山楂、烏梅、葡萄皮、枸杞、桑葚復方組合物的體內降血脂作用

李 瑩，吳莎莎，曹璨，徐建文，劉影

（哈爾濱醫科大學公共衛生學院營養與食品衛生教研室，黑龍江哈爾濱 150001）

血脂異常（Dyslipidemias），又稱高脂血癥，是指血漿中的脂質成分和含量發生改變的一種代謝性疾病。通常表現為血清總膽固醇（TC）和（或）甘油三酯（TG）升高，也包括高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）降低或低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）升高。2018 年發表的中國慢性病及危險因素監測研究顯示，中國18 歲以上成人中高總膽固醇、高甘油三酯、低HDLC、高LDL-C 患病率分別達到了6.9%、13.8%、20.4%、8.1%。目前臨床上大多采用西藥治療，其療效快，但易產生惡心、腹脹等不良反應，長期使用還會造成肝腎損傷。因此，開發更加安全無毒副作用的降脂產品逐漸成為新的趨勢。

山楂是我國特有的藥果兼用樹種，運用高通量代謝組學的技術，Hu 等對高脂血癥大鼠脂肪組織的代謝變化進行了非靶向分析，發現喂養高脂飲食時許多內源性分子發生改變，而在山楂提取物干預后恢復；烏梅作為一種傳統補益中藥，其葉提取物可以降低高脂飲食誘導的糖尿病小鼠血清TG 水平；葡萄皮中含有白藜蘆醇、單寧、花青素等物質，可以通過調節脂肪酶活性、增加抗氧化能力、減少過渡金屬以及自由基來改善血脂異常；枸杞中的枸杞多糖對高脂飲食誘導大鼠的腎臟損傷及脂質沉淀具有保護作用，其果實中的花青素可以通過改善小鼠的炎癥和氧化應激水平來改善高脂飲食誘導的胰島素抵抗；桑葚提取物可以通過調節高脂飲食大鼠內皮型一氧化氮合酶的表達來減輕內皮功能障礙，從而改善血脂異常。同時以上食物或藥物均屬于入藥典的食藥兼用品或食物，安全無毒，適合長期服用。目前，國內以山楂、烏梅、葡萄皮、枸杞、桑葚為復合原料的保健食品的研究尚未報道。

本實驗首次對山楂、烏梅、葡萄皮等食物或藥物進行科學組方，制備出一種具有輔助降血脂功能保健食品，并通過建立血脂異常大鼠模型，探究該組合物調節血脂的作用，以期提供一種更為安全，無毒副作用的調節血脂的新思路，并為其使用提供初步指導，進一步為新型降脂保健食品的開發提供支持。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

SPF 級健康雄性SD 大鼠 50 只，體重200±20 g，北京維通利華實驗動物技術有限公司，許可證號：SCXK（京）2012-0001；在SPF 級動物實驗中心（屏障環境）飼養（許可證號：SYXK（黑）2011007），溫度21～23 ℃，濕度55%～58%；試驗動物所用的清潔級飼料 北京科澳協力飼料有限公司（許可證號：SCXK（京）2009-0012）；其中維持飼料配方：粗蛋白≥18%，粗脂肪≥4%，粗纖維≤5%，粗灰分≤8%，鈣1.0%～1.8%，總磷0.6%～1.2%，水分≤10%；模型飼料配方：在維持飼料中添加20%蔗糖、15%豬油、1.2%膽固醇、0.2%膽酸鈉，適量的酪蛋白、磷酸氫鈣、石粉等，除了粗脂肪外，模型飼料的水分、粗蛋白、粗脂肪、粗纖維、粗灰分、鈣、磷、鈣：磷均要達到維持飼料的國家標準；山楂、烏梅、葡萄皮、枸杞、桑葚 哈爾濱世一堂藥店。

