消化性潰瘍Hp感染患者血清GAS、IL-33、miR-26a水平變化及與臨床病理特征的關系

王 璽，糜 玲

消化性潰瘍為全球性多發病和常見病，歐美消化性潰瘍發病率為6%～15%，國內發病率為10%～12%，巨大的疾病負擔已成為全球公共衛生問題[1-2]。該病主要與幽門螺桿菌(Hp)感染有關，目前臨床診斷主要依靠Hp抗體檢測、細菌培養等，但對病情變化、輕重無從判斷，尋找安全準確、操作簡便的生化標志物輔助診斷已成為國內外研究熱點[3-4]。有研究指出，胃黏膜損傷可致胃泌素(GAS)分泌異常，故GAS表達變化差異，可能對Hp感染診斷具有指導意義[5]。楊儉等[6]研究顯示，miR-26a在胃癌患者中表達異常，但miR-26a在消化性潰瘍Hp感染患者中的表達及意義研究較少。白細胞介素-33(IL-33)在慢性炎癥性疾病及多種免疫性疾病中發揮重要生物學作用，IL-33與消化性潰瘍Hp感染患者之間關系鮮有報道[7]。鑒于此，本研究探討消化性潰瘍Hp感染患者血清GAS、IL-33、miR-26a水平變化及與臨床病理特征的關系，報告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年10月—2020年10月我院收治的214例消化性潰瘍作為研究對象，Hp感染情況：陽性136例、陰性78例。①納入標準：符合消化性潰瘍診斷標準[8]，經消化內鏡檢查確診；無認知功能障礙；患者均自愿簽署知情同意書。②排除標準：合并其他類型胃部疾病者；妊娠或哺乳期女性；伴胃泌素瘤、胃食管反流者；合并免疫系統疾病者；伴十二指腸潰瘍出血、幽門梗阻、胃穿孔者；接受Hp根除治療者；伴心、肝、腎等器質性病變者；有消化內鏡檢查禁忌證者；合并其他感染性疾病者；無法配合本研究者。本研究經醫院醫學倫理委員會審核批準。

1.2方法

1.2.1資料收集：收集消化性潰瘍患者性別、年齡、體質量指數、吸煙(每日≥3支，持續1年及以上)、飲酒(1年內平均每周≥1次)、家族胃腸道疾病史、暴飲暴食、辛辣飲食、既往病史、進食習慣、潰瘍部位、潰瘍面直徑等臨床資料。

1.2.2標本采集及處理：研究對象均于入院時，使用2支K2 EDTA抗凝管分別采集靜脈血4 ml，以半徑8 cm，3000 r/min離心15 min，其中一管在超凈工作臺將離心后上清吸取至無菌、不含RNA酶的EP管內，用于miR-26a測定；另一管取血清用于GAS、IL-33測定，均置于-80 ℃冰箱保存。

1.2.3GAS、IL-33檢測方法：采用放射免疫分析法檢測血清GAS水平，試劑盒購自上海西唐生物科技有限公司；采用ELISA法測定IL-33水平，試劑盒購自上海哈靈生物科技有限公司；檢測由同一位經驗豐富的檢驗醫師按照說明書完成。

1.2.4miR-26a測定方法：采用Trizol試劑提取血清中總RNA，然后置于冰上，使用紫外分光光度計測定RNA濃度與質量，取1 μg RNA，將其反轉錄cDNA，保存于-20 ℃冰箱內，采用qRT-PCR對miR-26a進行相對定量分析，采用TransStart Top Green qPCR SuperMi試劑盒進行qRT-PCR擴增，PCR反應體系參照說明書，上下游引物各0.4 μl，模板0.5 μl，STBR Premix Ex Taq Mix 10 μl，總體系為20 μl，反應程序：95 ℃、3 min，95 ℃、30 s，60 ℃、30 s，40個循環；利用Bio-Rad CFX Manager軟件進行數據分析，根據溶解曲線判斷qRT-PCR產物特異性，采用2-ΔΔCt方法進行相對定量分析。

