MiRNA在復發性流產機制中的研究進展*

張雪梅 綜述，王 虎，李佳平，石 琪△ 審校

(1.川北醫學院附屬醫院遺傳與產前診斷中心，四川 南充 637000；2.川北醫學院附屬醫院婦產科，四川 南充 637000)

MiRNA是一類廣泛存在于真核生物，高度保守的內源性非編碼RNA分子，其長度為18～25個核苷酸單鏈。MiRNA自身不編碼蛋白質，通過與靶mRNA的3′端非編碼區完全或不完全互補配對結合，降解或抑制該mRNA的翻譯，從而在轉錄后或翻譯水平調控靶基因的表達，最終影響蛋白質編碼，從RNA水平發揮其主要的生物功能。MiRNA參與調節胚胎發育，細胞發育、增殖、凋亡、分化，應激反應等多個生理過程[1-3]。

復發性流產(RAS)是指與同一性伴侶連續發生3次及以上的自然流產，RAS大多數為早期流產，少數為晚期流產[4]。RAS病因復雜，早期RAS常見原因有胚胎染色體異常、免疫功能異常、黃體功能不全、甲狀腺功能低下等因素，但仍有部分RAS病因不明，發病機制不清楚，因此使之成為婦產科中較棘手的疾病[4]。近年來隨著分子生物學的不斷發展，越來越多的研究發現miRNA在RAS發病機制中起著重要作用，從miRNA基因水平認識到RAS具有遺傳易感性，其發生發展與葉酸代謝水平、細胞凋亡、子宮內膜容受性及母胎界面環境關系密切，因此系統探討miRNA在RAS發病機制中的研究進展，有望為RAS病因提供更好的思路、理論依據，為其預防、治療提供新的靶點。

1 MiRNA基因多態性

1.1MiRNA調控RAS遺傳易感性 MiRNA在轉錄后基因表達調控中起關鍵作用，其基因編碼序列單核苷酸(SNP)存在多態性，多項研究認為與RAS發生相關。如構建雙基因座單倍型，使pri-miR-125a兩個常見的多態性基因(AT、GC)作用于miR-125a，使其表達下調，能抑制靶基因LIFR和ERBB2的表達功能，使胚胎植入和蛻膜化發生改變，最終促進RAS的發生[5]。MiR-423編碼區的SNP位點rs6505162C>A與RAS相關，通過雙熒光素酶測定方法證實，pre-miR-423中的CC/TT單倍型通過降低miR-423的表達，調控其靶基因 MESDC1的水平，從而增強了RAS的遺傳易感性[6]。MiR-323b編碼區的rs56103835T>C基因型增加RAS的風險，WANG等[7]同樣用雙熒光素酶測定方法證實，pre-miR-323b中的 TC 單倍型，影響miR-323b的成熟，下調其靶基因Pax8表達，促進細胞凋亡，增加流產風險。有報道稱，miR-10a的rs3809783編碼區A等位基因比T等位基因更能抑制細胞增殖和遷移能力，當A>T時出現RAS的風險增大[8]。有研究認為，miR-149T>C,miR-150G>A及miR-1179A>T多態性在胚胎著床過程中調控基因表達，是RAS的遺傳決定因素。由此可見miRNA與RAS遺傳易感性關系密切[9-10]。

1.2MiRNA影響RAS葉酸代謝 RAS與血液同型半胱氨酸(Hcy)升高相關，認為Hcy可作為風險標志物，RAH等[11]發現，miR-27a的單倍型基因A>G多態性能使血液Hcy、葉酸水平升高，不僅能降低RAS的風險，還能改變妊娠結局。研究發現，miR-604A>G 和miR-938G>A多態性調控亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)的水平，與RAS存在顯著相關性[12]。有報道稱，葉酸與miRNA存在相互作用，miRNA能影響葉酸水平，而低水平葉酸能上調miR-222-3p、miR-141-3p 和 miR-34b-5p的表達，改變靶基因的表達導致胎盤功能障礙，出現流產等不良妊娠結局[13]。

通過基因多態性的研究，RAS患者進行基因遺傳分析，對病因有新的認識，對疾病的預測及風險評估提供了新思路，因此，對RAS患者進行miRNA基因多態性檢測，可能更有針對性地改善妊娠結局，能更好地預測妊娠結局，在時間和經濟上減少損失。同時指導我們在基因多態性方面需有更深入的研究，從分子遺傳學方面改善RAS患者的妊娠結局。

