Ki-67、表皮生長因子受體在室管膜瘤中的表達及與患者預后的關系

王文濤，曹寧，張國來

1西北大學附屬醫院/西安市第三醫院神經外科，西安710021

2延安大學附屬醫院神經外科，陜西 延安7160000

室管膜瘤是一種低度惡性的中樞神經系統腫瘤，該腫瘤生長速度較慢，由于其發病部位較為特殊，可嚴重影響患者的身體功能和生命安全。流行病學統計數據顯示，室管膜瘤發生率較低，可見于各年齡層中，特別是兒童和青少年[1]。室管膜瘤的癥狀主要包括顱內壓增高及不同生長部位相應神經系統癥狀，如頭痛、吞咽困難、聽力減退等，嚴重者可出現顱內出血、腦水腫及神經功能缺損等癥狀，且患者的預后相對較差。目前關于室管膜瘤的發病機制尚未明確，隨著研究的不斷深入，有研究發現，室管膜瘤與多種因子密切相關[2]。其中Ki-67蛋白作為腫瘤細胞增殖活性評估的重要指標，腫瘤的惡性程度越高，Ki-67 表達水平也就越高[3]。表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）作為跨膜糖蛋白，作用于細胞生長、發育和分化過程，在多種實體瘤中過表達。但目前臨床對Ki-67、EGFR 在室管膜瘤中表達的相關研究較少見[4-6]。因此，本研究旨在探討Ki-67、EGFR在室管膜瘤中的表達及與患者預后的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年1 月至2020 年1 月西安市第三醫院收治的室管膜瘤患者。納入標準：①術前行影像學檢查證實存在顱內占位病變，經病理學檢查確診為室管膜瘤；②臨床資料完整。排除標準：①合并心理障礙或精神疾病，不能正常溝通交流；②隨訪資料不完整；③合并凝血功能異常；④合并其他顱內腫瘤。依據納入和排除標準，本研究共納入84 例室管膜瘤患者，其中男56 例，女28 例；年齡24～55 歲，平均（32.71±2.53）歲；組織學分級：Ⅰ～Ⅱ級45 例，Ⅲ～Ⅳ級39 例。取84 例室管膜瘤患者的腫瘤組織及相應癌旁組織（距腫瘤組織＞3 cm）。本研究經醫院倫理委員會批準通過，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 免疫組化法檢測Ki-67、EGFR蛋白的表達情況

取84 例室管膜瘤患者的腫瘤組織及相應癌旁組織，石蠟包埋連續切片，厚度為5 mm，抗原修復，采用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）作為陰性對照，用已知陽性切片作為陽性對照。滴加鼠抗人Ki-67 單克隆抗體、兔抗人EGFR單克隆抗體，二氨基聯苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素復染后封片。

結果判定：Ki-67 主要定位于細胞核，細胞核出現棕黃色顆粒判定為陽性；EGFR 主要定位于細胞膜或細胞質，細胞膜或細胞質出現棕黃色判定為陽性。每張切片隨機觀察5 個高倍視野，每個視野計數200個細胞，取平均值。Ki-67、EGFR均采用半定量積分法進行評估。依據陽性細胞所占比例進行評分：未見陽性細胞計0 分，陽性細胞所占比例≤25%計1 分，陽性細胞所占比例為26%～50%計2分，陽性細胞所占比例為51%～75%計3 分，陽性細胞所占比例＞75%計4 分；依據染色強度進行評分：黃色染色計1 分，棕黃色染色計2 分，棕褐色染色計3 分；將陽性細胞所占比例評分和染色強度評分相乘，0 分為陰性（-），l～4 分為弱陽性（+），5～8 分為中度陽性（++），9～12 分為強陽性（+++）；（-）（+）判定為陰性表達，（++）（+++）判定為陽性表達。

1.3 資料收集和隨訪方法

收集84 例室管膜瘤患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤直徑、組織學分級、術后放療情況、術后化療情況等。采用到院復查的方式對所有患者進行為期2 年的隨訪，每3 個月復查1 次，依據影像學檢查結果、腦神經受損體征評估患者的預后，腦干受侵犯判定為預后不良，腦干未侵犯、無復發判定為好轉。

1.4 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件對所有數據進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；室管膜瘤患者預后的影響因素采用多元Logistic 回歸模型分析；以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 Ki-67、EGFR 的表達情況

室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67 陽性表達率為64.29%（54/84），EGFR 陽性表達率為67.86%（57/84），均明顯高于癌旁組織，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 室管膜瘤患者腫瘤組織和癌旁組織中Ki-67、EGFR表達情況的比較[n（%）]

