貴州安順規模蛋雞場禽白血病(J亞群)血清學流行率調查

劉亞娟，伍昌華，孟惠惠，李 濤

(1.貴州省安順市動物疫病預防控制中心，貴州 安順 561000 ； 2.貴州省動物疫病預防控制中心 , 貴州 貴陽 550000)

禽白血病(Avian leukosis，AL)是一種由禽白血病病毒(Avian leukosis virus，ALV)引起的以禽類造血組織中某些細胞成分過度增生為主的腫瘤性疾病。根據病毒囊膜蛋白和gp85蛋白抗原性差異，ALV被劃分為A～K共11個亞群，自然感染雞群的包括A、B、C、D、E、J和K這7個亞群[1-3]。A、B、J亞群在臨床上感染的病例較常見，其中J亞群的致病性和傳染性最強，在我國感染也最為嚴重，臨床癥狀常表現為產蛋率下降，死亡淘汰率高，出現腫瘤，雞爪、皮膚出血，體重下降，龍骨彎曲等[4]。迄今為止禽白血病沒有有效的疫苗和治療藥物，控制的主要措施為通過早期特異性診斷篩查并嚴格淘汰陽性雞，凈化種群。

2016年，楊樹青等[5]從貴州省8個地區分別采集雞蛋樣品進行ALV流行株亞型鑒定，在安順市采集的30份綠殼蛋雞中，8份ALV陽性均為J亞型(陽性率26.67%)，相比其他地區感染率較高，說明安順市雞群存在丁亞型禽白血病病毒(ALV-J)感染。有研究顯示，商品代雞群ALV抗體陽性率、抗原陽性率均比祖代和父母代高，說明商品代蛋雞感染ALV-J概率更大，且同一雞群能水平傳播使感染情況加重[6]。

貴州省安順市蛋雞場全部為商品代蛋雞場，為了解蛋雞場J亞群禽白血病(AL-J)的感染情況，估計其群流行率和個體流行率，分析感染風險因素，本次流調以全市的商品代規模蛋雞場為目標群，采用血清學檢測和現場調查問卷，以期為安順市禽白血病防控提供基礎數據和防控建議。

1 材料與方法

1.1 調研類型與對象 本調查采用橫斷面研究的方法；目標群為安順市所有規模蛋雞場(規模蛋雞場定義為存欄量≥2 000羽的蛋雞場)；研究單元為規模蛋雞場(估計群流行率)和蛋雞(估計個體流行率)。

1.2 抽樣策略 安順市存欄量≥2 000羽的規模蛋雞場共有42個，其中存欄量≥5 000羽的有35個，存欄量≥10 000羽的有23個。因群體數量較小，故將42個規模蛋雞場全部納入源群。各區(縣)規模蛋雞場總存欄量分布情況見表1。

表1 各區(縣)不同規模蛋雞場分布情況

各蛋雞場內采取系統隨機抽樣。若場內養殖模式不是“全進全出”，采取分層抽樣，抽樣時按比例分配不同日齡蛋雞的抽樣數量，主要考慮以下日齡蛋雞：育成期10～19周齡，產蛋初期20～30周齡，產蛋高峰期31～44周齡，淘汰前45～50周齡。根據估計流行率的計算公式：N=(1.96)2×p(1-p)/e2[7]，計算出各場點需要隨機抽取的蛋雞數為60羽。參數設置：置信水平(CI)設為95%，可接受絕對誤差(e)設為10%，預期流行率(p)設為20%。

1.3 采樣和檢測診斷方法 將采集的蛋雞全血送至安順市動物疫病預防控制中心，分離血清后采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)方法檢測J亞群禽白血病抗體，試劑盒購自美國KERNEL公司，敏感性為99.0%，特異性為99.7%。

