補噓養勒糖漿對產后缺乳模型大鼠治療作用的研究

李 娜 李清平 陳曉藝▲ 黃小童 方 剛

1.廣西中醫藥大學制藥廠，廣西南寧 530023；2.廣西中醫藥大學壯醫藥學院，廣西南寧 530001

產后缺乳是指產婦在哺乳期內，乳汁分泌缺少或完全沒有，不能滿足嬰兒母乳喂養的需要[1]。中醫學認為缺乳多為產婦氣血化源不足，或肝氣郁結、氣機不暢，或氣血失調、經脈澀滯所致[2]。隨著國家“三孩”政策的開放，高齡產婦產后氣血虛弱而致缺乳的情況更加頻繁[3]。針對這一形勢，廣西中醫藥大學制藥廠聯合廣西中藥大學依據國醫大師班秀文教授在中醫婦產科、壯醫藥的壯醫理論開發研制了用于治療產后缺乳的制劑——壯藥補噓養勒糖漿（Buxu Yangle Syrup，BXYL）。本研究通過對甲磺酸溴隱亭誘發大鼠缺乳的藥理學研究，驗證BXYL 治療產后缺乳的作用，旨在為后期的臨床研究提供依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

72 只SD 雌鼠， 體重220～230 g；18 只SD 雄鼠，體重250～260 g， 由長沙市天勤生物技術有限公司提供，許可證號：SCXK（湘）2019-0014。

1.2 材料與試劑

BXYL（由廣西中醫藥大學制藥廠以五指毛桃、當歸、田七、麥冬、川芎、木瓜提取、制備所得，批號：2020801，每克膏含10 g 藥材）；甲磺酸溴隱亭（匈牙利吉瑞大藥廠，批號：T04360A）；通乳顆粒[遼寧上藥好護士藥業（集團）有限公司，批號：200501]；大鼠泌乳素（prolactin，PRL）酶聯免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒（上海泛柯實業有限公司，批號：F3438-A）；HE 染液（北京雷根生物技術有限公司，批號：0603A20）。

1.3 主要儀器

FA1004 型上皿電子天平；Multiskan Go 型全波長全自動多功能酶標儀； 徠卡EG1150 H 石蠟包埋機；徠卡RM2255 切片機；徠卡DM2500 顯微鏡。

1.4 方法

1.4.1 分組 實驗動物適應性飼養1 周后，取未經孕產的SD 大鼠雌鼠與雄鼠按4∶1 的比例同籠飼養， 交配受孕。 以發現仔鼠為分娩后第1 天，將每窩仔鼠數量調整為8 只， 雌雄各半， 同時將受孕成功并分娩的60只母鼠隨機分成6 組，分別為空白組、模型組、陽性組和BXYL 低、中、高劑量組。

1.4.2 制備甲磺酸溴隱亭缺乳大鼠模型及試驗用藥劑量 除空白組外，其余5 組的母鼠每日早晚采用甲磺酸溴隱亭灌胃1 次，連續10 d。 根據人與動物劑量換算法，溴隱亭溶液用藥劑量為0.525 mg/kg，按照330 g大鼠灌胃5 ml 的給藥體積灌服，溴隱亭溶液的濃度為0.0693 mg/ml。同時開始給藥，每日1 次，連續10 d：給藥低劑量2.5 g 生藥/kg，中劑量5 g 生藥/kg，高劑量10 g 生藥/kg（分別相當于人用臨床劑量的0.5、1、2 倍），通乳顆粒12.0 g/kg。

1.4.3 對缺乳母鼠所喂養仔鼠體重的影響 每日晨8時用電子秤稱仔鼠重， 記錄每窩仔鼠每日平均體重，仔鼠體重增加率=（仔鼠每日平均體重-分娩第1 天平均體重）/分娩第1 天平均體重×100%。

1.4.4 對大鼠缺乳模型母鼠泌乳量的影響 出生第2天開始，將仔鼠與母鼠分籠，7 h 后，稱量每窩仔鼠體重后與母鼠同籠，讓母鼠喂乳，1 h 后，重新給每窩仔鼠稱重， 將哺乳前后體重差值作為母鼠8 h 的泌乳量。每日測定1 次，連續9 d。

