16天投放魚苗。

1.2 苗種放養

試驗苗種符合檢驗檢疫要求，體格健壯，規格為20～40 g/尾，無出血、爛鰓、腸炎等疫病現象。于4月30日投放，密度為30 000尾/hm。

1.3 日常管理

于每日早、中、晚巡塘，認真觀察魚類活動、攝食與生長情況，遇到問題及時處理。池塘每隔10 d注入20～30 cm新水，陰雨悶熱高溫天氣要及時開啟增氧機。飼料投喂按照“定質、定時、定位、定量”要求，投飼量以1 h內吃完為宜。黃顙魚開口料以粒徑2.0～5.0 mm顆粒飼料為主，成魚料以5.0 mm顆粒飼料為主，一般以浮性餌料為主。池水的pH值為7.0～8.0，以保證魚類正常生長。每隔15 d，用300 kg/hm生石灰全池潑灑消毒1次，改善水質。

2 試驗

2.1 儀器與試劑

恒溫培養箱、無菌工作臺、生物顯微鏡、血球計數板、18 mm×180 mm試管、高壓滅菌鍋、100～1 000μL移液槍及槍頭。

MHA培養基、0.65%無菌生理鹽水、PCA培養基。

2.2 魚種

8月中旬，黃顙魚魚種生長至體長（12±1）cm時，可以開始池塘內致病菌潑灑感染試驗。

2.3 菌液灑

2.3.1 潑灑濃度

遲鈍愛德華細菌的菌液在37℃下培養48 h后，經過血球計數板稀釋后計數，濃度達到10cfu/mL。每個池塘各潑灑2 000 mL發酵后的菌液。

2.3.2 潑灑劑量

菌液潑灑劑量3個池塘均一樣。

2.3.3 觀察池塘

觀察周期為4周，遲鈍愛德華細菌潑灑到池塘之后，時刻關注3個池塘內黃顙魚的吃食、活動、水質情況等。池塘中的黃顙魚如果出現明顯吃食量下降、巡邊獨游、在水中旋轉等現象，需詳細記錄。發現死魚，撈出后進行無害化處理。每次投喂需定量并記錄。

2.3.4 水質檢測

試驗開始前1 d，檢測1次池塘水樣，參數為pH值、水溫、化學需氧量（COD）、氨氮、亞硝態氮；感染致病菌之后24 h、96 h各檢測水質1次。魚體出現明顯癥狀后，每隔5 d檢測1次，連續28 d，水質采樣依照《水質采樣技術指導》（HJ 494—2009）要求執行。

2.3.5 治療方案

菌液灑潑灑3個池塘，其中3號池為對照池塘，潑灑之后不采取任何防治措施，1號池、2號池塘在潑灑遲鈍愛德華細菌的同時進行病害防治處理。試驗結束后，對池塘魚回捕。

2.3.5.1 生物防治

1號池塘選擇益生菌（益生菌為實驗室從土壤中分離的枯草芽孢桿菌）進行生物防治。開始感染時，池塘同時潑灑致病菌和益生菌；此后每隔5 d潑灑1次益生菌，持續4周，每日記錄池塘情況。試驗結束后，對池塘魚回捕，記錄捕獲的健康黃顙魚數量。

2.3.5.2 抗生素治療

2號試驗池選擇諾氟沙星、恩諾沙星進行綜合治療（因為遲鈍愛德華細菌容易對抗生素產生耐藥性）。藥物拌在飼料中，配比為1 kg飼料中加入1 g恩諾沙星和1 g諾氟沙星。拌藥飼料每天定時定點投喂，分別于11：00、17：00各投喂1次。發病癥狀出現之后，治療持續2周，然后對魚類回捕，統計存活試驗魚數量，計算死亡率。

3 結果與分析

3.1 結果

采用不同處理方案的養殖試驗結果見表1。由表1可見，1號池塘采用益生菌進行生物防治，發病魚最少；2號池塘在發病時及時采取敏感抗生素治療，疫情也得到了有效控制；不采取任何防治措施的3號池塘發病情況嚴重。

表1 采用不同處理方案的養殖試驗結果

3.2 池塘水質參數

水體pH值、水溫、COD值的監測持續了4周，測定了7次，結果發現水體pH值沒有明顯變化，池塘水溫維持在25～26℃，也沒有明顯變化。1號池塘的COD值為0.25～0.53 mg/L，隨時間的變化持續降低；2號池塘COD值為0.40～0.51 mg/L，先降低后逐步升高。3號池塘COD值為0.52～0.76 mg/L，隨時間延長逐漸升高，反映出水體在噴灑致病菌后，水質有惡化趨勢，見表2。

表2 不同處理方案的池塘COD監測結果 mg/L

不同處理方案的池塘氨氮監測結果見表3。由表3可見，1號池7次測定的氨氮值為1.77～0.98 mg/L，呈現逐漸下降趨勢；2號池的氨氮值為1.72～1.99 mg/L，呈現逐漸升高趨勢；3號池氨氮為1.74～2.57 mg/L，升高幅度大于2號池。

表3 不同處理方案的池塘水質氨氮監測結果 mg/L

不同處理方案的池塘水質亞硝態氮監測結果見表4。由表4可見，1號池的亞硝態氮值隨時間的變化持續降低，從0.220 mg/L降低到0.091 mg/L。2號池亞硝態氮值變化較小。3號池塘亞硝態氮值隨時間變化略有升高，水質有惡化趨勢。

表4 不同處理方案的池塘水質亞硝態氮監測結果 mg/L

養殖試驗結束后黃顙魚回捕結果見表5。由表5可見，1號池塘無發病情況，且捕撈率達到94.2%；2號池塘回捕率也達到了83.3%；3號池塘回捕率只有19.6%，回捕率遠低于1號池塘、2號池塘，差距非常明顯。

表5 養殖試驗結束后黃顙魚回捕結果

4 結論

試驗結果證明，1號池噴灑的枯草芽孢桿菌能夠明顯抑制遲鈍愛德華細菌的生長，而且在池塘感染試驗過程中，明顯抑制池塘內黃顙魚的發病。2號池塘在出現發病癥狀之后第一時間進行抗生素的拌料投喂，雖然有魚發病死亡，但是經過25 d的治療，魚未發病死亡，基本遏制了遲鈍愛德華細菌造成的損失。3號池塘為對照池塘，感染之后出現大批持續死亡現象，說明在池塘內的遲鈍愛德華細菌濃度在持續增長，黃顙魚自身的免疫力可能降低，池塘持續有病魚、死魚出現。

池塘的COD、氨氮、亞硝態氮3個檢測指標的變化趨勢相近，均表現為1號池水質改善，2號池略有變化，3號池水質惡化的趨勢。試驗結果顯示，枯草芽孢桿菌對致病菌生長具有拮抗作用，能有效預防水產動物病害發生。

枯草芽孢桿菌菌體生長過程中產生的許多活性物質，如枯草菌素、制霉菌素、多黏菌素和短桿菌肽等，對致病菌或內源性感染的條件致病菌有明顯的抑制作用。

5 結語

試驗表明，采用生物防治方法，定期定量噴灑益生菌能夠明顯抑制致病菌遲鈍愛德華細菌繁殖，進而抑制黃顙魚“紅頭病”的發生。養殖生產中，如果池塘管理不善，不慎發生了黃顙魚“紅頭病”，應采用多種組合治療方案，一方面噴灑益生菌，抑制病菌生長，改善水質，提高存塘魚的免疫力；另一方面，采用恩諾沙星和諾氟沙星等敏感抗生素，及時治療，減少損失。