1.2.5Hp感染檢測及分型標準：所有研究對象均于治療前，采用快速尿素酶試驗及W-S銀染色法進行Hp感染檢測，二者均為陽性即Hp感染陽性，反之為陰性。取Hp感染陽性患者血清標本，于恒溫箱內復溫至37 ℃，采用蛋白免疫印跡法對血清Hp抗體(UreA、UreB、CagA、VacA)進行定性檢測。Hp感染Ⅰ型是產細胞毒素菌株，即CagA(+)和(或)VacA(+)，Ure(+)；Hp感染Ⅱ型僅產生Ure而不產生毒素。

1.3觀察指標 ①比較Hp感染陽性或陰性患者GAS、IL-33、miR-26a水平。②分析影響消化性潰瘍患者Hp感染的相關因素。③分析GAS、IL-33、miR-26a水平與Hp感染患者臨床病理特征的關系。④比較不同分型Hp感染患者GAS、IL-33、miR-26a水平。⑤分析GAS、IL-33、miR-26a對Hp感染分型的鑒別診斷價值。

2 結果

2.1臨床資料比較 消化性潰瘍Hp感染陽性與陰性患者的臨床資料比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 消化性潰瘍Hp感染陽性、陰性患者臨床資料比較(例)

2.2GAS、IL-33、miR-26a水平比較 消化性潰瘍Hp感染陽性患者GAS、IL-33、miR-26a水平均高于陰性患者(P<0.01)。見表2。

表2 消化性潰瘍Hp感染陽性、陰性患者GAS、IL-33、miR-26a水平比較

2.3消化性潰瘍患者Hp感染影響因素 將上述比較差異有統計學意義的因素納入多因素Logistic回歸分析，變量賦值：GAS、IL-33、miR-26a以平均值為界，≤平均值=0、>平均值=1。結果顯示，GAS、IL-33、miR-26a均為消化性潰瘍患者Hp感染的影響因素(P<0.01)。見表3。

表3 影響消化性潰瘍患者Hp感染的多因素Logistic回歸分析

2.4GAS、IL-33、miR-26a水平與臨床病理特征的關系 GAS、IL-33、miR-26a水平與消化性潰瘍Hp感染患者潰瘍面直徑有相關性(r=0.569、0.571、0.594，P均<0.01)，而與潰瘍部位無相關性(r=0.114、0.137、0.152，P=0.125、0.109、0.133)。

2.5不同分型Hp感染患者GAS、IL-33、miR-26a水平 Ⅰ型Hp感染患者GAS、IL-33、miR-26a水平高于Ⅱ型患者(P<0.01)。見表4。

表4 不同分型消化性潰瘍Hp感染患者GAS、IL-33、miR-26a水平

2.6GAS、IL-33、miR-26a對Hp感染分型的鑒別診斷價值 GAS、IL-33、miR-26a聯合診斷Hp感染分型的曲線下面積(AUC)最大，為0.832，敏感度為73.75%，特異度為82.14%。見表5，圖1。

表5 GAS、IL-33、miR-26a對消化性潰瘍Hp感染分型的鑒別診斷價值

圖1 GAS、IL-33、miR-26a鑒別診斷消化性潰瘍Hp感染分型的ROC曲線GAS為胃泌素，IL-33為白細胞介素-33，Hp為幽門螺桿菌，ROC為受試者工作特征

3 討論

國內外研究指出，消化性潰瘍患者病灶部位病原菌抵抗能力較弱，更易發生Hp感染，且Hp感染者產生的毒素可引發宿主免疫反應介導的胃黏膜損傷，進一步加重病情[9-10]。故早期明確消化性潰瘍患者Hp感染發生情況，對臨床合理制定治療方案，及時控制病情尤為重要[11]。

