家兔人工授精關鍵技術

馬 艷，李 芳，戴玉嬌，李星垚，王紹熙，田維菊

（1.瀘州市江陽區動物疫病預防控制中心，四川 瀘州 646000；2.重慶市大足區動物疫病預防控制中心，重慶 大足 402360；3.重慶市潼南區農業農村委員會，重慶 潼南 402660；4.瀘州市動物疫病預防控制中心，四川 瀘州 646000；5.重慶市農業廣播電視學校，重慶 兩江新區 401121；6.豐都縣樹人鎮農業服務中心，重慶 豐都 408200）

在中國兔養殖生產中，繁殖方法普遍采用自然交配、人工輔助交配和人工授精3 種方式。其中，兔人工授精是指采用人工方式采集優良公兔的精液，將精液鏡檢、稀釋及保存，當母兔發情時通過人工方式將精液輸送到母兔的生殖道，以人工的方式代替自然交配和人工輔助交配，從而使母兔受精的一種方式。

1 人工授精的優勢

兔人工授精技術是迄今為止兔繁殖、品種改良經濟、科學的方法，受胎率可達80%～90%［1］，其優勢如下。

1.1 品種改良

人工授精能最大限度地發揮優良種公兔的利用價值，提高公兔的配種效能，加快兔場的兔種品質改良步伐，從中獲得更大的利潤。

1.2 生產管理

人工授精使得養兔生產管理更有計劃性，更富靈活性。有效地提高現有兔場的母兔繁殖性能，可避免因公兔使用過多或其他原因造成公兔精液質量不佳的問題出現。同時，兔群更趨于整齊一致，便于飼養管理。

1.3 疾病防疫

人工授精會降低新疾病引入和傳播的風險，避免了公母兔的直接接觸，可防止多種疾病，特別是生殖道疾病的傳播。人工授精時，必須檢查精液，這樣可及時發現和治療不孕母兔，有助于淘汰不孕母兔和提高受胎率。

1.4 節約成本

人工授精技術推廣可以減少80%公兔飼養數量。如3 000 只母兔的養殖場需要500～600 只公兔，人工授精可以減少到150 只。減少的公兔每年飼料可以節約5 萬多元，結余的籠位可飼養繁殖母兔，增加銷售收入。

2 人工授精站建設

2.1 選址

授精站場址應符合相關法律法規及NY/T 682的規定；場址地勢高燥、背風、向陽、交通便利，水源充足，電力可靠。授精站距離交通干線和居民居住區≥1 000 m；距屠宰場、化工廠和畜禽養殖場≥2 000 m；位于居民區及公共建筑群的下風向。

2.2 布局

授精站宜設管理區、生產區等功能區，各區之間界限分明，聯系方便；管理區內應包括生活設施、辦公設施及生產輔助設施（飼料庫、車庫等），位于生產區主風向的上風向；生產區內主要包括種公兔舍、后備種公兔舍、精液處理室及有關生產輔助設施。

授精站大門入口處設置長≥4.5 m、深0.2 m 的消毒池；生產區入口處設置人員更衣、消毒室，兔舍入口處設消毒設施，配備必要的消毒器具。授精站四周建高度≥2 m 的圍墻。

2.3 設施建設

種公兔舍間距≥8 m；舍內地面干燥，通風良好，配備相應的保暖、降溫設施；種公兔單籠飼養，籠底面積≥0.36 m2，籠高≥0.45 m。精液處理室面積≥15 m2；地面、墻壁、天花板、門窗等應為耐腐蝕易清潔材料；配備窗簾、消毒滅菌以及防寒降溫、通風換氣等設備；設置相應的水槽及操作臺，具備精液檢驗、稀釋處理和貯存等功能。

授精站供應自來水，清污分流排水；種公兔給水設施應為自動飲水系統。

2.4 種公兔

采精種公兔數量≥50 只，并配備相應臺兔。種公兔應來自取得《種畜禽生產經營許可證》《動物防疫條件合格證》的種兔場，具有《種兔合格證》、完整系譜和性能測定記錄，按GB 16549 檢疫合格。

種公兔初次采精應達到6～8 月齡、80%以上成年體重；采取的精液應進行檢查，檢查合格的精液進行稀釋等處理后，可用于人工授精配種。

2.5 工作人員

授精站應配備種公兔飼養、精液采集、稀釋、檢驗和疫病防控等專業技術人員，主要崗位技術人員應獲得相關資質證書。

2.6 環境保護

授精站應建設糞污等廢棄物及病害動物無害化處理設施；廢棄物的處理和排放應符合GB 18596 的規定。

2.7 管理制度

授精站應建立崗位職責，建立飼養管理、衛生防疫、精液采集、質量檢驗、儀器設備、銷售服務、檔案管理等制度。

2.8 兔場消毒程序

2.8.1 場區內衛生要求 場區內應無雜草、無垃圾，不準堆放雜物，生活區要求整潔衛生。

2.8.2 兔舍的清洗和消毒 兔舍消毒必須按程序進行，清掃—水沖—噴灑消毒藥液—熏蒸。先徹底清掃兔舍地面、窗臺、屋頂以及每個角落，要求無兔毛、兔糞和灰塵。然后用高壓水槍由上到下，由內向外沖洗。待兔舍干燥后，再用消毒劑從上到下噴霧消毒1 次。撤出的設備，如飲水器、料槽等用消毒液浸泡30 min，然后用清水沖洗，置陽光下曝曬2～3 d，再搬入兔舍。進兔前1 周，封閉門窗，用高錳酸鉀和福爾馬林（高錳酸鉀21 g/m3，福爾馬林42 mL/m3）密閉熏蒸24 h（舍內溫度22～26 ℃，濕度75%～80%時消毒效果最佳），通風3 d。人員進兔舍，必須換工作服、工作鞋，腳踏消毒池。