1.4.5 對缺乳母鼠血清泌乳素的影響 6 組母大鼠分別于分娩后第3、7、11 天清晨尾靜脈取血，離心，取上清液，采用ELISA 法測定血清PRL 水平。

1.4.6 對缺乳母鼠垂體和乳腺組織學的影響 將以上各組母鼠在分娩后第11 天稱重，放血處死，剝離母鼠垂體和乳腺，福爾馬林液固定，石蠟包埋切片HE 染色，光鏡檢查。

1.5 統計學方法

采用SPSS 16.0 統計學軟件進行數據分析， 符合正態分布的計量資料用均數±標準差（±s）表示，兩組間比較采用t 檢驗，不符合正態分布者經過變量轉換為正態分布后行統計學分析， 以P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組母鼠所喂養仔鼠體重的比較

各組每窩仔鼠每日平均體重增長結果見圖1，各組仔鼠每日平均體重及仔鼠平均體重增加率見表1。模型組母鼠所喂養仔鼠體重增長率低于空白組，差異有統計學意義（P＜0.05）；BXYL 高劑量組缺乳性母鼠所喂養的仔鼠體重高于模型組， 差異有統計學意義（P＜0.05）（圖1、表1）。

表1 各組仔鼠每日平均體重和體重增加率（±s）

表1 各組仔鼠每日平均體重和體重增加率（±s）

注 與模型組同期比較，aP＜0.05，aaP＜0.01；與空白組同期比較，bP＜0.05；與陽性組同期比較，cP＜0.05；BXYL：補噓養勒糖漿

分娩后時間（d）12 3 4 5 6 7 8 9 1 0 11仔鼠平均體重BW（g）仔鼠體重增加率WR（%）BW BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR BW WR空白組（n=10）7.62±0.94 8.84±1.51a 16.06±11.80 10.38±1.77aa 36.18±14.85a 12.08±2.14aa 58.58±19.22a 13.94±2.36aa 82.95±22.18a 15.90±2.54aa 108.68±24.63a 18.09±2.84a 137.38±28.94a 20.25±3.04a 165.71±32.18 22.49±3.31a 195.11±36.08 24.87±3.97a 226.37±44.56 26.99±4.09a 254.23±46.87模型組（n=10）7.07±0.50 7.54±0.70 7.14±11.81 8.15±1.01 16.49±18.03 9.39±1.41 35.37±23.12 10.78±1.96 56.57±31.34 12.58±2.00 83.90±33.51 14.17±3.06 115.75±48.10 16.37±3.09 149.18±48.07 18.41±3.45 180.32±53.94 20.62±3.37 213.91±53.11 23.05±3.67 250.95±57.43陽性組（n=10）6.95±0.89 9.32±2.49a 34.18±27.86a 9.86±3.03 41.87±34.90a 11.41±3.52 64.19±42.87 13.27±3.80 92.41±47.11a 14.98±4.31 115.56±55.15 17.05±4.54 145.35±58.79 18.89±5.04 171.92±66.65 20.95±5.45 201.55±73.13 23.10±5.84 232.49±78.44 25.61±6.23 268.49±85.05 BXYL 高劑量組（n=10）8.07±0.90aac 9.40±1.69aa 16.47±12.53 10.89±1.18aa 34.89±8.19aa 12.36±0.97aa 53.08±10.46a 14.53±1.26aa 80.03±13.35a 16.35±1.42aa 102.56±16.12a 18.27±1.55aa 126.33±18.71 20.62±1.81aa 155.48±21.55 23.17±2.11aa 187.05±25.34 24.99±1.92aa 209.65±22.38 27.35±2.23aa 238.92±26.68 BXYL 中劑量組（n=10）7.62±1.54 9.19±1.53aa 21.03±18.32 9.96±1.64a 21.28±11.58ab 11.69±1.75a 54.55±12.45a 13.42±1.83aa 77.63±12.54a 15.45±2.13aa 104.85±14.92a 17.20±2.15a 128.29±31.74 19.29±2.11a 156.17±15.60 21.51±2.35a 185.98±17.14 23.60±2.39a 213.96±19.94 26.32±3.45 250.33±34.16 BXYL 低劑量組（n=10）7.17±0.49 8.47±0.60 18.20±4.46 9.84±0.81 37.24±6.78 11.66±0.76 62.61±7.91 13.41±1.25 87.07±16.89 15.80±1.14 120.37±13.36 17.92±1.27 149.89±15.86 20.02±1.81 179.17±24.11 22.39±1.70 212.32±21.69 24.28±2.04 238.68±25.75 25.97±2.81 262.16±36.65