1.4 陽性個體和陽性場定義 陽性個體：經ELISA方法檢測，血清中ALV-J抗體為陽性的蛋雞。

陽性場：至少檢測到n個及以上ALV-J抗體陽性血清樣品的商品代蛋雞場。

n為判定陽性場的cut-off值，由個體流行率(p)結合試驗敏感性(Se)、試驗特異性(Sp)和每場抽樣數量(n′)進行確定。

1.5 問卷設計 調查問卷內容包括蛋雞場基本信息(存欄量、引種地、引進品種等)和飼養管理及生物安全防護情況(免疫、用藥、消毒、無害化處理等)兩部分，其中飼養管理及生物安全防護情況針對安順市規模蛋雞場雞群感染AL-J的可能風險因素設計了12個問題，具體內容：(1)每周是否消毒3次及以上；(2)同一棟雞舍是否為“全進全出”飼養模式；(3)養殖區和生活區是否分開；(4)場區內是否分凈道和污道；(5)蛋雞生病后是否用藥；(6)是否超劑量免疫；(7)是否自購除政府要求強免疫苗外的疫苗；(8)是否更換不同圈舍免疫時所用的針頭；(9)場區內是否有防鼠和防蚊蟲設施；(10)人員進出前是否更換衣服和鞋帽；(11)車輛進場前是否消毒；(12)病死雞是否無害化處理。

1.6 數據分析方法

1.6.1 個體流行率估計 個體表觀流行率(AP)為抽樣檢測到的陽性蛋雞數占所有抽樣研究蛋雞數的比值。選擇直接標化法計算出安順市商品代規模蛋雞場雞群的個體表觀流行率(AP′)，計算公式：AP′=Σ(TsjIj)，其中Tsj是不同蛋雞場的存欄量在全市42個蛋雞場總存欄量的占比，Ij是不同蛋雞場的流行率。個體真實流行率(TP)需結合檢測Se和Sp計算，計算公式：TP=(AP′+Sp-1)/(Se+Sp-1)[7-8]。其中Se為ELISA診斷試劑盒的試驗敏感性(99.0%)，Sp為試驗特異性(99.7%)。

標化后的個體表觀流行率95%置信區間：CI=AP′±Z×Sp，Sp=[Σ(1-fh)/(nh-1)×Wh2×ph×(1-ph)]0.5，其中Sp是總體抽樣誤差，ph是第h層樣本中流行率，Wh是第h層權重，nh是第h層樣本量，fh是第h層抽樣比例，每個規模蛋雞場作為一層[9]；個體真實流行率的95%置信區間(95%CI)根據公式：TP=(AP′+Sp-1)/(Se+Sp-1)，并結合標化后個體表觀流行率95%CI的值計算得出。

1.6.2 群流行率估計 群體表觀流行率(HAP)為檢測到的陽性蛋雞場占所有規模蛋雞場的比值。群體真實流行率(HTP)需結合群敏感性(HSe)和群特異性(HSp)計算，計算公式：HTP=(HAP+HSp-1)/(HSe+HSp-1)[10]。

1.6.3 風險因素分析 將血清學檢測結果和調查問卷收集的數據錄入到Excel 2016進行整理，通過SPSS統計軟件進行單變量分析(卡方檢驗)。

2 結果

2.1 血清學流行率估計

2.1.1 禽白血病(J亞群)個體流行率 采集的2 520份蛋雞血清樣本中共檢出了182份AL-J陽性，分別來自24個規模蛋雞場。在實際采樣過程中，其中1個場采集了56份樣品，2個場采集了61份樣品，1個場采集了62份樣品，其余38個場均采集了60份樣品。根據公式計算得到，標化后的個體表觀流行率(AP′)為10.7%(95%CI：7.6%～13.8%)，真實流行率(TP)為10.5%(95%CI：7.4%～13.7%)。其中檢測存欄量10 000羽以下的場蛋雞血清樣品1 143份，檢出陽性39份，流行率為3.4%；檢測存欄量10 000羽及以上的場蛋雞血清樣品1 377份，檢出陽性143份，流行率為10.4%；存欄量10 000羽以下和10 000羽及以上的蛋雞場間個體流行率差異顯著(P<0.05)。

2.1.2 群敏感性(Hse)和群特異性(Hsp) 按流行率(p)為10.5%，Se為99.0%，Sp為99.7%，每場抽樣數量為60，計算出不同cut-off值下的群敏感性和群特異性(表2)，最終確定cut-off值為2，Hse為99.1%，Hsp為98.6%。