2.8.3 物流管理消毒 物品及工具應清洗和消毒，防止在產品流通環節中交叉感染。所有物品在入舍前都必須徹底消毒。場內公用籠箱、飼料車、運兔工具，若受污染就會波及全場，所以場內應設各類專用車，舍內各種工具專用固定，嚴禁串用。

2.8.4 重要地點消毒 場區入口及兔舍進出口要設消毒池，放入0.2%的新潔爾滅，每3 d 更換1 次。

2.8.5 飲水管的消毒 空舍內，進兔前2 d，在飲水管中加入飲水消毒液放置1 d，然后放掉消毒液，再放清水沖洗5 min，方可為兔供水。

2.8.6 兔場廢棄物及污物消毒 糞便、污水、尸體、其他廢棄物是病原體的主要集存地。糞便應及時運到指定地點堆積發酵處理或制成有機肥，污水進入沼氣池或化糞池處理，病死兔尸體焚燒、深埋或微生物分解處理，所有的廢棄物必須進行無害化處理。

3 種公兔選擇與調教

3.1 種公兔選擇

應選擇符合品種特征，體質結實，結構勻稱，生殖器官發育正常，精液品質良好，性欲旺盛，健康無病的種公兔。

3.2 種公兔調教

配種前1 個月開始開始加強營養。配種前3 周將成年母兔放入可配種的后備種公兔籠，誘導公兔爬跨，進行調教訓練，每次時間以不超過10 min 為宜，每周2～3 次。

4 采精前準備

4.1 采精公兔準備

對公兔外生殖器四周的兔毛作清潔消毒處理。

4.2 臺兔準備

選擇與公兔體重接近、性格溫順、四肢有力的非種用母兔作臺兔。

4.3 采精器械準備

采精器包括假陰道外殼、假陰道內胎和集精瓶，經清洗、高溫煮沸或微波消毒后備用，采精前將假陰道的外殼和內胎組長成假陰道。

4.4 精液品質檢查器具準備

160～400 倍顯微鏡、載玻片、蓋玻片、玻璃量筒、玻璃棒、紗布等經清洗、高溫煮沸或微波消毒后備用。

4.5 稀釋液及激素準備

稀釋液可選擇5%葡萄糖、0.9%生理鹽水或其他商品稀釋液，35 ℃備用。激素選用促排卵制劑。

5 采精

5.1 采精方法

采精地點可在公兔籠中，用母兔做臺兔時，先將發情的母兔放入公兔籠內。術者一手固定母兔頭部，另一手握假陰道，將其置于母兔腹下兩后股之間，當公免爬跨時，術者根據陰莖伸出的方向和角度，及時調整假陰道位置，以迎合公兔陰莖插入射精。爬跨后，公兔骨盆進行數次強烈抽動，當公兔向前一挺，然后向一側倒去，有時發出“咕”的一聲尖叫，就是已射精的表現。此時術者放開母兔，迅速將假陰道豎直，并放氣減壓，使精液流入集精器，然后及時送到化驗室鏡檢和稀釋。若化驗室離采精地點較遠，應將裝精液的試管放入30 ℃左右的溫水杯內。

5.2 注意事項

采精時待假陰道內層溫度降到40～42 ℃即可迅速采精。公兔陰莖對溫度極為敏感，低于40 ℃不易引起射精；過高溫度采精會養成嗜高溫的壞習慣，對精液品質也有影響。采精過程中假陰道位置要正確，應置于水平斜向上30°～45°，絕不能向下傾斜，以免精液流失。采精期間采精者應鎮靜自若，不能煩躁，更不能對公兔采取暴力行為。合理使用種公兔，頻繁采精，不僅精子活力降低，而且可使其精液中抗精子抗原的抗體上升，使精子活力下降。每只公兔每天采精1 次，每周4～5 次。采精期間應盡量避免用藥，如種兔有病，應停止采精。采精期間應加強種公兔管理，每天加喂雞蛋和胡蘿卜，加強運動［2］。

6 精液檢查

進行肉兔精液品質檢查時，一般應在18～25 ℃為宜，并在采精后立即進行。

6.1 外觀檢查

在實際應用中，一般以目測估計。正常公兔的精液呈淡乳白色，具有特殊的腥味，也有少數兔子的精液不正常，混入尿液有臭味；生殖器有炎癥出血的帶紅色；清水樣的為無精子。兔子的精量很少，一般在0.2～2 mL，平均為0.8 mL。

