血清aβ2GP1在自身免疫性卵巢早衰患者中的表達及其與性激素水平的關系*

余 建，周 婷，湯 娟，韓小梅

長沙市中醫醫院/長沙市第八醫院婦產科，湖南長沙 410100

卵巢早衰指女性卵巢在40歲之前失去正常功能所致的疾病，是近些年來婦科較為多見的疾病之一[1]。有30%患者與自身免疫異常相關，自身免疫性卵巢早衰患者常因為自身免疫系統失調并生成相應的識別卵巢抗體，抗體和抗原反應破壞卵巢，最終引起不孕，患者通常出現繼發性閉經、不孕不育以及低雌激素等癥狀，臨床上常常以血清卵泡刺激素(FSH)為金標準[2]。研究認為，免疫因素是卵巢早衰的重要致病因素，已成為了臨床上關注焦點[3]。血清抗β2-糖蛋白1抗體(aβ2GP1)是一種異質性抗體，有研究報道，aβ2GP1是生殖免疫的重要檢測指標，其在自身免疫性卵巢早衰的發生、發展過程中具有重要的意義[4-5]。因此，本研究選取本院收治的114例卵巢早衰患者以及62例同期體檢健康女性作為研究對象，探討血清aβ2GP1在自身免疫性卵巢早衰患者中的表達情況及其與性激素水平的相關性。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2017年5月至2020年1月收治的114例卵巢早衰患者及62例同期體檢健康女性作為研究對象。將其中62例自身免疫性卵巢早衰患者作為試驗組，52例非自身免疫性卵巢早衰患者作為對照組，62例體檢健康女性作為健康組。試驗組年齡23～33歲、平均(28.98±1.23)歲，體質量指數(BMI)19～24 kg/m2、平均(22.23±1.42)kg/m2；對照組年齡24～33歲、平均(28.43±1.21)歲，BMI 19～24 kg/m2，平均(22.38±1.24)kg/m2；健康組年齡24～33歲、平均(28.52±1.19)歲，BMI 19～24 kg/m2、平均(22.42±1.34)kg/m2。3組年齡、BMI差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。卵巢早衰患者納入標準：(1)試驗組患者符合《中華婦產科學》[6]中自身免疫性卵巢早衰診斷標準；(2)患者出現4個月以上閉經，且伴有圍絕經期綜合征；(3)患者年齡<40歲；(4)腹腔鏡檢查見子宮和卵巢縮小，卵巢無卵泡，皮髓質比例失調；(5)患者陰道超聲發現雙卵巢切面無大卵泡，無排卵征象；(6)試驗組患者存在自身免疫性疾病。排除標準：(1)合并嚴重凝血功能、肝腎功能異常患者；(2)近期接受激素類藥物治療患者；(3)存在生殖系統或者內分泌系統疾病患者；(4)臨床資料不完整患者。

1.2方法

1.2.1aβ2GP1檢測 試驗組及對照組于入院次日，健康組于體檢當日抽取空腹靜脈血2.5 mL，以3 500 r/min離心10 min，分離血清。采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)及江蘇浩歐博生物醫藥股份有限公司的相應試劑盒檢測血清aβ2GP1-免疫球蛋白(Ig)A、aβ2GP1-IgM、aβ2GP1-IgG的表達情況。具體方法：取緩沖液稀釋血清標本，隨后將稀釋液10倍濃縮處理，充分振蕩搖勻，采用吸管將酶結合物與緩沖稀釋液1∶10混合處理，并且處理后在4 h內使用酶結合物，隨后使用緩沖液沖洗干凈，并予以10倍濃縮，采用干凈的吸管將緩沖液吸出并與蒸餾水進行1∶10稀釋處理，同時將處理后的液體保持在5 ℃左右。向對應的微孔加入100 μL標準品、陽性對照物、陰性對照物和稀釋后的標準品，隨后在室溫內進行溫育，持續30 min。洗板后使其與酶結合物溫育，方法與上述一致，再次進行洗板，將100 μL底物開始微孔溫育，持續15 min，隨后向所有微孔內加入終止液，采用邁瑞醫療有限公司的MR-96A酶標儀進行比色處理，根據試劑盒說明書判定aβ2GP1-IgA、aβ2GP1-IgM、aβ2GP1-IgG檢測結果(<12 RU/mL為陰性，≥12 RU/mL為陽性)。

1.2.2性激素水平檢測 所有研究對象均抽取空腹靜脈血2.5 mL，以3 500 r/min離心10 min，分離血清。采用固相ELISA及上海酶聯生物科技有限公司血清雌二醇(E2)ELISA試劑盒檢測E2，采用ELISA及上海晶抗生物工程有限公司卵泡刺激素(FSH)ELISA試劑盒檢測FSH，采用膠體金免疫層析法及河南維銳生物科技有限公司的黃體生成素(LH)試劑盒檢測LH。

1.2.3觀察指標 比較3組血清aβ2GP1陽性率和性激素(E2、FSH、LH)水平，分析血清aβ2GP1陽性率與性激素的相關性，分析發生自身免疫性卵巢早衰的獨立危險因素。

2 結 果

2.13組血清aβ2GP1陽性率比較 3組的aβ2GP1-IgA陽性率差異無統計學意義(P>0.05)；3組的aβ2GP1-IgM和aβ2GP1-IgG陽性率差異均有統計學意義(P<0.05)，其中試驗組的aβ2GP1-IgM和aβ2GP1-IgG陽性率均明顯高于對照組和健康組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 3組血清aβ2GP1陽性率比較[n(%)]