表2 不同cut-off值下的群敏感性和群特異性

陽性場定義：至少檢測到2個及2個以上ALV-J抗體陽性血清樣品的商品代蛋雞場。

2.1.3 禽白血病(J亞群)群流行率 本次流調共檢測了42個場，其中24個為陽性場，群體表觀流行率(HAP)和真實流行率(HTP)均為57.1%。24個陽性場中11個位于西秀區，3個位于平壩區，1個位于普定縣，4個位于鎮寧縣，2個位于關嶺縣，3個位于開發區。其中存欄量10 000羽以下的場19個，陽性場8個，陽性率為42.1%；存欄量10 000羽及以上的場23個，陽性場16個，陽性率為69.6%，兩者間群體流行率差異不顯著(P>0.05)。

2.2 年齡分布 通過對4個不同年齡段(育成期、產蛋初期、產蛋高峰期、淘汰前)的蛋雞J亞群禽白血病抗體檢測結果進行卡方(χ2)檢驗，發現Fisher確切概率法檢驗概率值P<0.05，說明不同年齡段的蛋雞抗體檢測結果存在差異。分別計算不同日齡蛋雞抗體陽性率的比值比(OR)，發現育成期是產蛋初期的11.0倍(95%CI：1.1～106.4)，產蛋高峰期是產蛋初期的6.9倍(95%CI：1.2～40.4)，淘汰前是產蛋初期的9.6倍(95%CI：1.7～54.7)。推測可能由于母體感染，育成期蛋雞母源抗體水平較高，隨后逐步下降；由于水平傳播的可能，蛋雞抗體陽性數隨著日齡的增加而增多。

2.3 風險因素分析 根據調查問卷結果，對12個假定風險因素進行單因素分析，結果顯示“是否自購除政府要求強免疫苗外的疫苗”具有統計學意義(P<0.05)，OR=3.750(95%CI：1.011～13.908，P=0.044)，自購的疫苗主要為雞傳染性法氏囊、雞傳染性支氣管炎、減蛋綜合征等，其余11個變量均不具有統計學意義(P>0.1)(表3)。經Mantel-Haenszel分層分析發現，在“是否超劑量免疫”分層條件下，“是否自購除政府要求強免疫苗外的疫苗”調整后的OR=3.643(95%CI：0.976～13.603，P=0.054)，將調整前后的OR值進行比較，差值小于0.5，因此不將“是否超劑量免疫”列為混雜因素，不對“是否自購除政府要求強免疫苗外的疫苗”風險因素判定造成影響。

表3 J亞群禽白血病單因素風險因素分析

3 討論

本調查風險因素分析結果顯示，“是否自購除政府要求強免疫苗外的疫苗”為蛋雞場感染禽白血病的一個風險因素，OR=3.750(95%CI：1.011～13.908)，推測由于雞的疫苗大多是用雞胚或相應的細胞培養制備的，禽白血病病毒可以通過種蛋垂直傳播，可能污染活疫苗，且部分養殖場自購疫苗的渠道不明，加大了購買到污染疫苗的風險，因此疫苗外源病毒的檢測是防控禽白血病的一個關鍵。

本次調查的42個規模蛋雞場中，有一半以上蛋雞場存在J亞群禽白血病感染，且多家陽性場有相同的引種來源，作為垂直遺傳病，引進攜帶禽白血病病毒的雛雞仍是商品代蛋雞場感染禽白血病主要的風險因素。雖然J亞群禽白血病主要通過種蛋持續或間歇性排毒，垂直傳播給下一代，造成子代雞群的免疫耐受，但根據本次流調中年齡分布數據，產蛋高峰期、淘汰前蛋雞的抗體陽性水平逐步上升，不排除存在水平傳播的可能。

建議安順市的商品代蛋雞場在今后要加強引種管理和場內生物安全管理，提高蛋雞免疫力，避免因禽白血病感染對蛋雞生產性能造成的影響，減少經濟損失。

本次調查采用的方法是橫斷面研究，僅代表一個時間段內的研究調查結果，同時蛋雞的飼養時間相比大型牲畜較短，建立起的關聯性不一定是因果聯系；由于實際情況限制且可接受絕對誤差(10%)設置較大，本次調查的蛋雞場數量(42個)和場內抽樣數量(60羽)有限，樣本量較少，存在隨機誤差和選擇偏倚，加之調查問卷存在設計缺陷，因此風險因素分析的結論具有一定的局限性。