圖1 各組仔鼠每日平均體重

2.2 各組母鼠每日8 h 泌乳量的比較

模型組每日8 h 泌乳量低于空白組，差異有統計學意義（P＜0.01）；BXYL 高、中、低劑量組分娩后3～10 d的每日8 h 泌乳量高于模型組，差異有統計學意義（P＜0.01）；BXYL 高、中劑量組與空白組、陽性組的每日8 h泌乳量比較，差異無統計學意義（P＞0.05）（表2）。

表2 各組母鼠每日8 h 泌乳量的比較（g，±s）

表2 各組母鼠每日8 h 泌乳量的比較（g，±s）

注 與模型組同期比較，aP＜0.05，aaP＜0.01；與空白組同期比較，bP＜0.05，bbP＜0.01；與陽性組同期比較，cP＜0.05，ccP＜0.01；BXYL：補噓養勒糖漿

分娩后時間（d） 空白組（n=10）模型組（n=10）陽性組（n=10）BXYL 高劑量組（n=10）BXYL 中劑量組（n=10）BXYL 低劑量組（n=10）234567891 0 1.13±0.15aa 2.13±0.16aa 2.72±0.22aa 3.56±0.38aa 3.87±0.25aa 4.20±0.29aa 4．65±0.28aa 4.94±0.30aa 5.21±0.27aa 0.84±0.05 1.03±0.13 2.12±0.32 2.54±0.29 2.90±0.24 3.25±0.24 3.72±0.22 4.09±0.22 4.44±0.20 1.06±0.25a 1.54±0.19aa 2.42±0.27a 3.25±0.20aa 3.76±0.35a 4.16±0.33aa 4.55±0.31aa 4.83±0.30aa 5.12±0.29aa 1.20±0.10aa 1.56±0.18aabb 2.54±0.25aa 3.34±0.19aa 3.83±0.30aa 4.23±0.26aa 4.66±0.24aa 4.98±0.24aa 5.21±0.20aa 1.02±0.18a 1.37±0.12aabbc 2.44±0.34a 3.32±0.23aa 3.66±0.39aa 3.94±0.43aa 4.29±0.46aa 4.59±0.42aa 4.95±0.40aa 0.90±0.08bb 1.28±0.14aabbcc 2.38±0.20abb 3.20±0.22aab 3.44±0.39aabb 3.82±0.38aabc 4.23±0.36aabbc 4.53±0.39aab 4.86±0.35aab

2.3 各組母鼠血清PRL 水平的比較

各組母鼠于分娩后第3 天血清PRL 處于分泌峰值，藥物對此期血清泌乳素水平影響較大。 模型組母鼠血清PRL 低于空白組，差異有統計學意義（P＜0.05）；陽性組、BXYL 高、中劑量組缺乳母鼠血清PRL 水平高于模型組，差異有統計學意義（P＜0.05）。 隨著哺乳天數遞增，各組母鼠血清PRL 下降，開始進入分泌穩定期，藥物對此穩定期血清PRL 水平仍有影響。 模型組母鼠血清PRL 低于空白組，差異有統計學意義（P＜0.01）；BXYL 高劑量組第11 天血清PRL 水平高于陽性組，差異有統計學意義（P＜0.01）（表3）。

表3 各組母鼠血清PRL 水平的比較（ng/ml，±s）

表3 各組母鼠血清PRL 水平的比較（ng/ml，±s）

注 與模型組同期比較，aP＜0.05，aaP＜0.01；與空白組同期比較，bP＜0.05；與陽性組同期比較，ccP＜0.01；BXYL：補噓養勒糖漿；PRL：泌乳素

組別 第3 天 第7 天 第11 天空白組（n=10）模型組（n=10）陽性組（n=10）BXYL 高劑量組（n=10）BXYL 中劑量組（n=10）BXYL 低劑量組（n=10）72.75±12.68a 59.70±7.43 67.47±5.21a 73.81±9.65aa 67.88±5.27a 64.52±6.66 30.17±4.96aa 22.83±2.19 26.39±5.25 28.20±5.03aa 27.81±5.78a 25.36±3.63b 27.78±3.16aa 24.00±2.33 24.41±1.65 27.32±2.48aacc 24.76±1.44ab 26.05±1.87a