2.23組性激素水平比較 3組患者E2、FSH和LH水平差異均有統計學意義(P<0.05)；對照組和健康組E2、FSH和LH水平差異無統計學意義(P>0.05)；與對照組和健康組比較，試驗組E2、LH水平降低，FSH水平升高，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 3組性激素水平比較

2.3血清aβ2GP1陽性率與性激素水平的相關性 Pearson相關分析結果顯示，aβ2GP1-IgM和aβ2GP1-IgG的陽性率與患者E2、LH水平均呈負相關(P<0.05)，與FSH水平均呈正相關(P<0.05)。見表3。

表3 血清aβ2GP1陽性率與患者性激素水平的相關性

2.4發生自身免疫性卵巢早衰的獨立危險因素分析 以是否發生自身免疫性卵巢早衰作為因變量，以血清aβ2GP1、年齡、E2、LH、FSH作為自變量，建立Logistic回歸模型，分析結果顯示，血清aβ2GP1陽性，E2、LH水平降低及FSH水平升高均是發生自身免疫性卵巢早衰的獨立危險因素(OR>1，P<0.05)。見表4。

表4 發生自身免疫性卵巢早衰的獨立危險因素分析

3 討 論

卵巢早衰時指女性在40歲之前因為機體出現某種原因而造成的卵巢功能減退，臨床上可出現閉經、不孕以及雌激素水平異常，同時促性腺激素水平增加。目前，卵巢早衰的發病機制并不明確，可能與盆腔炎、化學治療、手術因素等有關[7-8]，也有研究認為可能與患者自身免疫性功能障礙有關[9]。近些年來，生殖免疫學研究逐漸深入，發現生育力降低、胚胎的丟失等可能與患者自身免疫功能障礙存在密切關系[10]；血清aβ2GP1被認為在復發性流產和不孕不育癥的發生、發展過程中發揮著重要的作用[11-12]。因此，本研究檢測卵巢早衰患者和同期體檢健康女性血清aβ2GP1并進行對比，為臨床的診治提供參考。

國外有學者發現自身免疫性卵巢功能衰退存在不同階段性的卵巢功能異常，這與患者自身免疫障礙緊密相關[13]。毛小莉等[14]認為卵巢早衰患者常合并一種以上的自身免疫性疾病，所以對卵巢早衰患者自身免疫抗體進行檢測較為重要。血清aβ2GP1是一種針對磷脂結合蛋白的異質性抗體，主要將β2糖蛋白1作為靶抗原[15]。本研究顯示，試驗組aβ2GP1-IgM和aβ2GP1-IgG的陽性率均明顯高于對照組和健康組(P<0.05)，表明血清aβ2GP1在自身免疫性卵巢早衰患者的發病中發揮著重要的作用。血清aβ2GP1能夠與內皮細胞、單核細胞、滋養層細胞等多種細胞表面受體結合，介導細胞炎癥反應、凝血功能障礙從而引發病理性改變[16]。本研究發現，與對照組和健康組比較，試驗組E2、LH水平降低(P<0.05)，FSH水平升高(P<0.05)。可能原因：卵巢早衰患者因卵巢萎縮，引起血管阻力升高以及血流灌注降低，進而導致管壁順應性下降，引發卵巢缺血、缺氧等，使E2水平明顯降低；卵巢血管收縮和竇狀卵泡產生，導致血管網和卵巢血流的改變，引起LH以及FSH水平異常[17]。卵巢早衰患者血液循環內可能存在針對卵巢的抗體，同時可能因為機體免疫反應出現改變，抑制了卵泡反應。相關性分析顯示，aβ2GP1-IgM和aβ2GP1-IgG的陽性率與患者E2、LH水平均呈負相關(P<0.05)，與FSH水平均呈正相關(P<0.05)，表明血清aβ2GP1與患者性激素水平存在一定的相關性。血清aβ2GP1能夠干擾活化的蛋白C，促進凝血因子的形成，從而促進血栓的生成，同時血清aβ2GP1能夠介導抗磷脂抗體結合到細胞膜上，對于抗磷脂抗體綜合征的發病具有重要的促進作用[18]。本研究采用Logistic回歸模型分析，發現血清aβ2GP1陽性是患者發生自身免疫性卵巢早衰的獨立危險因素(OR=1.762，P<0.05)，提示血清aβ2GP1可以作為自身免疫性卵巢早衰的檢測指標。E2能夠以協調作用的方式影響FSH以及LH水平的變化，在E2高水平時，又可對下丘腦和腺垂體進行抑制，從而降低FSH和LH水平，是一種正負反饋的影響。本研究顯示，血清E2、LH水平降低及FSH水平升高是患者發生自身免疫性卵巢早衰的獨立危險因素(OR=2.335、2.149、2.629，P<0.05)，這也提示血清E2、LH、FSH可以作為自身免疫性卵巢早衰的檢測指標。但需要注意的是，卵巢早衰患者可能會存在短暫的卵巢功能改善，甚至可出現再次排卵，會引起性激素的波動和異常，因此，對于性激素需要進行多次檢測[19-20]。本研究檢測血清aβ2GP1，發現其陽性率在自身免疫性卵巢早衰患者中具有重要的意義，但本研究樣本量較少，可能導致結果存在一定偏差，需擴大樣本量進一步研究。

綜上所述，血清aβ2GP1在自身免疫性卵巢早衰患者中呈高表達，與患者性激素水平密切相關，是發生自身免疫性卵巢早衰的獨立危險因素。