息肉切除術治療早期結直腸癌對患者血清中CEA、IL-2、MMP-2以及MMP-9水平的影響

郭 潔 方 玲

結腸直腸癌(CRC)是由遺傳和環境因素相互作用引起的非常異質的疾病[1]。 每年約有1235108人被診斷為CRC，每年約有609051人死于CRC[2-5]。研究表明，大腸息肉可能會發展成惡性腫瘤，因此，對其診斷和治療成為預防結直腸癌的關鍵之一[6]。早期選擇性切除結直腸息肉是預防結直腸癌的關鍵。已有研究表明，CEA,IL-2,MMP-2以及MMP-9水平在腫瘤Ⅰ、Ⅱ期患者與Ⅲ、Ⅳ期患者之間有顯著相關性[7]。鑒于此，本文旨在探討息肉切除術治療早期結直腸癌對患者血清中CEA,IL-2,MMP-2以及MMP-9水平的影響，期望為臨床上結直腸息肉切除后患者的生化狀態提供參考，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年5月至2021年5月本院收治的104例結直腸癌患者為研究對象，其中，男性61例，女性43例；年齡24～73歲。根據形態學分類方法[8]，其中有蒂隆起型病變49例，無蒂隆起型病變22例，亞蒂隆起型病變33例。

1.2 治療方法

采取冷圈套息肉切除術。冷圈套息肉切除術是一種易于應用的技術，已成為小型息肉的常用技術[9]。將圈套鞘推進，打開圈套并圍繞息肉。 然后圈套慢慢地逐漸閉合，捕獲息肉周圍1～2 mm的正常組織，直至完全閉合并且息肉被切斷。

1.3 樣本采集

采集104例早期結直腸癌患者息肉切除手術前后肘前靜脈血5 ml。采用紅細胞溶解法分離有核細胞。采用TRIZOL法抽取總RNA。利用核酸蛋白檢測儀測定樣品的OD230、OD260和OD280，OD260與OD280的比值在1.7至2.0之間，用1%的瓊脂糖膠進行電泳檢測提取的RNA質量，5S、18S和28S的條帶清晰可見。

1.4 觀察指標

1.4.1 血清標志物的mRNA水平 用Taka逆轉錄試劑盒(貨號：RR037A)將提取的總RNA中的mRNA逆轉錄為cDNA。用南京諾唯贊RT-qPCR試劑盒(貨號：Q711)，在ABI的qPCR儀(型號：7500)進行RT-qPCR反應。使用PRIMER 5.0設計qPCR引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，引物序列如表1。

表1 目的基因和內參基因引物

1.4.2 血清標志物的蛋白水平 采用酶聯免疫吸附試驗，使用江萊ELISA試劑盒(貨號：JL29650,JL13635,JL19231,JL10977)檢測息肉切除術前后CEA、IL-2、MMP-2和MMP-9的蛋白水平。

1.5 統計學方法

2 結果

2.1 息肉切除術治療前后血清腫瘤標志物CEA、IL-2、MMP-2以及MMP-9的mRNA水平的比較

經過冷圈套息肉切除術治療后，在mRNA水平上，患者血清中腫瘤標志物CEA、MMP-2和MMP-9的水平明顯下降，且治療前后差異具有統計學意義，其中CEA具有顯著差異(P<0.05)，MMP-2和MMP-9具有極顯著差異(P<0.01)。而IL-2在治療后在mRNA水平上有略微的上升，但差異不明顯，見圖1。

注：*P<0.05，**P<0.01，NS：無明顯差異。

2.2 息肉切除術治療前后血清腫瘤標志物CEA、IL-2、MMP-2以及MMP-9的蛋白水平的比較

經過冷圈套息肉切除術治療后，在蛋白表達水平上，患者血清中腫瘤標志物CEA，MMP-2和MMP-9的水平明顯下降，且治療前后差異具有統計學意義(P<0.05)；而IL-2的蛋白水平治療前后差異不明顯，見表2。

表2 治療前后血清中CEA IL-2、MMP-2和MMP-9蛋白水平比較

3 討論

結腸直腸癌是全球診斷的第三大常見癌癥。雖然流行病學數據顯示世界各地的結直腸癌發病率顯著變化，但總體發病率呈緩慢但穩定下降趨勢，主要集中在發達國家[10]。但是，我國結直腸癌的發病率和死亡率均高于世界平均水平[11]。因此，早診早治水平的提高至關重要，其中，內鏡息肉切除術是治療早期結直腸癌的重要手段之一。

癌胚抗原(CEA)是結直腸癌患者中最常用的腫瘤標志物[12]，屬于免疫球蛋白超家族分子的高分子量糖蛋白，起著促進人類結腸直腸癌細胞聚集的細胞間粘附分子的作用[13]。大腸癌患者的CEA增加約60%至85%[14]。

T細胞在免疫應答過程中產生的IL-2是一種重要的免疫調節因子。IL-2誘導T細胞增殖，促進B細胞的抗體產生和增殖，并且是活化誘導的細胞死亡所必需的。此外，IL-2增強自然殺傷細胞活性并促進干擾素分泌[15]。因此，IL-2在免疫細胞和免疫應答的增殖中起著核心作用。另外，IL-2水平反映了細胞免疫活性。當細胞免疫功能受到抑制時，IL-2水平明顯下降[16]。

迄今為止，已經描述了20多種MMPs[17]。明膠酶MMP-2和MMP-9對癌癥侵襲和轉移有著潛在貢獻[18]。已經報道了許多類型的人類癌癥和細胞培養以及癌癥動物模型中MMP-2和MMP-9表達水平的顯著增加，從而為明膠酶水平與癌癥侵入或轉移之間的強關聯提供了證據[19]。

本研究中，息肉切除術治療早期結直腸癌后，與治療前相比，CEA、MMP-2和MMP-9的mRNA水平明顯下降，IL-2的mRNA水平略微上升；CEA、MMP-2和MMP-9的蛋白水平明顯下降，IL-2的蛋白水平略有上升，2組比較差異具有統計學意義(P<0.05)。CEA、IL-2、MMP-2和MMP-9的mRNA水平與其蛋白質水平高度相似，說明CEA、IL-2、MMP-2和MMP-9蛋白在結直腸癌中的調控主要是在轉錄水平上的，而不是經由蛋白質翻譯后修飾或者降解的途徑。

綜上所述，息肉切除術治療早期結直腸癌后，患者血清中的CEA、MMP-2以及MMP-9在mRNA水平和蛋白水平上均有明顯下降，IL-2在mRNA水平和蛋白水平上略有上升。