口腔清潔護理用品 牙膏中黃芩苷含量的測定 高效液相色譜法(T/COCIA 15—2021)

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。

本文件由中國口腔清潔護理用品工業協會提出。

本文件由全國口腔護理用品標準化技術委員會牙膏分技術委員會(SAC/TC492/SC1)歸口。

本文件主要起草單位：無限極(中國)有限公司、云南白藥集團健康產品有限公司、淮安縱橫生物科技有限公司淮陰分公司、柳州兩面針股份有限公司、廣州質量監督檢測研究院。

本文件主要起草人：高艷、陳杰鋒、肖蕾、高鷹、王兆鵬、郭婷婷、黃華來、夏澤敏。

本文件為首次發布。

1 范圍

本文件規定了用高效液相色譜法測定牙膏中黃芩苷含量的試劑和材料、儀器和設備、分析步驟、結果計算、檢出限和定量限、回收率、精密度、允許差。

本文件適用于碳酸鈣基質、二氧化硅基質、磷酸氫鈣基質牙膏中黃芩苷含量的測定。

2 規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。

GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法

3 術語和定義

本文件沒有需要界定的術語和定義。

4 試劑和材料

4.1 乙腈(色譜純)。

4.2 無水乙醇(色譜純)。

4.3 磷酸(優級純)。

4.4 0.1%磷酸溶液(體積分數)。

4.5 乙醇-磷酸混合溶液：無水乙醇(4.2)+磷酸(4.3)+水=50+6+44(體積比)。

4.6 黃芩苷標準品：純度≥95%，CAS號、分子式、相對分子質量和結構式參見附錄A表A.1。

4.7 除非另有規定，所用試劑均為分析純。水為符合GB/T6682中一級用水規定。

4.8 黃芩苷標準儲備溶液

稱取黃芩苷標準品(4.6)50mg(精確至0.01mg，純度修正)于250mL的棕色容量瓶中，用無水乙醇(4.2)溶解并定容至刻度，此溶液濃度為0.20mg/mL。該溶液于棕色瓶中0～4℃冰箱避光可保存7天。

4.9 黃芩苷標準工作溶液

分別吸取0.20mg/mL黃芩苷標準儲備溶液(4.7)0.25mL、2.5mL、5.0mL、10.0ml、15.0mL、25.0mL于50mL棕色容量瓶中，再用無水乙醇(4.2)稀釋至刻度；配制成濃度為1.00μg/mL、10.00μg/mL、20.00μg/mL、40.00μg/mL、60.00μg/mL、100.00μg/mL標準工作溶液(現配現用)。

4.10 石英砂：40-80目，含量≥99.0%。

5 儀器和設備

5.1 高效液相色譜儀：與二極管陣列(或紫外)檢測器聯用。

5.2 分析天平：感量為0.1mg、0.01mg。

5.3 棕色容量瓶：50mL、250mL。

5.4 具塞刻度離心管：50mL。

5.5 超聲波儀。

5.6 離心機：轉速不小于5000r/min。

5.7 微孔濾膜：孔徑0.22μm。

5.8 渦旋振蕩器。

5.9 移液管或移液器：1mL、5mL、10mL、15mL、25mL。

6 分析步驟

6.1 試樣處理

稱取試樣1g(精確至0.1mg)于具塞刻度離心管(5.4)中，加入約1g石英砂(4.10)，再準確加入乙醇-磷酸混合溶液(4.5)20mL，稱定重量，渦旋振蕩2min，25℃水浴中超聲提取40min，冷卻至室溫后用乙醇-磷酸混合溶液(4.5)補足損失重量，5000rpm/min離心分離10min，取上清液經0.22μm微孔濾膜過濾，濾液作為試樣溶液上機待測。

6.2 測定條件

高效液相色譜測定參考條件如下：

a)色譜柱規格：C18色譜柱：250mm×4.6mm(粒徑5μm)，或等效色譜柱；

b)流動相：A：乙腈(4.1)B：0.1%磷酸溶液(4.4)，梯度洗脫，見表1；

表1 流動相梯度洗脫表

c)流量：1.0mL/min；

d)柱溫：30℃；

e)進樣量：10μL；

f)檢測波長：277nm；

6.3 標準工作曲線繪制

按6.2色譜條件檢測，以標準工作溶液(4.8)的濃度為橫坐標，對應的峰面積為縱坐標，進行線性回歸得到標準曲線方程。

黃芩苷標準品的HPLC色譜圖參見附錄B中的圖B.1。

6.4 測定

按6.2的色譜條件，取6.1步驟中的待測試樣溶液進樣，得到試樣溶液的峰面積，根據保留時間和二極管陣列的光譜圖定性，黃芩苷標準品的DAD光譜圖參見附錄B中的圖B.2。從標準曲線上查得試樣溶液中黃芩苷的含量。

注：試樣溶液中黃芩苷的響應值應在標準曲線線性范圍內，超過線性范圍則應將提取液稀釋后測定或增加提取溶液的濃度重新檢測。

6.5 空白試驗

除不稱取試樣外，均按上述步驟進行。

6.6 平行試驗

樣品中的黃芩苷含量應根據兩次獨立的平行試驗結果的算術平均值確定。

7 結果計算

試樣中的黃芩苷含量按公式(1)計算：

(1)

式中：X——試樣中黃芩苷的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；

c——從標準曲線中得出的黃芩苷濃度(應扣除空白值)，單位為微克每毫升(μg/mL)；

V——試樣溶液的體積，單位為毫升(mL)；

m——試樣質量，單位為克(g)；

計算結果保留3位有效數字。

8 檢出限和定量限

當樣品稱樣量為1g，混合溶液加入量為20mL時，本方法黃芩苷的檢出限為1mg/kg，定量限為3mg/kg。

9 允許差

在重復條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不應超過算術平均值的10%。

附錄A

(資料性附錄)

附錄A芩苷的CAS號、分子式、相對分子質量和結構式

黃芩苷的CAS號、分子式、相對分子質量和結構式，信息見表A.1。

表A.1 黃芩苷的CAS號、分子式、相對分子質量和結構式

附錄B

(資料性附錄)

黃芩苷的CAS號、分子式、相對分子質量和結構式

黃芩苷的參考液相譜圖和光譜圖，見圖B.1和圖B.2。

注：黃芩苷參考保留時間20.2min

圖B.2黃芩苷標準品的DAD光譜圖