6.2 顯微鏡檢查

目測法是根據精子在視野中的分布概況，即精子與精子之間的距離評定為密、中、稀3 種等級。該方法雖是主觀評定，但簡便易行，實際工作中多采用此法。家兔的精子密度隨季節變化也十分明顯。

精子活力是指精液中直線前進運動精子所占百分率。標記為0.9、0.8、0.7、……，分別代表90%、80%、70%……的精子具有直線前進運動力，是一種主觀評定法，有經驗的技術員估計的結果很接近實際數。兔精子活力應在0.5 級以上方可用于授精。不同季節的精子活力差異也十分明顯。主要是精子密度的檢查和活力的評定。精子密度是指單位容積內所含有的精子數目。精子數的計算，直接關系到授精劑量中含有活精子數。

7 精液稀釋

7.1 主要因素

精液稀釋的目的在于擴大精液量，增加輸精母兔只數，延長精子存活時間。在配制肉兔精液稀釋液時應當考慮稀釋劑、營養成分、保護成分等主要因素［3］。

7.1.1 稀釋劑 多為等滲緩沖液，可增加精液體積。在實際生產中，一般常用0.9%NaCI 或5%葡萄糖溶液做稀釋精液。

7.1.2 營養成分 可以給精子補充外源性營養和能源，從而延長精子壽命，如葡萄糖、果糖、蔗糖、氨基乙酸、奶、卵黃等。

7.1.3 保護成分 ①緩沖物質，如檸檬酸鈉、檸酸二氫鉀、檸酸二氫鈉、三羥甲基氨甲烷等，可調節精液的酸堿度。②非電解物質，如糖類、檸酸鹽類等，可改變、中和副性腺分泌物的電離程度，以防止精子凝集并補充精子能源。③防冷刺激物質，如奶類、甘油等，可防止精子遇冷時休克，喪失活力。④抗菌物質，常用青霉素（每l mL 稀釋液加入500～1 000 單位）、鏈霉素（每l mL 稀釋液加人500～1 000μg）等，防止有害微生物的繁殖，延長精子壽命和提高受胎率。⑤抗凍物質，如甘油、二甲基亞砜等，用于超低溫冷凍精液。

7.2 稀釋方法

根據精液的質量和活力稀釋倍數一般稀釋2～10 倍，若超過10 倍的高倍稀釋，一定要分次稀釋。在稀釋時，用干凈的膠頭滴管沿著集精杯的內壁加入稀釋液，讓稀釋液緩緩流入到集精杯底部。注入后再用玻璃棒輕輕攪動，使其均勻混合。稀釋后的精液應再做一次鏡檢，發現活力不強或死亡過多的精子則不能用作輸精。把鏡檢合格的稀釋精液全部倒入集精瓶內，再把集精瓶密封好放入17 ℃的恒溫箱內。

7.3 注意事項

一是配制稀釋液用的蒸餾水為雙蒸水，pH 為6.6 以上，雙蒸水必須現用現制備。二是配置稀釋液的蒸餾水溫度在30～40 ℃，稀釋液的溫度和精液的溫度必須一致。三是沒有使用完的稀釋液放在5 ℃冰箱內保存，保存期不能超過2 d。

8 輸精

輸精就是將精液注入母兔的生殖道內，是人工授精的最后一環。人工授精前6 d 增加光照刺激，每天光照16 h，每只母兔的光照度應大于60 lx。輸精前，每只母兔肌肉注射絨毛膜促性腺激素50～100單位，注射后4～6 h 方可輸精。

8.1 輸精器

可用玻璃輸精器，前端長10 cm 左右的空心小玻管與2 mL 注射器相連，也可用試驗滴管代替，每輸精一次應更換一支無菌輸精器。

8.2 輸精母兔的選擇

應選擇健康無病，處于發情期的母兔進行授精，這對提高受胎率有很大益處。

8.3 輸精方法

由助手抓住母兔的背部，使母兔臀部略朝上，輸精員持輸精器（如一人操作，可一手抓兔，一手持輸精器）。取經過稀釋的精液0.5 mL（約含精子1 000萬個以上）慢慢插入母兔陰道內6～7 cm 處即可輸精。插入時應輕輕向前上方旋動，要邊旋邊進，切不可硬插，以免損傷生殖道。插入后可來回輕輕抽動和轉動幾次，有助于刺激子宮頸。抽出輸精器時也應邊轉動邊抽出，以防精液隨輸精器溢出。抽出輸精器后，即由助手拍打一下兔子的臀部，使母兔受驚，以便精子吸入。

9 輸精后處理

一是采完精后，把假陰道拆開，沖洗內胎和集精杯，再用蒸餾水清洗1 次，晾干、備用。二是輸精后24 h 內不準在兔舍內做任何工作，讓兔子休息。三是輸精結束后，倒出沒有用完的精液。把輸精槍調到最大處，再倒入20 mL 75%乙醇清洗1 次，再用蒸餾水20 mL 清洗1 次，晾干、備用。四是關閉烘箱和顯微鏡電源，把實驗室整理清潔［4］。