2.2 不同組織學分級室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 表達情況的比較

組織學分級為Ⅲ～Ⅳ級的室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 陽性表達率均明顯高于Ⅰ～Ⅱ級患者，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表2）

表2 不同組織學分級室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 表達情況的比較[n（%）]

2.3 室管膜瘤患者預后不良影響因素的單因素分析

隨訪2 年，84 例室管膜瘤患者預后好轉68 例，預后不良16 例。預后好轉與預后不良患者年齡、性別、腫瘤直徑、術后放療情況、術后化療情況比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）；預后好轉與預后不良室管膜瘤患者腫瘤部位、組織學分級、Ki-67

表達情況、EGFR 表達情況比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表3）

表3 室管膜瘤患者預后不良影響因素的單因素分析

2.4 室管膜瘤患者預后不良影響因素的多因素分析

將單因素分析中差異有統計學意義的腫瘤部位、組織學分級、Ki-67 表達情況、EGFR 表達情況作為自變量，室管膜瘤患者的預后作為因變量，納入多元Logistic 回歸分析，結果顯示，腫瘤部位為幕下、組織學分級為Ⅲ～Ⅳ級、Ki-67 陽性表達、EGFR 陽性表達均為室管膜瘤患者預后不良的獨立危險因素（P＜0.05）。（表4）

表4 室管膜瘤患者預后不良影響因素的多元Logistic 回歸分析

3 討論

Ki-67 是增殖細胞相關核抗原，在腫瘤患者的病理報告中，Ki-67 表達水平可提示細胞的增殖活躍程度，Ki-67 的表達水平越高表示細胞增殖越活躍，惡性程度也會越高，越容易出現復發和轉移[7]。近年來有研究發現，肺腺癌患者中Ki-67 的表達明顯上調，且Ki-67 高表達患者的復發率較高，總生存率明顯降低，預后不佳，因此，認為Ki-67 高表達患者手術治療后仍需積極進行輔助治療[8]。Jensen等[9]的研究認為，腫瘤細胞的分化程度與其抗原抗體反應中Ki-67 的陽性檢出率呈負相關。EGFR 具有酪氨酸激酶活性，可與表皮生長因子結合并在細胞核內啟動相關因子，從而促進細胞分裂增殖[10]。EGFR 表達異常可導致下游信號增強，尤其是突變型EGFR 蛋白表達增強，可導致其持續激活[11]。但多項研究在胃癌、乳腺癌等惡性腫瘤中也發現了EGFR 異常表達[12-13]。本研究通過比較室管膜瘤腫瘤組織及癌旁組織中Ki-67、EGFR 表達情況，結果顯示，室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 陽性表達率均明顯高于癌旁組織，且組織學分級為Ⅲ～Ⅳ級的室管膜瘤患者腫瘤組織中Ki-67、EGFR 陽性表達率均明顯高于Ⅰ～Ⅱ級患者。表明Ki-67、EGFR 表達情況可能與室管膜瘤的發生發展密切相關，或可作為評估細胞增殖的指標，患者的組織學分級越高，Ki-67、EGFR 的陽性表達率越高，表明Ki-67、EGFR 可能與組織學分級存在共線性關系。這可能是因為Ki-67 是細胞周期重要的調節因子，其高表達可以促進細胞增殖，而EGFR 高表達與基因擴增密切相關[14]。

研究顯示，室管膜瘤患者的總體預后較差，5年生存率約為15%，目前臨床關于室管膜瘤患者預后的影響因素尚無統一定論，通常與腫瘤部位、病理類型、復發情況等因素有關[15-16]。本研究單因素分析結果顯示，預后好轉與預后不良患者腫瘤部位、組織學分級、Ki-67 表達情況、EGFR 表達情況比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）；多元Logistic 回歸分析結果顯示，腫瘤部位為幕下、組織學分級為Ⅲ～Ⅳ級、Ki-67 陽性表達、EGFR 陽性表達均為室管膜瘤患者預后不良的獨立危險因素（P＜0.05），表明Ki-67、EGFR 陽性表達均是室管膜瘤患者預后不良的獨立危險因素，且預后不良患者機體免疫功能損傷程度更高，機體免疫功能亢進引發的病理損傷可能會促進室管膜瘤的發生發展。但影響室管膜瘤患者預后的因素較多，尚需進一步擴大樣本量進行多中心研究驗證。

綜上所述，Ki-67、EGFR 在室管膜瘤中的陽性表達率較高，腫瘤部位為幕下、組織學分級為Ⅲ～Ⅳ級、Ki-67 陽性表達、EGFR 陽性表達均為室管膜瘤患者預后不良的獨立危險因素。