PD-L1、MMP-9、IMP3 表達(dá)水平與乳腺癌病理分期、組織學(xué)分級(jí)及預(yù)后的關(guān)系研究

楊 靜，王 新

（天津市西青醫(yī)院病理科，天津 300380）

乳腺癌（breast cancer）為女性多發(fā)惡性腫瘤，其侵襲及轉(zhuǎn)移過(guò)程較為復(fù)雜，對(duì)患者預(yù)后生存造成了嚴(yán)重影響[1，2]。多項(xiàng)報(bào)道指出[3，4]，分子病理診斷對(duì)癌癥早期診斷、預(yù)后評(píng)估具有重要價(jià)值。其中，程序性死亡受體配體-1（PD-L1）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）、胰島素樣生長(zhǎng)因子ⅡmRNA 結(jié)合蛋白3（IMP3）等物質(zhì)的異常表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的進(jìn)展、浸潤(rùn)及擴(kuò)散存在密切相關(guān)。PD-L1 屬于Ⅰ型跨膜蛋白，在多種惡性腫瘤中均有表達(dá)，與腫瘤的免疫逃逸存在密切相關(guān)，可參與腫瘤進(jìn)展[5]。MMP-9 則屬于基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）的常見(jiàn)種類(lèi)，可降解各種細(xì)胞外基質(zhì)成分，與乳腺癌的局部侵襲及遠(yuǎn)處擴(kuò)散存在一定相關(guān)性[6]。IMP3 是一種新識(shí)別的信使RNA 結(jié)合蛋白，可通過(guò)與不同信使RNA 結(jié)合，調(diào)控mMRA 的轉(zhuǎn)錄過(guò)程，進(jìn)而影響細(xì)胞的惡性潛能[7]。現(xiàn)階段，關(guān)于以上指標(biāo)在乳腺癌組織中表達(dá)狀態(tài)的研究較少。基于此，本研究結(jié)合2016 年7 月-2021 年7 月天津市西青醫(yī)院收治的60 例乳腺癌患者，觀察乳腺癌組織中PD-L1、MMP-9、IMP3 表達(dá)水平與病理分期、組織學(xué)分級(jí)及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2016 年7 月-2021 年7 月天津市西青醫(yī)院收治的60 例乳腺癌患者為研究對(duì)象，患者年齡22～56 歲，平均年齡（45.76±5.14）歲；組織分型：管腔A 型13 例，管腔B 型14 例，HER-2 過(guò)表達(dá)型9 例，三陰型24 例；TNM 分期：Ⅰ期15 例，Ⅱ期28 例，Ⅲ期11 例，Ⅳ期6 例；手術(shù)方式：根治術(shù)54 例、保乳術(shù)6 例。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)，患者均知情自愿參加并簽署知情同意書(shū)。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)術(shù)后病理診斷為乳腺癌；②女性；③術(shù)前未進(jìn)行放、化療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤者；②病歷資料不全者；③診斷不明者；④急慢性感染者。

1.3 方法 免疫組化檢測(cè)法：所有病理樣本均經(jīng)3.7%中性甲醛液固定，行常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋、3 μm 切片操作，經(jīng)二甲苯與梯度乙醇脫水后，以蘇木精對(duì)比色1～3 min，最后采用中性樹(shù)膠封片。采用全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)（Leica BOND-MAX）行免疫組化染色，最后在顯微鏡下進(jìn)行閱片。所有步驟嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，采用PBS 代替Ⅰ抗作為陰性對(duì)照。鼠抗人PD-L1 單克隆抗體及試劑盒購(gòu)自Abcam 公司，鼠抗人MMP-9 單克隆抗體工作液購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，鼠抗人IMP3單克隆抗體工作液來(lái)自美國(guó)Dako 公司，按乳腺癌細(xì)胞包膜及包質(zhì)著色程度進(jìn)行評(píng)定：0 分（無(wú)著色）、1 分（淡黃色）、2 分（棕黃色）、3 分（黃褐色），按顯色細(xì)胞數(shù)占百分比進(jìn)行評(píng)定：0 分（＜5%）、1 分（5%～25%）、2 分（26%～50%）、3 分（51%～75%）、4 分（＞75%）；PD-L1、MMP-9 與IMP3 的陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)：陽(yáng)性細(xì)胞顯色深淺分?jǐn)?shù)×所占百分比分?jǐn)?shù)＞1 為陽(yáng)性，反之為陰性。

