廣西仫佬族自治縣高膽紅素血癥新生兒UGT1A1基因譜

張慧玲，鐘丹妮，李 燕

(1.廣西醫科大學第一附屬醫院新生兒科，廣西 南寧 530021； 2.廣西羅城仫佬族自治縣人民醫院新生兒科，廣西 羅城 546400)

高膽紅素血癥是新生兒中發病率較高的疾病，是新生兒返院的最常見原因之一[1]。雖然大多數情況下不會造成嚴重后果，但仍有患兒因膽紅素值達到甚至超過危險水平，導致膽紅素腦病，對中樞神經系統、聽力、視覺、牙齒、運動等方面的發育造成永久性損傷[2-3]。葡萄糖醛酸轉移酶是人體內一類重要的Ⅱ相代謝酶，在人體中發揮著不可或缺的作用[4]。葡萄糖醛酸轉移酶1A1(uridine diphosphate glucuronosyltransferase 1A1，UGT1A1)是參與膽紅素結合和代謝唯一的關鍵酶[5-7]。UGT1A1基因變異和轉錄調控改變，都會對酶的表達產生破壞性影響，使膽紅素代謝發生異常，蓄積在血液中，從而出現不同程度的高膽紅素血癥，如Crigler-Najjar綜合征和Gilbert綜合征等[8-9]。UGT1A1基因的多態性因種族和地區而異，如在高加索人群中，最常見的突變類型為啟動子的TATA box重復多態性突變；而G71R基因突變，也就是c.211G>A錯義突變是亞洲人群最常見的突變類型[10-11]。廣西羅城仫佬族自治縣是一個多民族的地區，UGT1A1基因突變是否影響該地區高膽紅素血癥的發生，究竟是哪種突變導致了該病，目前尚無報道。本文將探討UGT1A1基因的TATA box突變和G71R突變與廣西羅城仫佬族自治縣新生兒高膽紅素血癥之間的關系，現報道如下。

1資料與方法

1.1臨床資料

選取2021年1月至12月在羅城仫佬族自治縣人民醫院確診為高膽紅素血癥的100例患兒作為病例組。高膽紅素血癥診斷標準為：時齡膽紅素達到或者超過新生兒小時膽紅素列線圖第95百分位[12]。選取同一時期在我院婦產科出生，且隨訪2周無黃疸的足月新生兒100例為對照組。排除標準：葡萄糖六磷酸脫氫酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase，G-6-PD)缺乏癥、敗血癥、母嬰血型不合型溶血病、巨大兒、早產兒、低出生體重兒、頭顱血腫、紅細胞增多癥等。

200例新生兒日齡1～14天，體重在2.5～4.0kg，收集患兒的性別、民族、膽紅素值等基本信息。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，并征得患者家屬知情同意。

1.2方法

采集新生兒外周血2mL，用血液基因組DNA分離試劑盒(北京天根公司)分離DNA，儲存于-20℃的冰箱中。根據文獻設計第一外顯子引物，引物序列為F引物：5′-GTCACGTGACACAGTCAAAC-3′，R引物：5′-GTCCCACTCCAATACACAC-3′，產物片段長度999bp[13]。聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)體系(總體積為50μL)：上下游引物各2μL，DNA模板質量為500ng(根據公式：體積=質量/濃度，計算出所需的DNA體積)，2×Taq MasterMix(康為世紀公司)25μL，用去離子水補足50μL。PCR反應程序：94℃預變性2min，94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸30s，循環30次，72℃終延伸2min，置于-20℃保存，并送往上海生工生物工程公司直接測序，所得結果與Gene Bank中UGT1A1的基因序列比較，應用Chromas軟件判斷基因突變位點。

1.3統計學方法

2結果

2.1兩組一般資料比較

病例組男53例，女47例；平均胎齡(272.51±9.33)天；平均出生體重(3 168.90±440.67)g；漢族31例，壯族29例，仫佬族35例，其他民族5例。對照組男48例，女52例；平均胎齡(274.64±7.07)天；平均出生體重(3 228.50±313.44)g；漢族24例，壯族39例，仫佬族35例，其他民族2例。兩組胎齡、出生體重、性別、民族等基本資料比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。

2.2兩組UGT1A1 G71R 基因型分布及等位基因突變率

兩組均未檢測到啟動子TATA box突變。病例組中，純合G71R突變4例，雜合突變37例，突變率為41.00%(41/100)；對照組中G71R雜合突變9例，未檢出純合G71R突變，突變率為9.00%(9/100)，見圖1。G71R基因突變頻率和A等位基因頻率在病例組和對照組中差異有統計學意義(χ2值分別為28.390、27.746，P<0.05)，見表1。