2.4 各組母鼠垂體和乳腺組織學結果

各組母鼠在分娩后第11 天放血處死， 剝離母鼠垂體和乳腺作組織形態學檢查，各組母鼠乳腺組織形態學結果見圖2，垂體組織形態學結果見圖3。空白組母鼠乳腺腺泡和導管結構正常，腺小葉間有正常的脂肪和結締組織；模型組母鼠乳腺小葉數量減少，腺泡和導管結構無明顯變化，腺小葉間脂肪和結締組織增多；與模型組比較，陽性組母鼠乳腺腺小葉增多，腺泡增大導管擴張，腺小葉間脂肪和結締組織減少；BXYL各劑量組母鼠乳腺腺泡及導管數量明顯增多，并擴張增生，乳腺小葉間脂肪結締組織減少（圖2）。 空白組母鼠垂體細胞正常；模型組母鼠垂體細胞核固縮樣改變，嗜酸性細胞減少；與模型組比較，陽性組母鼠垂體嗜酸性細胞有所增加， 但達不到空白組水平；BXYL各劑量組母鼠垂體細胞形態正常， 嗜酸性細胞增多（圖3）。

圖2 各組母鼠乳腺組織形態學（HE 染色，100×）

圖3 各組母鼠垂體組織形態學（HE 染色，400×）

3 討論

中醫學認為產后缺乳的病因為氣血虛弱、津液不足，使乳汁化生乏源，或經脈阻滯、氣血不通，使乳絡通行不暢，治療方法應補氣養血、活血通絡[4]。 BXYL遵循主幫帶的配伍原則，由五指毛桃、當歸、田七、麥冬、川芎、木瓜組成。 其中五指毛桃，壯名為Gocijcwz，又稱為南芪、土北芪等，具有補噓（氣）、健谷道水道、利濕通絡的功效， 其補氣補虛功同北芪卻不溫不燥，更適合產婦實用[5]；當歸味甘、辛，性溫，功能為補血活血、調經止痛[6]；番木瓜味甘，性平，功效為健胃消食、滋補催乳、舒筋通絡，主治脾胃虛弱、食欲不振、乳汁缺少等[7]；麥冬壯名為Megdoeng，味甘、微苦，性微寒，功效為養陰生津、潤肺清心[8]。方中的各藥在壯醫防治產后病中使用頻率較高[5]。

母乳中含有碳水化合物、蛋白質、脂肪、維生素、礦物質、消化酶和激素等營養素，是嬰兒生長發育的最佳營養，而且含有豐富的抗體，是新生兒腸道獲得適應性免疫的第一來源[1]。 PRL 是垂體前葉的一種蛋白質激素，PRL 能夠促進乳腺的生長和發育， 并促進乳汁的合成和維持乳汁的分泌，經過催乳素刺激乳腺發育，從而產生乳汁成分[17]，產婦泌乳素水平的多少決定了泌乳量的多少[19]。 因此，本研究通過監測仔鼠體重、母鼠泌乳量、母鼠血清PRL、母鼠垂體和乳腺組織學，驗證BXYL 對缺乳模型大鼠的治療作用。結果顯示，BXYL 高劑量組中仔鼠的體重高于模型組，差異有統計學意義（P＜0.05）；BXYL 高、中劑量組的泌乳量高于模型組，差異有統計學意義（P＜0.05）；BXYL高、中劑量組與空白組的泌乳量比較，差異無統計學意義（P＞0.05）；隨著時間的增長，泌乳素水平逐漸下降后趨于平穩，但因僅記載3 個時間點的數據，還需進一步深入研究；模型組母鼠血清PRL 低于空白組，差異有統計學意義（P＜0.01）；BXYL 高劑量組第11 天血清PRL 水平高于陽性組，差異有統計學意義（P＜0.01），提示BXYL 各劑量組均能改善模型組大鼠缺乳的狀態，并有效調節缺乳模型大鼠的泌乳素水平。 各劑量組母鼠乳腺腺泡及導管數量多于模型組， 并擴張增生，乳腺小葉間脂肪結締組織減少；而BXYL 各劑量組母鼠垂體細胞形態正常，嗜酸性細胞增多。

綜上所述，BXYL 可促進缺乳母鼠乳腺腺小葉增多，腺泡及導管擴大增生，減少乳腺小葉間脂肪結締組織，且明顯增加垂體嗜酸性細胞數量和血清泌乳素水平，從而增加母鼠的泌乳量，提高其所喂養的仔鼠體重。 BXYL 對產后缺乳模型大鼠具有明顯的催乳作用，其作用機制有待進一步研究。