1.4 觀察指標(biāo) ①比較PD-L1、MMP-9、IMP3 在不同組織分型中的表達(dá)情況，包括管腔A 型、管腔B 型、HER-2 過(guò)表達(dá)型、三陰型；②比較PD-L1、MMP-9、IMP3 在不同病理分期中的表達(dá)情況，包括Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期；③比較PD-L1、MMP-9、IMP3 在不同組織學(xué)分級(jí)中的表達(dá)情況，其組織學(xué)分級(jí)評(píng)估[8]包括腺管形成程度、細(xì)胞核多形性、核分裂能力3 個(gè)方面，每項(xiàng)均為1～3 分，其組織學(xué)分級(jí)依據(jù)總分進(jìn)行評(píng)定：1 級(jí)（3～5 分）、2 級(jí)（6～7 分）、3 級(jí)（8～9 分）；④比較不同PD-L1、MMP-9、IMP3 表達(dá)的預(yù)后情況，采用乳腺癌預(yù)后指數(shù)（BCPI）[9]評(píng)定患者預(yù)后，總分4～19 分，分?jǐn)?shù)越高表示患者預(yù)后越差；⑤采用Spearman 相關(guān)性分析PD-L1、MMP-9、IMP3 表達(dá)與病理分期、組織學(xué)分級(jí)及預(yù)后的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 21.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料以（）表示，組間比較行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗(yàn)，兩變量間相關(guān)性采用Spearman 相關(guān)性分析，P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同組織分型中PD-L1、MMP-9、IMP3 的表達(dá)比較 三陰性乳腺癌的PD-L1、MMP-9、IMP3 陽(yáng)性率高于非三陰性乳腺癌（HER-2 過(guò)表達(dá)型、LuminalB 型、LuminalA 型），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 不同組織分型中PD-L1、MMP-9、IMP3 的表達(dá)比較[n（%)]

2.2 不同病理分期中PD-L1、MMP-9、IMP3 的表達(dá)比較 不同病理分期患者的PD-L1、MMP-9、IMP3陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其陽(yáng)性表達(dá)率由高至低依次為Ⅳ期＞Ⅲ期＞Ⅱ期＞Ⅰ期，見(jiàn)表2。

表2 不同病理分期中PD-L1、MMP-9、IMP3 的表達(dá)比較[n（%)]

2.3 不同組織學(xué)分級(jí)中PD-L1、MMP-9、IMP3 的表達(dá)比較 不同組織學(xué)分級(jí)中PD-L1、MMP-9、IMP3 的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），其陽(yáng)性表達(dá)率由高至低依次為3 級(jí)＞2 級(jí)＞1 級(jí)，見(jiàn)表3。

表3 不同組織學(xué)分級(jí)中PD-L1、MMP-9、IMP3 的表達(dá)比較[n（%)]

2.4 不同PD-L1、MMP-9、IMP3 表達(dá)的預(yù)后比較PD-L1、MMP-9、IMP3 陽(yáng)性患者的BCPI 評(píng)分高于陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表4。