表1 兩組G71R 基因型分布及等位基因頻率的比較[n(%)]

2.3病例組不同民族 G71R 等位基因頻率的比較

比較病例組中漢族、壯族、仫佬族的G71R 等位基因頻率， 差異均無統計學意義(P>0.05)，見表2。因其他民族人數較少，不納入統計范圍。

表2 病例組不同民族間 UGT1A1 G71R等位基因頻率的比較

3討論

3.1新生兒高膽紅素血癥的病因

新生兒高膽紅素血癥是臨床上常見的疾病，經過多年的研究，部分病因已被人們所知，然而，在一些患兒中，尚未明確病因。近年來，許多學者將探究的目光投向膽紅素代謝過程中的代謝酶——UGT1A1酶[14]，它可催化膽紅素與葡萄糖醛酸的結合反應，促使膽紅素排出體外，成為膽紅素代謝中唯一的關鍵酶[5-7]。當UGT1A1基因啟動子序列和編碼位點發生了突變，將導致不同類型的高膽紅素血癥[8-9]。UGT1A1基因最常見的突變為啟動子 TATA box 突變與第一外顯子 G71R突變。啟動子TATA box的TA重復序列增加，使TATA box與TATAA結合蛋白的親和力下降，造成UGT1A1酶活性降低，影響膽紅素的結合能力。第一外顯子區域 G71R 基因突變是指UGT1A1 酶第71位的Gly變為Arg，酶活性下降。

3.2 UGT1A1基因多態性的種族和地域差異

在不同的種族和地域之間，UGT1A1基因多態性存在差異。在高加索人群中，最常見的突變類型為(TA)7/(TA)7，發病率為9.7%～13.6%；在亞洲人群中發病率為1%～2%[10-11]；Akaba等[15]1998年報道亞洲人群中最常見的是G71R突變，在中國、日本、韓國尤其普遍。本研究病例組UGT1A1 G71R 基因突變頻率為 41.00%，遠高于高加索人群，略低于日本的Akaba等[16]學者報道的G71R突變頻率47%，也低于韓國學者Kim等[17]在81名高膽紅素血癥患者中檢測到的G71R突變頻率50.62%。在本研究中，G71R等位基因頻率在對照組和病例組間存在明顯差異，該突變可能是廣西羅城仫佬族自治縣新生兒高膽紅素血癥的主要類型。病例組的G71R等位基因頻率為22.50%，與廣西其他地區相似[13,18]，低于上海地區[19]，也低于其他國家如韓國[15]和越南[20]的報道。這可能意味著地域環境、種族等因素導致這種基因的差異性。

在此前的許多研究發現，UGT1A1啟動子TATA box突變在亞洲地區發病率較低，且大多發現該突變與亞洲人群高膽紅素血癥風險增加無明顯相關性[21-23]。本研究人群中未檢測到TATA box突變，說明廣西仫佬族自治縣高膽紅素血癥可能與TATA box突變無關。

不同民族UGT1A1基因譜可能有所不同[24]。奎莉越等[25]研究表明，云南漢族嬰兒主要與G71R、Y486D、c.1061C>T這3個位點的復合雜合突變，而Y486D純合突變則多存在于少數民族嬰兒中。吳曉靜等[26]、鐘勇等[13]發現G71R突變是廣西黑衣壯族、來賓壯族及漢族人群中最常見的突變類型，G71R等位基因頻率在黑衣壯族和漢族之間具有民族差異性，但來賓壯族、漢族的G71R基因頻率無明顯差異。本研究中不同民族患兒G71R 基因型分布差異無統計學意義，提示在羅城仫佬族自治縣患兒中，G71R突變基因頻率可能無民族性差異。

本研究局限性在于納入人數較少，僅3個民族進行比較，且只對TATA box和G71R基因進行檢測，仍有部分患兒未出現該突變，說明還存在著其他的致病因素。今后還應增加研究人數，深入研究除以上兩種基因突變類型外的其他基因多態性。

3.3小結

綜上所述，UGT1A1 G71R突變是廣西羅城仫佬族自治縣高膽紅素血癥的主要突變類型，羅城仫佬族自治縣漢族、壯族、仫佬族人群之間的G71R突變基因頻率無明顯差異。本研究結果對該地區新生兒高膽紅素血癥的診治具有一定的意義。此外，識別個人的遺傳綜合征可對家庭成員產生一定的影響，有助于為家庭和產前遺傳咨詢及基因檢測鋪設道路。