佩蘭揮發油治療輪狀病毒性仔豬腹瀉的療效觀察研究

張福壽，王鶴鳴，王 利

(商丘職業技術學院，河南 商丘 476100)

仔豬輪狀病毒性腹瀉是由豬輪狀病毒引起的仔豬感染[1]，是仔豬常見的一種傳染病.感染仔豬常出現急性胃腸炎癥狀，主要表現為厭食、嘔吐、腹瀉、脫水等.仔豬發病后往往呈現出混合交叉感染的特點.該病對我國養豬業造成了極大的威脅與危害，引起了人們的高度重視.目前，關于仔豬輪狀病毒性腹瀉的治療尚無特殊藥物，主要采取對癥治療及疫苗預防方法[2].在預防和治療時，疫苗的保護率不高，有時還有副作用，對癥治療往往不能有效控制仔豬腹瀉.有關研究表明，佩蘭有抗炎、抑菌作用，對輪狀病毒性腸炎、腹瀉有較好的治療和保護作用[3].本文通過對仔豬進行人工感染豬輪狀病毒，模擬豬輪狀病毒仔豬腹瀉，使用佩蘭揮發油進行治療試驗，以期獲得仔豬輪狀病毒性腹瀉的中醫藥治療方案.

1 材料

1.1 中藥佩蘭

中藥佩蘭自安徽亳州中藥市場采購，為地上莖桿，含部分葉.佩蘭揮發油由商丘職業技術學院藥物分析實訓室制備.

1.2 試驗動物

28日齡三元雜交斷奶仔豬(杜洛克×長白×大約克夏)40頭，已去勢，購買于商丘市梁園區富有養豬場.

1.3 試驗毒株

豬輪狀病毒，由商丘職業技術學院微生物實訓室提供.該病毒系從某豬場發生腹瀉的豬群糞便中,用MA_104細胞培養分離而得.

1.4 試劑與耗材

乙醚、生理鹽水、蒸餾水、硫酸鈉、目篩、燒瓶、注射器、喂藥器、解剖器材等.

1.5 儀器

高速中藥粉碎機、分析天平、揮發油提取器、恒溫鼓風干燥箱、恒溫水浴鍋、磁力攪拌器、電子天平等.

2 方法

2.1 佩蘭揮發油的制備

選取自然干燥的佩蘭植株并粉碎，過10目篩后，稱取佩蘭粉末100 g，采用水蒸氣蒸餾提取法，經乙醚萃取，無水硫酸鈉干燥后得到揮發油[4].

2.2 動物分組

將40 頭仔豬，隨機分為4個處理組，每組10 頭仔豬.4個處理組分別為豬輪狀病毒對照組、佩蘭揮發油低劑量組、中劑量組、高劑量組.動物的分組處理情況，如表1所示.

表1 試驗動物的分組與處理

將分組后的仔豬單籠飼養，按常規方法進行飼養管理.所有飼喂飼料均不添加任何抗生素，4日后(即32日齡時)向基礎飼糧中添加佩蘭揮發油.仔豬基礎飼糧配方組成及營養水平，分別如表 2、表3所示.

表2 基礎日糧組成

表3 基礎日糧營養水平

據孫紹美[5]、趙靜[6]等研究可知，佩蘭干品、鮮品揮發油對小鼠具有抗炎及增強免疫力的作用，其最佳的劑量為0.5 mg / kg，同時，根據《動物間體表面積折算的等效劑量比值表》 中提供的轉換方法，轉換后豬的佩蘭揮發油最佳劑量應為50 mg/kg.因此，特將實驗中的佩蘭揮發油劑量設定為高、中、低三個組，分別為100 mg/kg、50 mg/kg、25 mg/kg，以便更好地研究其對仔豬腹瀉的影響效果.按照三個劑量標準將佩蘭揮發油以拌料的形式添加到飼料中.對低劑量組、中劑量組和高劑量組仔豬連續飼喂含有相應劑量的佩蘭揮發油.三周后，于仔豬53日齡時對病毒對照組和藥物組的每頭仔豬經口灌服1.0×106TCID50/mL的輪狀病毒液4 mL，輪狀病毒對照組繼續飼喂不含佩蘭揮發油的基礎飼糧，低劑量組、中劑量組和高劑量組繼續飼喂添加有相應劑量佩蘭揮發油的基礎飼糧.觀察豬輪狀病毒對照組仔豬，當出現連續腹瀉情況時，則認為豬輪狀病毒成功誘導仔豬腹瀉.