表4 不同PD-L1、MMP-9、IMP3 表達(dá)的BCPI 評(píng)分比較（，分）

表4 不同PD-L1、MMP-9、IMP3 表達(dá)的BCPI 評(píng)分比較（，分）

2.5 PD-L1、MMP-9、IMP3 與病理分期、組織學(xué)分級(jí)及預(yù)后的關(guān)系 Spearman 相關(guān)性分析顯示，乳腺癌組織中PD-L1、MMP-9、IMP3 的表達(dá)與病理分期、組織學(xué)分級(jí)及BCPI 評(píng)分呈正相關(guān)（P＜0.05），見(jiàn)表5。

表5 PD-L1、MMP-9、IMP3 與病理分期、組織學(xué)分級(jí)及預(yù)后的關(guān)系

3 討論

PD-L1 為程序性死亡受體-1（PD-1）的配體之一，可參與機(jī)體免疫調(diào)節(jié)過(guò)程。在腫瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞及腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞均可表達(dá)PD-L1，由此可激活PD-1/PD-L1 信號(hào)通路，幫助腫瘤逃脫機(jī)體免疫系統(tǒng)的監(jiān)視與殺傷，引發(fā)免疫逃逸[10，11]。因此通過(guò)阻斷PD-1/PD-L1 通路，可促使腫瘤細(xì)胞重新受到T 淋巴細(xì)胞的免疫監(jiān)視，達(dá)到清除腫瘤細(xì)胞的目的。由此可見(jiàn)，PD-1/ PD-L1 信號(hào)通路在T 淋巴細(xì)胞激活中具有一定負(fù)性調(diào)節(jié)作用，現(xiàn)已成為當(dāng)前免疫靶向治療的重要研究方向[12]。MMP-9 屬于明膠酶的一員，多以酶原形式分泌產(chǎn)出，經(jīng)活化后可形成Ⅳ型膠原酶，對(duì)腫瘤胞外基質(zhì)中的Ⅳ、Ⅴ型膠原具有一定降解作用，可破壞基底膜屏障，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞浸出，進(jìn)而向周?chē)鞴俳?rùn)，引發(fā)癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移[13，14]。正常情況下，中性粒細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞等均可產(chǎn)生MMP-9，其活性可受到組織中MMPs 抑制劑的嚴(yán)格調(diào)控，以保持平衡狀態(tài)，而惡性腫瘤的出現(xiàn)打破這一調(diào)控平衡，導(dǎo)致MMP-9 表達(dá)增強(qiáng)，大大提高了細(xì)胞外結(jié)構(gòu)框架的降解作用，由此可引發(fā)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移，在惡性腫瘤細(xì)胞擴(kuò)散過(guò)程中具有重要參與作用[15，16]。IMP3 屬于腫瘤胚胎蛋白，在成人組織中表達(dá)較少，多集中于胚胎早期，對(duì)RNA 運(yùn)輸、穩(wěn)定、細(xì)胞增殖及遷移等均具有重要意義[17]。IMP3 在多種惡性腫瘤中均伴有高度表達(dá)，該物質(zhì)可結(jié)合胰島素樣生長(zhǎng)因子Ⅱ（IGFⅡ）的轉(zhuǎn)錄物，刺激細(xì)胞增殖，進(jìn)而改變腫瘤細(xì)胞的數(shù)量，以此調(diào)節(jié)其生物學(xué)活性，其表達(dá)高低與腫瘤的侵襲性、進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、預(yù)后等情況密切相關(guān)[18]。