2 MiRNA調控細胞凋亡

MiRNA的促細胞凋亡功能在RAS中有較多研究，通過作用不同的靶基因調控不同的信號通路，最終調節滋養細胞的增殖及凋亡，在RAS事件中起重要作用。如miR-365上調可使其直接靶標SGK1下調，使相應蛋白表達水平改變，從而調控滋養細胞周期的進程和凋亡，最終促進了RAS的發生。因此，有學者考慮將miR-365作為RAS的預后生物標志物和治療靶標的潛在效用[14]。通過對臨床標本的分析及體外研究，又發現miR-520表達上調時，其作用的靶因子PARP1降低，促進了DNA損傷誘導的細胞凋亡，以調節RAS的進展[15]。WANG等[16]通過對差異表達的大量miRNA的靶基因進行GO分析，發現這些靶基因可通過KEGG、ErbB、黏著斑、p53等多種信號傳導途徑發揮作用，參與滋養細胞增殖、凋亡，甚至血管發育和血管生成等調節。一些常見的miRNA在RAS機制中具體的靶向促細胞凋亡途徑見表1。

表1 MiRNA在RAS中促凋亡途徑

3 MiRNA影響RAS子宮內膜容受性

良好的子宮內膜容受性是胚胎植入成功的先決條件，因此子宮內膜容受性差是胚胎著床失敗的主要原因之一。AKBAR等[26]通過動物實驗發現下調miR-183-5p能介導子宮內膜細胞中CTNNA2的水平升高，從而改變雌激素水平，影響子宮內膜容受性，其認為miRNA通過轉錄后修飾在子宮內膜容受性中發揮著重要作用。研究發現miR-200c 靶向作用于FUT4，抑制其表達，導致子宮內膜容受性功能障礙；miR-200c 降低糖蛋白 CD44 上的α1，3-巖藻糖基化，使 Wnt/β-catenin 信號通路失活，影響子宮內膜容受性，出現反復流產[27]。因此，miRNA可調節子宮內膜容受性，影響妊娠結局，導致RAS。

4 MiRNA影響RAS母胎界面環境

4.1MiRNA與胎盤氧化應激 胎盤是一種母胎屏障，為發育中的胎兒提供其所需的所有營養，miRNA在胎盤發育和循環建立中發揮重要調節作用。近年來，母胎醫學成為研究熱點，發現miRNA在母胎界面的組織中存在表達差異，也有學者展開了miRNA在母胎界面的調節與RAS的研究[28]。

研究發現miRNA除了在滋養細胞增殖、遷移和凋亡過程中有重要作用，同時通過氧化應激反應調節胎盤的發育，影響母胎界面循環建立，發生特異性改變，導致許多胎盤源性疾病的發生[29-30]。ALEXANDER等[31]認為miRNA影響母胎界面平衡可導致RAS，如miR-335、miR-29b、miR-182、miR-338、miR-144等，通過調控抗氧化基因，使母胎界面抗氧化系統的平衡被破壞，發生氧化應激反應，影響滋養細胞的增殖，促進RAS的發生。MiRNA調控滋養細胞氧化應激，影響母胎界面的內環境平衡，增加流產的風險。

4.2MiRNA與免疫耐受 人類白細胞抗原G(HLA-G)作為一種促進妊娠耐受的分子，被認為在母胎界面滋養細胞中發揮重要作用，是確保成功妊娠的關鍵指標之一，參與了妊娠期母胎界面免疫反應的重要編程，然而HLA-G的轉錄后水平受miRNA調節[32]。WANG等[33]通過研究發現，miR-133a參與了孕婦的免疫耐受，為了探索RAS的發病機制，進一步研究了miR-133a對HLA-G表達的調節，結果證實miR-133a與HLA-G 3′非轉錄區(UTR)結合，相互作用，最終miR-133a通過減少翻譯調節HLA-G表達，促進RAS的發生。另外，在低氧條件下，miR-365的表達顯著上調，其靶向HLA-G 3′UTR，抑制HLA-G表達，打破母胎界面免疫耐受的平衡，影響胎盤發育[34]。

自然殺傷(NK)細胞作為關鍵的調節細胞，對母胎界面耐受有重要影響，上調miR-30e可通過靶向PRF1降低PB-NK細胞和D-NK細胞的細胞毒性，從而抑制輔助性T細胞1(Th1)耐受表型并誘導Th2免疫優勢，可能有助于創造母胎界面的微免疫耐受環境[35]。MiR-155是對妊娠免疫適應的關鍵調節因子，通過作用調節性T細胞實現強大的妊娠耐受性和防止胎兒丟失[36]。M1巨噬細胞是母胎界面的重要免疫細胞成分，miR-146a-5p靶向 M1 巨噬細胞調控滋養細胞功能，在RAS機制中發揮重要功能[37]。

綜上所述，RAS發病機制復雜，但從miRNA角度已有了些研究，從基因水平到分子生物水平，從研究成熟的細胞凋亡途徑到目前研究熱度較高的胎盤源性疾病角度，不僅指導了對RAS的深入認識，豐富了產前診斷內容，而且對疾病預測和輔助生殖的風險評估提供了新的思路，部分miRNA甚至有望成為RAS的干預靶點。MiRNA在腫瘤等其他疾病方面已有較多研究，并能起到預防性治療，但在產科RAS方面仍需要更多的研究及探索，希望能對其治療有一定突破，真正解決我們對其發病機制研究的初衷，將其與精準醫學結合，給更多RAS家庭帶來福音。