復合微生態制劑對新西蘭兔生長及免疫性能的影響

程菊芬，張立，周衛東*，盧明文，潘洪聯

(1.浙江省農業科學院 畜牧獸醫研究所，浙江 杭州 310021；2.浙江燈塔種豬有限公司，浙江 杭州 311107；3.浙江艾杰斯生物科技有限公司，浙江 杭州 310051)

幼兔在斷奶后面臨飼養環境改變、母源抗體降低、腸黏膜發育不完善、消化酶分泌不足等不利因素，容易發生以腹瀉為主的消化系統疾病，危害其生長發育，甚至死亡，嚴重影響養殖效益[1]。在全面“禁抗”后，具有保健、促生長功效的微生態添加劑已展現出良好的“替抗”效果與應用前景[2-3]。將酵母菌、酵母培養產物添加于飼料中，能明顯提升肉兔消化道健康水平與免疫機能。酵母菌體蛋白是動物不可或缺的營養成分，可改善腸道營養平衡性能，提高生產性能[4-5]。芽孢桿菌在動物腸道內增殖成為優勢菌群，可抑制病源菌的繁殖；芽孢桿菌產生的多種消化酶、維生素、氨基酸及生長刺激因子能直接達到促生長和提高飼料利用效率的目的。無論是單一還是多個菌種的芽孢桿菌，在疾病預防、促生長方面均有較多的研究報道[6-9]。

微生態制劑作為肉兔飼料添加劑的研究與應用，以單一或復合型芽孢桿菌制劑報道最多。有關酵母菌的研究多集中在酵母培養產物、兔腸道分離活酵母的應用試驗。外源性釀酒酵母可促進消化，價格低廉，但與枯草芽孢桿菌組合的研究未見報道。本研究以釀酒酵母+枯草芽孢桿菌組合微生態制劑為試驗材料，通過飼養試驗，評價不同劑量的微生態制劑對斷奶新西蘭幼兔的生長性能、腸道健康的影響，旨在為開發此類微生態高效組合添加劑提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料

復合微生態制劑由浙江艾杰斯生物科技有限公司提供，含釀酒酵母(活細胞數≥0.2億·g-1)和枯草芽孢桿菌(桿菌數≥0.1億·g-1)，載體為蒙脫石。

1.2 試驗動物分組與管理

選取30日齡斷奶、健康、體重基本一致的新西蘭肉兔96只，公母各半，作為飼養試驗兔。隨機選取公母兔各12只為1個組，共4個組，即試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和空白對照組。每只試驗兔在不銹鋼籠內獨立飼養，標注編號。試驗在半封閉式兔舍進行，全程飼喂顆粒飼料，自由采食、飲水。

1.3 試驗設計和日糧配制

采用單因素飼養試驗設計。每組24只兔，每只兔為1個重復。對照組投喂基礎日糧，其組成為玉米20%、麥麩15%、豆粕12%、苜蓿草粉30%、麥芽根17%、石粉1.5%、食鹽0.5%、復合預混料4.0%(復合預混料為每千克基礎飼料提供VA7 500 IU、VD33 000 IU、VE15 IU、銅3.0 mg、鐵80 mg、錳50 mg、鋅60 mg、賴氨酸1.20 g)，主要營養指標為消化能10.86%、粗蛋白質17.65%、粗纖維15.05%、粗脂肪3.75%、鈣1.86%、總磷0.65%、賴氨酸0.88%。

試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組在基礎日糧的基礎上依次添加0.10%、0.15%、0.20%的復合微生態制劑，各組日糧均制成顆粒料。試驗設預試期5 d，正式試驗期30 d。

1.4 指標測試

增重、采食量。在正式試驗開始和結束時，分別對兔子逐一空腹稱重，記錄試驗期內每只兔子的實際采食量，計算日增重、日采食量與全程料重比。

腹瀉、死亡數。每日觀察并記錄發病和死亡情況。腹瀉判定規則為每天早上定時觀察1次，糞便明顯變稀的個體記錄為腹瀉1次，試驗結束時，統計每組總腹瀉次數。

免疫指標。飼養試驗結束時，每組選擇12只試驗兔(公母各6只)，空腹采心臟血4 mL，待血液自然析出血清，分裝后保存于-20 ℃冰箱，用于分析免疫球蛋白指標；血清IgA、IgG、IgM的測定采用ELISA雙抗體夾心法。

1.5 統計分析

數據分析采用SPSS 22.0統計軟件，數據以平均值±標準差表示；采用卡方檢驗進行計數指標值比較。組間差異顯著性檢驗采用單因素方差分析(one-way ANOVA)和LSD法多重比較(P<0.05)。

2 結果與分析

2.1 復合微生態制劑對新西蘭肉兔生長性能影響

由表1可見，各組試驗初始體重一致，組間無差異；期末試驗組體重均高于對照組，其中，試驗Ⅲ組最高，顯著高于其他處理，試驗Ⅰ、Ⅱ組高于對照，但差異不顯著。試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組的日增重分別比對照組提高5.9%、3.8%、14.2%，差異顯著性同末重。試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組料重比分別比對照組下降3.5%、3.7%、7.2%，處理間差異不顯著。綜上可知，3個劑量的微生態制劑均能提高肉兔日增重、降低料重比，以0.2%微生態制處理最為顯著。

表1 復合微生態制劑對新西蘭肉兔生產性能的影響

2.2 復合微生態制劑對新西蘭肉兔腹瀉和死亡的影響

由表2可知，試驗組的個體腹瀉發生率均顯著低于對照組，且試驗Ⅲ組顯著低于Ⅰ和Ⅱ組，而試驗Ⅰ和Ⅱ組間無顯著差異。試驗組的死亡數均低于對照組，其中，Ⅲ組全程無死亡，Ⅰ、Ⅱ組死亡數均低于對照組，但與對照組差異顯著。結果表明，添加復合微生態后，幼兔死亡數下降趨勢較為明顯，3個添加量均明顯降低了幼兔的腹瀉發生率，其中高劑量組防腹瀉率效果最好，發生率比對照組低8.4百分點。