有研究指出，胃腸激素可能參與消化性潰瘍患者Hp感染發生、發展過程，其中GAS在胃腸道運動、胃腸分泌功能及消化道黏膜細胞增殖中具有較強作用[12-13]。本研究結果顯示，Hp感染陽性患者GAS水平較陰性患者高，與辛銘等[14]研究結果一致。這可能與Hp感染引起消化道黏膜受損有關，導致GAS釋放入血，同時因損傷應激反應引起GAS的營養作用，增加胃黏膜血流，以促進受損的胃黏膜組織增生、修復。進一步探究表明，GAS水平與消化性潰瘍Hp感染患者潰瘍面直徑有相關性，且Ⅰ型Hp感染患者GAS水平較Ⅱ型患者高，進而較為全面且細致明確Hp感染對GAS的不良影響，Ⅰ型Hp感染細胞毒性及侵襲性較強，引起胃黏膜細胞損傷嚴重，由此導致應激性修復作用提升，故GAS表達水平進一步升高[15]。后續ROC曲線分析表明，當GAS>119.40 pg/ml時，應警惕Ⅰ型Hp感染發生，并根據病情及時給予相關防治措施，以改善疾病預后。

已有研究證實，IL-33在自身免疫性疾病、心血管疾病、感染等多種疾病發生發展過程中發揮關鍵作用[16-17]。但目前關于IL-33在消化性潰瘍Hp感染患者中表達情況的研究鮮見，本研究發現，Hp感染陽性患者IL-33水平較陰性患者高，且與Hp感染患者潰瘍面直徑有相關性，免疫炎癥反應為Hp感染黏膜損傷的重要病理生理機制，Hp感染可誘導宿主細胞及體液免疫應答激活，引起局部及全身炎癥反應，故IL-33水平呈高表達。機體感染Hp后，可迅速發生免疫反應，在多種細胞及生物因子作用下，致使潰瘍進一步加重。國內外研究證實，CagA可激活核因子-κB和MAPK信號傳導途徑，進而促進IL-32合成、分泌[18-19]。本研究中，Ⅰ型Hp感染患者IL-33水平較Ⅱ型高，可能與Ⅰ型Hp感染患者CagA(+)有關，但也可能存在其他途徑引起的IL-33活化，還需進一步研究證實。ROC曲線分析顯示，IL-33鑒別診斷Hp感染分型的AUC為0.760，提示監測消化性潰瘍患者IL-33水平可為臨床診療提供重要參考信息。

張峰等[20]研究發現，Hp感染相關胃疾病患者miR-26a表達異常，通過調節miR-26a表達可影響相關胃炎及胃癌進展，提示miR-26a與Hp感染相關胃疾病有關，本研究觀點與上述結果存在相似之處，microRNA是靶向信使RNA非翻譯區的非編碼短RNA，Hp感染后引起相關炎癥及黏膜損傷，可誘導胃部miR-26a表達增加。本研究僅以消化性潰瘍Hp感染患者為研究對象，從基因水平檢測miR-26a表達，發現Ⅰ型Hp感染患者miR-26a水平較Ⅱ型患者高，分析原因可能為，Ⅰ型Hp感染更易引起胃黏膜組織炎癥反應，誘導宿主細胞及體液免疫應答激活，miR-26a通過調節氧化酶-2表達影響胃黏膜上皮細胞增殖，抑制疾病進展，但具體作用機制仍需進一步探究。本研究通過ROC曲線分析發現，miR-26a鑒別診斷Hp感染分型AUC為0.747，具有較高應用價值。

消化性潰瘍Hp感染患者發病機制復雜，需多個指標進行綜合診斷及病情評估。本研究發現，GAS、IL-33、miR-26a聯合鑒別診斷Hp感染分型的AUC高達0.832，可在一定程度上提高診斷效能，為臨床提供更全面的疾病診療信息。此外，對于吸煙、飲酒、家族胃腸道疾病史、暴飲暴食、辛辣飲食、有既往史、共餐、潰瘍面直徑>2 cm者，Hp感染發生風險較高，應作為重點觀察對象，并制定相應預防措施，以控制疾病發生發展。

綜上，GAS、IL-33、miR-26a與消化性潰瘍患者Hp感染存在一定相關性，三者聯合鑒別診斷Hp感染分型的敏感度、特異度較高，可輔助評估Hp感染的發生及病情嚴重程度。