唑蟲酰胺·氰氟蟲腙高效液相色譜法分析

馬 濤，劉 哲

(1.山西省檢驗檢測中心(山西省標準計量技術研究院)，山西 太原 030025；2.吉林省農業技術推廣總站，吉林 長春 130033)

1 前言

唑蟲酰胺(Tolfenpyrad)最早由日本農藥株式會社于2009年在我國登記，分子式為C21H22ClN3O2，CAS登錄號129558-76-5。易溶于丙酮和甲醇，難溶于水，水中較穩定。是一種新型吡唑酰胺類殺蟲殺螨劑，它的主要作用機制是阻止昆蟲的氧化磷酸化作用，還具有殺卵、抑食、抑制產卵及殺菌作用，殺蟲譜很廣，對各種嶙翅目、半翅目、甲蟲目、膜翅目、雙翅目害蟲及螨類具有較高的防治效果，觸殺為主，無內吸性[1-2]。氰氟蟲腙(Metaflumizone)，最早由巴斯夫歐洲公司于2008年在我國取得登記，分子式為C24H16F6N4O2，CAS登錄號139968-49-3。水中溶解度低，可溶于乙腈，易溶于丙酮、乙酸乙酯，在水和光中迅速分解。氰氟蟲腙是一種縮氨基脲類殺蟲劑，作用機制獨特，本身具有殺蟲活性，不需要生物激活，對鱗翅目和鞘翅目幼蟲具有明顯的防治效果，如常見的稻縱卷葉螟、甜菜夜蛾、棉鈴蟲、甘藍夜蛾、小菜蛾、小地老虎、水稻二化螟等，另外，該藥用于防治螞蟻、白蟻、紅火蟻、蠅及蟑螂等非作物害蟲方面也很有潛力[3]。這兩種有效成分殺蟲譜可以很好地互補，有廣泛的應用前景。

截止2022年初，國內尚無唑蟲酰胺和氰氟蟲腙混配制劑取得農藥登記證，據了解，有若干農藥生產企業正在辦理相關產品登記事宜。國內該混劑的分析方法尚未見報道，本文介紹了一種用高效液相色譜法同時測定唑蟲酰胺和氰氟蟲腙，該方法操作比較簡單、快速，分離效果好，準確度、精密度和線性關系均能滿足定量分析要求，是一種比較實用的方法。

2 試驗部分

2.1 試劑和溶液 超純水(電阻率：18.2 MΩ.cm，25℃)；乙腈(色譜純)；氰氟蟲腙標樣98.7%；唑蟲酰胺標樣97.4%；30%唑蟲酰胺·氰氟蟲腙懸浮劑(氰氟蟲腙20%、唑蟲酰胺10%)。

2.2 儀器 Agilent 1200 液相色譜儀(配原廠色譜工作站、在線脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、DAD檢測器)；梅特勒 AG 285 十萬分之一電子天平；過濾器(0.45μm)；Millipore QG超純水機；超聲波清洗機；常用玻璃器皿。

2.3 液相色譜條件 色譜柱：Agilent TC-C18，250mm×4.6mm，粒徑5μm不銹鋼柱；柱溫：30℃；流動相：乙腈：水(0.1%磷酸)=80：20(V/V)[1-4]；流速：1.0mL/min；檢測波長：280nm；進樣量：5.0μL。在上述條件下，唑蟲酰胺和氰氟蟲腙的保留時間分別約為6.1min和5.6min(圖1、圖2)。

圖1 氰氟蟲腙和唑蟲酰胺混標液相色譜圖

圖2 試樣液相色譜圖

2.4 測定步驟

2.4.1 標準溶液的配制 稱取氰氟蟲腙標準品0.1g(精確至0.000 02g)、唑蟲酰胺標準品0.05g(精確至0.000 02g)于同一100mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，超聲振蕩10min，靜置到室溫，搖勻，用 0.45μm 孔徑過濾器過濾入進樣小瓶中，待用。

2.4.2 試樣溶液的配制 準確稱取0.5g(準確至0.000 2g)的試樣，置于100mL容量瓶中，用乙腈溶解并稀釋至刻度，超聲振蕩10min，靜置到室溫，搖勻，用 0.45μm 孔徑過濾器過濾入進樣小瓶中，待用。

2.4.3 測定 在上述操作條件下，待儀器基線穩定后，連續注入數針標樣溶液，直至相鄰2針標樣溶液的響應值相對變化≤1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

