CEA、HSP60、SEPT9聯合檢測在結直腸癌早期診斷、預后中的應用價值

謝巴圖白音,李 偉,張勇剛

結直腸癌(CRC)在臨床中較常見，老年男性多發，其致死率僅次于胃癌、食管癌，此病早期并無明顯癥狀，在病情進展后就醫多為中晚期，大多數患者會因此錯過治療進而影響預后[1]。為提高患者生存質量延長生存期限，提高CRC早期診斷率十分重要。癌胚抗原(CEA)在CRC診斷中具有一定的應用價值，但在部分良性疾病中也會升高,限制了其在CRC早期診斷中的應用[2]。熱休克蛋白60(HSP60)在CRC病變早期就可呈現為高表達，對CRC早期診斷有重要的參考價值[3]。有研究表明，SEPT9基因甲基化可參與CRC細胞的浸潤及轉移[4]。基于此，本研究通過分析CEA、HSP60、SEPT9在CRC患者中表達情況，了解三者聯合檢測對CRC早期診斷、預后的評估價值。

1 資料與方法

1.1臨床資料 將2013年12月—2018年12月在本院行手術治療的CRC 81例作為CRC組。納入標準：經術后病理檢查證實為CRC者；臨床資料完整；符合《結直腸癌診療規范》中相關診斷標準[5]。排除標準：合并其他惡性腫瘤者；存在心、肝、腎等器官嚴重疾病者；存在免疫系統疾病者；入院前接受相關治療者；合并急慢性感染、創傷者。CRC組中男59例，女22例；年齡45～78(58.87±4.33)歲；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期33例，Ⅲ～Ⅳ期48例。另選取本院同期行健康體檢人群78例作為對照組，男51例，女27例；年齡44～78(57.10±4.95)歲。2組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1CEA、HSP60、SEPT9檢測方法：CRC組入院后次日清晨在空腹狀態下抽取靜脈血5 ml，對照組則在體檢當日清晨抽取靜脈血5 ml，離心半徑10 cm， 3000 r/min離心10 min，取上清液，待檢。應用電化學發光法檢測CEA。酶聯免疫吸附試驗檢測HSP60。SEPT9檢測：取冷凍血清置室溫30 min，按照檢測試劑盒(Plasma Quick Kit試劑)說明書操作提取血清游離DNA，隨后進行PCR檢測，實驗步驟根據相關說明書進行，用ABI 7500 Fast PCR儀自帶軟件(pplied Bio Systems公司)進行結果判讀；質控樣品內參照β-actin的Ct值≤32.1以保證樣本中DNA足量，SEPT9 Ct值<45.0為陽性結果；3次平行的PCR中有2次及以上陽性則判定為陽性，反之為陰性，其他結果無效。

1.2.2隨訪：對CRC患者隨訪3年，時間截至2021年12月31日，觀察患者預后，發生復發、死亡則為預后不良，反之為預后良好。

1.3觀察指標 對比不同人群中CEA、HSP60、SEPT9表達情況；對比不同分期及預后CRC患者CEA、HSP60、SEPT9表達情況；分析CEA、HSP60、SEPT9對CRC早期診斷價值。

2 結果

2.1不同人群中CEA、HSP60、SEPT9表達情況 CRC組CEA、HSP60水平及SEPT9陽性率均高于對照組(P<0.01)。見表1。

表1 不同人群CEA、HSP60、SEPT9表達情況

2.2不同分期CRC患者CEA、HSP60、SEPT9表達情況 Ⅲ～Ⅳ期CEA、HSP60水平及SEPT9陽性率均高于Ⅰ～Ⅱ期(P<0.01)。見表2。

表2 不同分期CRC患者CEA、HSP60、SEPT9表達情況

2.3不同預后患者CEA、HSP60、SEPT9表達情況 隨訪3年，81例均未失訪，其中預后良好52例，預后不良29例。預后不良組CEA、HSP60水平及SEPT9陽性率均高于預后良好組(P<0.01)。見表3。

表3 不同預后CRC患者CEA、HSP60、SEPT9表達情況

2.4CEA、HSP60、SEPT9對CRC早期診斷價值 依據ROC曲線可知，三者聯合檢測對CRC早期診斷敏感度和特異度分別為80.20%、74.40%；AUC為0.765(95%CI：0.669，0.833)，明顯高于三者單獨檢測。見表4。

表4 CEA、HSP60、SEPT9對CRC早期診斷價值

3 討論

CEA廣泛應用于消化道腫瘤的診斷、監測及預后評估[6-8]。CEA在胚胎時期通過肝胰、腸道合成，含量極少，在以往研究中發現CEA在消化道及內胚層惡性腫瘤組織中陽性率高。本研究結果顯示，CRC組中CEA表達水平升高，且分期越高、預后不良者CEA水平更高，提示CEA可為CRC早期診斷及預后評估提供一定參考信息[9]。而腫瘤標志物的缺點在于特異度較差，因此臨床中建議多種腫瘤標志物聯合檢測，進而為臨床早期診斷提供更全面參考信息[10-11]。

HSP60屬于高度保守的蛋白質家族，是具有多種功能的大分子物質，其可參與蛋白質的折疊、轉移，同時在細胞增殖、凋亡、信號傳導中也有一定的作用[12]。有研究表明，在正常細胞中HSP60幾乎不釋放，在宮頸癌、前列腺癌等腫瘤中其水平明顯升高[13]。本研究也表明，CRC患者中HSP60表達明顯升高，且隨著分期增加其表達水平也越高，與以往研究結果相符[14]。提示HSP60可能與CRC的發生與發展關系密切。本研究還顯示，預后不良患者中HSP60表達也高于預后良好者，提示HSP60可能為CRC患者預后評估提供參考。CRC患者中SEPT9基因甲基化可導致基因在復制、轉錄、翻譯過程中出現一定的變化，對SEPT9蛋白復合物的構成造成影響，進而癌變[15]。有研究表明，SEPT9在子細胞胞質的最終分離中有重要的作用，其基因異常可影響細胞分裂[16]。以往研究發現，檢測外周血SEPT9基因甲基化對CRC的診斷準確性高[17]。本研究發現，CRC患者SEPT9陽性率高于對照組，且在Ⅲ～Ⅳ期與預后不良CRC患者中陽性率明顯升高，與以往研究結果相符[18-19]，提示隨著CRC病程進展，腫瘤細胞壞死所釋放的甲基化SEPT9基因也被釋放入外周血中，因此SEPT9檢出率明顯升高。本研究中，CEA、HSP60、SEPT9聯合檢測可有效提高對CRC早期診斷的敏感度與特異度，提示聯合檢測可有效提高對CRC診斷效能。

綜上所述，相比CEA、HSP60、SEPT9單獨檢測，CEA、HSP60、SEPT9聯合檢測可提高CRC早期診斷效能，同時對患者預后評估也有一定的參考價值。