本研究發(fā)現(xiàn)，三陰性乳腺癌的PD-L1、MMP-9、IMP3 陽(yáng)性率高于非三陰性乳腺癌（P＜0.05），提示PD-L1、MMP-9、IMP3 在三陰性乳腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)率最高。分析認(rèn)為，三陰性乳腺癌屬于免疫原性腫瘤，該類(lèi)型侵襲性高、分化差、轉(zhuǎn)移多，免疫逃逸較為明顯，因而PD-L1、MMP-9、IMP3 陽(yáng)性表達(dá)相對(duì)較高[19-21]。另外，PD-L1、MMP-9、IMP3 在不同病理分期及組織學(xué)分級(jí)中的陽(yáng)性表達(dá)率存在差異，且經(jīng)Spearman 相關(guān)性分析，乳腺癌組織中PD-L1、MMP-9、IMP3 陽(yáng)性表達(dá)與其病理分期、組織學(xué)分級(jí)呈正相關(guān)（P＜0.05），表明不同病理分期及組織學(xué)分級(jí)中的PD-L1、MMP-9、IMP3 表達(dá)存在明顯差異。分析原因：腫瘤微環(huán)境及腫瘤細(xì)胞可分泌干擾素γ 等炎癥細(xì)胞因子，以此誘導(dǎo)PD-L1 的表達(dá)；同時(shí)，腫瘤細(xì)胞中多種癌基因及信號(hào)通路的異常激活對(duì)PD-L1 也具有一定調(diào)控作用，隨著淋巴浸潤(rùn)程度及腫瘤擴(kuò)散風(fēng)險(xiǎn)的增大，其誘導(dǎo)作用隨之增強(qiáng)，PD-L1 表達(dá)更為顯著[22，23]。同時(shí)，乳腺癌組織侵襲及轉(zhuǎn)移程度與癌組織中細(xì)胞黏附分子表達(dá)下降存在密切相關(guān)，MMP-9 表達(dá)增強(qiáng)可加重腫瘤細(xì)胞基膜的破壞，因此其浸潤(rùn)及擴(kuò)散程度可從側(cè)面反映MMP-9 表達(dá)水平的高低，浸潤(rùn)、擴(kuò)散程度越大，MMP-9 表達(dá)越高[24]。IMP3 可通過(guò)調(diào)節(jié)IGFⅡ控制腫瘤的生物學(xué)行為，促使細(xì)胞黏附、細(xì)胞質(zhì)鋪展及侵襲偽足的形成，在腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移中具有重要作用，其病理分期及組織學(xué)分級(jí)可隨著IMP3 表達(dá)增強(qiáng)而加重[25]。此外，PD-L1、MMP-9、IMP3 陽(yáng)性患者的BCPI 評(píng)分高于陰性患者（P＜0.05），提示PD-L1、MMP-9、IMP3 陽(yáng)性表達(dá)的患者預(yù)后生存相對(duì)較差。經(jīng)Spearman 相關(guān)性分析可知，乳腺癌組織中PD-L1、MMP-9、IMP3 陽(yáng)性表達(dá)與BCPI 評(píng)分呈正相關(guān)（P＜0.05）。其中，BCPI 評(píng)分可用于評(píng)估總體生存概率及無(wú)瘤生存概率，其分?jǐn)?shù)高低與生存概率呈負(fù)相關(guān)[26]，結(jié)合本次結(jié)果說(shuō)明，PDL1、MMP-9、IMP3 陽(yáng)性表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后生存呈負(fù)相關(guān)，上述指標(biāo)可作為乳腺癌不良預(yù)后的重要預(yù)測(cè)指標(biāo)。邱志敏等[27]研究認(rèn)為，PD-L1 是影響乳腺癌患者生存的獨(dú)立不良預(yù)后因素，其陽(yáng)性表達(dá)越高，預(yù)示患者生存率越低，這與本次研究觀點(diǎn)高度一致。而MMP-9 則可反映腫瘤浸潤(rùn)、擴(kuò)散程度，與患者預(yù)后生存存在較大關(guān)系。IMP3 的表達(dá)與高組織學(xué)分級(jí)及腫瘤細(xì)胞的壞死密切相關(guān)，其表達(dá)高低亦可用于患者的預(yù)后評(píng)估。

綜上所述，PD-L1、MMP-9、IMP3 在三陰性乳腺癌組織中呈高表達(dá)，其陽(yáng)性表達(dá)與患者病理分期、組織學(xué)分級(jí)呈正相關(guān)，對(duì)患者預(yù)后生存具有一定的預(yù)測(cè)價(jià)值。