2.4.4 計算 采用外標法計算。將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標樣中的氰氟蟲腙(或唑蟲酰胺)峰面積分別進行平均。試樣中氰氟蟲腙(或唑蟲酰胺)的質量分數X(%)按下式計算：

式中：

A1—標樣溶液中氰氟蟲腙(唑蟲酰胺)峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中氰氟蟲腙(唑蟲酰胺)峰面積的平均值；

m1—標樣氰氟蟲腙(唑蟲酰胺)的質量，g；

m2—試樣的質量，g；

p—標樣氰氟蟲腙(唑蟲酰胺)的質量分數，%。

3 結果與討論

3.1 流動相的選擇 為確保待測組分與雜質完全分離，分別用乙腈/0.1%磷酸溶液不同比例進行了試驗。結果表明，在乙腈：水=80：20(V/V)時，各待測組分與雜質能得到理想的分離，且基線平穩、峰形對稱，分析時間也較短。

3.2 檢測波長的選擇 分別對某一濃度氰氟蟲腙和唑蟲酰胺標準溶液進行分析，利DAD檢測器進行光譜掃描，得到二者的紫外吸收光譜圖(圖3、圖4)，可看出二者的最大吸收波長約為230nm，可選擇波長范圍較寬。經過對照實驗，選擇波長在280nm處時，各雜質不影響測定，2個待測組分分離度和響應滿足要求，且遠離低波長紫外區。

圖3 唑蟲酰胺紫外吸收譜圖

圖4 氰氟蟲腙紫外吸收譜圖

3.3 精密度測定 將同一樣品分別稱取6份，分別測定，結果經統計分析，唑蟲酰胺和氰氟蟲腙的標準偏差為0.064 807和0.044 907，變異系數分別為0.65%和0.23%，(表1)。

表1 分析方法的精密度試驗結果

3.4 準確度測定 采取添加回收率測定方法來計算本方法的準確度，稱取5份已知含量的試樣，分別加入一定量的氰氟蟲腙和唑蟲酰胺標樣，在上述2.3色譜條件下進行測定，測得唑蟲酰胺的平均回收率為99.16%，氰氟蟲腙的平均回收率為98.76%，(表2)。

表2 分析方法的準確度試驗結果

3.5 線性關系的測定 將已知含量的標樣分別配制成一系列已知濃度的梯度溶液(包含分析方法中的檢測濃度)，以濃度(mg/L)為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制相關曲線。唑蟲酰胺線性方程為：y =1.704 3x+19.141，線性范圍內，相關系數R2為：0.999 9，r=0.999 5；氰氟蟲腙線性方程為：y =10.799x+653.13，線性范圍內，相關系數R2為：0.999 8，r=0.999 0，(表3)。

表3 分析方法的線性相關性試驗結果

3.6 方法特異性測定 方法特異性是指分析方法中特定組分產生的特定信號，即在其他成分(如雜質、添加劑等)可能存在時，采用的分析方法能夠準確測定目標組分(有效成分、雜質等)特性的能力[5]。為確證本方法分析2種組分的特異性，用二極管陣列檢測器分別對唑蟲酰胺和氰氟蟲腙標準品及試樣峰的純度進行檢測。經檢測，2種有效成分標樣和樣品的純度因子均>999.0，符合要求，結果(圖5、圖6)。

圖5 唑蟲酰胺標樣(左)和試樣(右)峰純度光譜圖

圖6 氰氟蟲腙標樣(左)和試樣(右)峰純度光譜圖

3.7 方法各項指標測定結果判定 按照NY/T 2887-2016《農藥產品質量分析方法確認指南》[5]要求，判定上述所得線性關系、精密度、準確度是否符合標準要求。對于30%唑蟲酰胺·氰氟蟲腙懸浮劑產品，線性系數要求均>0.99；根據Horwitz方程(2(1-0.5logC)×0.67，此處，氰氟蟲腙C=0.20，唑蟲酰胺C=0.10)分別計算得到，氰氟蟲腙和唑蟲酰胺分析方法精密度要求變異系數分別<1.71%和1.90%；添加回收率要求在98%～102%之間才合乎要求。與上述3.3、3.4、3.5結果值相比較可知，該方法線性相關系數、精密度和準確度數值均符合要求。感興趣組分峰純度指數均>999.0，滿足方法特異性要求，也不存在其他非分析物的干擾。

4 結論

試驗結果表明，本方法的準確度、精密度較高，特異性和一定質量濃度范圍內的線性關系良好，具有操作簡便、快速、結果準確，分離效果好等特點，是一種比較實用的方法。