表2 復合微生態制劑對新西蘭肉兔腹瀉和死亡的影響

2.3 復合微生態制劑對新西蘭肉兔免疫球蛋白指標的影響

由表3可知，各試驗組血清IgG、IgA、IgM均較對照組有提高。其中，血清IgG值的各組間存在顯著差異，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別較對照組提高12.8%、14.4%、25.9%，Ⅲ組顯著高于Ⅰ和Ⅱ組；血清IgA值組間存在顯著差異，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別較對照組提高17.1%、8.6%、22.9%，Ⅲ組顯著高于Ⅱ組；血清IgM值組間存在顯著差異，試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別較對照組提高34.2%、28.9%、50.0%，Ⅲ組顯著高于Ⅰ和Ⅱ組。

表3 試驗兔血清免疫指標

3 討論

3.1 復合微生態制劑對新西蘭肉兔生長性能、腸道健康的影響

研究表明，日糧中添加0.2%酵母培養物，能顯著提高獺兔平均日增重，降低料重比，提高主要營養物質的表觀消化率[4]。由酵母菌、枯草芽孢桿菌、乳酸菌等組成的微生態制劑，活菌總數為0.67億·g-1的日糧，試驗組家兔的3周增重較對照組提高63%[10]。日糧中添加貝萊斯芽孢桿菌1.0億·g-1，30 d試驗期可使35日齡幼兔的日增重提高12.6%，飼料轉化效率提高13.1%；添加芽孢桿菌使試驗兔腸道有益菌數量增加，其中酵母菌數量增加2.2倍[5]。有學者分離出兔腸道中的芽孢桿菌、酵母菌等制成內源性微生物制劑，當活菌用量為3.2億·g-1試驗日糧時，試驗兔期末體重明顯增加，料肉比下降，促生長效果明顯優于商品型菌制劑[6]。從上述文獻可以得出，單一酵母培養物、活酵母、芽孢桿菌及酵母+芽孢桿菌復合菌均能有效改善幼兔的生長性能和飼料轉化率，這與本次試驗研究結果一致。

本試驗Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組試驗日糧中活菌含量(2/3釀酒酵母+1/3枯草芽孢桿菌)分別為0.30億、0.45億、0.60億·g-1，低、中劑量組改善生長性能的趨勢較明顯，而以高劑量組的效果最優。但也有報道指出，枯草芽孢桿菌飼料添加量在200億～600億·g-1時能提高日增重，400億·g-1時則顯著降低料重比[7]。不同試驗中，起作用的添加量間差異巨大，可能與試驗菌種來源不同及菌制劑的生產工藝差別有關。

幼兔腹瀉發生率與增重、飼料轉化效率間呈強負相關性。幼兔消化道功能尚未發育完善，對飼料消化、吸收能力不足，而枯草芽孢桿菌、酵母能產生多種消化酶，有利于維護腸道健康[6-7]。其次，益生菌在腸道中定殖，成為優勢菌群，有利于穩定小腸pH值與腸黏膜形態，從而大幅降低引起腹瀉的大腸埃希氏菌等致病菌數量[8-9]。本試驗中，試驗組的死亡數均低于對照組，添加益生菌顯著降低試驗組幼兔的腹瀉頻次，與文獻[3,6,10]得出的結果一致。由此推測，枯草芽孢桿菌、酵母組合通過減少腹瀉發生率從而實現日增重與飼料轉化率的提升。

3.2 復合微生態制劑對新西蘭肉兔血清免疫指標的影響

血清免疫球蛋白在體液免疫過程中發揮重要作用。在所有血清型免疫球蛋白中，通常IgG含量最高，在抗菌、抗病毒中發揮著重要作用。但動物免疫系統始終處于動態調節過程，該系統的總體機能狀態不穩定，當免疫系統受到一些病原微生物感染后，才引起免疫指標的變化。王衛正等[4]報道，酵母培養物可不同程度提高試驗獺兔的血清IgG、IgA、IgM濃度及免疫器官重，但添加劑量與抗體提升幅度并不完全一致。薛云等[7]報道，加入枯草芽孢桿菌制劑后，試驗兔血清IgA、IgG顯著高于對照組，胸腺重隨之增高。任永清等[8]報道，添加復合芽孢桿菌能顯著提高試驗肉兔血清IgM、腸黏膜分泌型IgA含量。飼喂芽孢桿菌0.06億·g-1日糧，第4周起血清IgA、IgG顯著高于對照組。飼喂0.1億·g-1組兔在5周起血清IgM顯著增加，其規律與生長性能結果相似[11]。多數文獻得到脾臟、胸腺等免疫器官指數與血清免疫球蛋白濃度間具有較高的一致性。本試驗中，IgG、IgA、IgM濃度有不同程度的提高，由此推測，酵母+芽孢桿菌分泌出某些活性物質，刺激免疫系統的快速成熟并提高機體免疫功能，是幼兔快速提升的重要原因。

4 小結

日糧中添加0.10%～0.20%的酵母+枯草芽孢桿菌復合微生態制劑，能提高斷奶幼兔的生長速度、飼料轉化率，降低死亡數量與腹瀉發生率，顯著提高血清中IgG、IgA、IgM等動物免疫力指標值。微生態制劑的功效隨著添加量增加而增強，本試驗條件下，以0.2%的酵母+枯草芽孢桿菌復合微生態制劑效果最優。