2.3 腹瀉評分標準與計算

仔豬灌服輪狀病毒后，記錄灌服后天數(Days post infection，dpi)及相應的腹瀉情況，根據腹瀉情況給出并記錄評分.根據仔豬糞便的性狀進行腹瀉評分，評分及其依據如下：糞便正常為無腹瀉表現，記為0分；糞便為面糊膏狀為輕度腹瀉表現，記為1分；糞便為半流體狀為中度腹瀉表現，記為2分；糞便為流水型為嚴重腹瀉表現，記為3分[7].當評分≥2分時，判定仔豬發生了腹瀉.仔豬腹瀉情況用腹瀉指數(Diarrhea Index，DI)來表示.計算方法如下：

2.4 數據分析

試驗數據使用Excel 2016軟件進行整理、SPSS22.0進行處理，結果使用“平均數±標準差”表示，組間比較使用t檢驗,p< 0.05 表示差異顯著，p< 0.01 表示差異極顯著.

3 結果與分析

3.1 仔豬輪狀病毒腹瀉模型的建立

在仔豬灌服輪狀病毒后的第2天、第3天和第4天記錄腹瀉仔豬數，分別為7頭 、9頭和10頭，這說明豬輪狀病毒成功誘導了仔豬腹瀉.仔豬輪狀病毒感染后，除出現腹瀉、嘔吐癥狀外，還出現精神萎靡不振、厭食等癥狀，對其進行解剖還發現小腸呈點狀出血等病理變化.

3.2 佩蘭揮發油對豬輪狀病毒感染仔豬腹瀉的影響

仔豬攻毒后的腹瀉情況，如表4所示.佩蘭揮發油低劑量組在攻毒后第2天、第3天、第4天出現腹瀉的仔豬數分別是3頭、7頭、7頭，佩蘭揮發油中劑量組在攻毒后第2天、第3天、第4天出現腹瀉的仔豬數分別為3頭、5頭、3頭，佩蘭揮發油高劑量組在攻毒后第2天、第3天、第4天出現腹瀉的仔豬數分別為1頭、1頭、1頭.

表4 仔豬感染豬輪狀病毒后的腹瀉情況

仔豬攻毒后，從表5可以看出，佩蘭揮發油低、中、高劑量組與病毒感染對照組相比均呈現出差異顯著的情況，這說明佩蘭揮發油對人工感染豬輪狀病毒仔豬腹瀉有較好的療效.佩蘭揮發油低、中、高劑量組組間相比也呈現出差異顯著的情況，這說明隨著佩蘭揮發油劑量的增加，對仔豬輪狀病毒腹瀉的療效呈現增強的趨勢.佩蘭揮發油低、中、高劑量組療效組間相比，以高劑量組療效最好.

表5 不同處理對仔豬腹瀉指數的影響

使用佩蘭揮發油對仔豬感染豬輪狀病毒后的腹瀉統計情況，如圖1所示.圖1中的折線表明，隨著佩蘭揮發油劑量的增加，仔豬腹瀉情況明顯減少.

圖1 使用佩蘭揮發油對仔豬感染豬輪狀病毒后的腹瀉統計情況

4 討論

斷奶仔豬由于缺少相應的抗體，感染輪狀病毒后很容易導致腹瀉的發生.王純剛[8]、湯俊[9]等人利用輪狀病毒培養液對仔豬進行口服攻毒，仔豬在攻毒后均成功誘導腹瀉.本試驗成功建立了仔豬輪狀病毒腹瀉模型，并在此基礎上開展腹瀉指數的研究.結果表明，佩蘭揮發油對感染豬輪狀病毒的仔豬腹瀉起到了較好的保護作用，這與中藥佩蘭所具有的化濕和中、醒脾開胃的功效密切相關.中醫經典里有“濕勝則濡瀉”“泄瀉之本，無不由脾胃”“脾胃失健運則泄瀉隨之”的論述，這說明腹瀉與體內過濕及脾胃失調相關.所以，佩蘭揮發油對感染豬輪狀病毒的仔豬腹瀉有著較好療效，這正是佩蘭化濕和中，醒脾開胃的具體應用.現代藥理研究證實，佩蘭還具有較明顯的抗炎、抗病毒作用。佩蘭能夠對輪狀病毒引起的腸道炎癥起到有效的抑制作用.總之，佩蘭揮發油對感染輪狀病毒仔豬腹瀉的治療是從中醫藥的角度進行的探索，希望為感染輪狀病毒的仔豬腹瀉的治療提供一些理論依據.