動物天平、電子天平 沈陽龍騰電子有限公司；Allegra64R 低溫高速離心機 Beckman 公司；550 nm 酶標儀 BIO-RAD 公司；電熱恒溫水浴鍋上海精宏醫療器械廠；TC、TG、LDL-C、HDL-C 試劑盒及脂蛋白脂肪酶、肝脂酶盒 北京中生生物工程高技術公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 受試樣品制備及劑量設計 取山楂40 重量份、烏梅40 重量份、葡萄皮30 重量份、枸杞30 重量份、桑葚20 重量份，此復方的配制比例根據本研究團隊前期配方優化研究確定。將各原料清洗去雜，60 ℃下干燥5 h，干燥后磨粉，過4 號篩混合均勻，輻照殺菌即得，得到的受試物為棕色粉末。感官檢查依據GB 16740-2014《食品安全國家標準 保健食品》，取適量受試物置于白色瓷盤中，在自然光下觀察色澤和狀態，嗅其氣味，用溫開水漱口，品其滋味，未見異常。分別以人體每日推薦劑量（0.05 g/kg·BW）的30 倍、10 倍、5 倍為高劑量組（1.5 g/kg·BW）、中劑量組（0.5 g/kg·BW）和低劑量組（0.25 g/kg·BW）。

取150 g 受試物粉末，加蒸餾水至1000 mL，配成0.15 g/mL 的溶液，用于高劑量組給藥；取50 g 受試物粉末，加蒸餾水至1000 mL，配成0.05 g/mL 的溶液，用于中劑量組給藥；取25 g 受試物粉末，加蒸餾水至1000 mL，配成0.025 g/mL 的溶液，用于低劑量組給藥。

1.2.2 實驗動物分組及給藥 屏障系統下適應性喂養一周后，按體重隨機分成2 組，10 只大鼠給予維持飼料作為空白對照組，40 只給予模型飼料作為模型組。每周稱量體重1 次。模型組給予模型飼料2 周后，空白對照組和模型組大鼠不禁食采血（尾部），采血后盡快分離血清，測定血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）水平。根據TC、TG 水平將模型組40 只動物隨機分成4 組，即高、中、低劑量組（1.5、0.5、0.25 g/kg·BW）和模型對照組，每組10 只。分組后3 個劑量組每天按照10 mL/kg·BW 經口給予受試樣品，空白對照組和模型對照組同時給予同體積的蒸餾水；空白對照組繼續給予維持飼料，模型對照組及三個劑量組繼續給予模型飼料。動物自由攝食及飲水，每周記錄動物體重。

1.2.3 指標測定 連續灌胃30 d 后，于實驗結束時不禁食采血，采血后盡快分離血清，按照試劑盒操作步驟，測定血清TC、TG、LDL-C、HDL-C 水平。采血后處死，立即取出并稱重肝組織，測定肝臟系數。取部分肝組織勻漿，按照試劑盒操作步驟，測定肝脂肪酶（HL）、脂蛋白脂肪酶（LPL）活性。取肝右葉，10%福爾馬林固定，石蠟包埋切片，進行HE 染色，光學顯微鏡下觀察各組大鼠肝臟脂肪變性程度。

1.3 數據處理

實驗數據用SPSS 軟件進行統計，結果以平均值±標準差表示。各組間均數比較進行單因素方差分析，組間比較使用LSD 事后檢驗，檢驗水準=0.05。

2 結果與分析

2.1 受試物對大鼠體重的影響

由表1 可見，實驗前及造模后，各劑量組與模型對照組相比，大鼠體重均無統計學差別。以1.5、0.5、0.25 g/kg·BW 劑量的受試物給予大鼠灌胃30 d 后，所有組動物生長、活動正常，各劑量組動物與模型對照組相比體重無顯著性差別（>0.05）。

表1 受試物對大鼠體重的影響（，n=10）Table 1 Influence of the test substance on the body weight of rats (,n=10)

2.2 受試物對大鼠血清總膽固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的影響

由表2 可見，模型對照組的血清TC（<0.05）和TG 水平始終高于空白對照組，說明高脂模型是成功的。血清總膽固醇是血液中各脂蛋白所含膽固醇的總和，過高的TC 是動脈粥樣硬化、冠心病等心血管疾病的危險因素之一；血清TG 升高常見于代謝綜合癥，研究顯示輕度或中度TG 升高會增加患冠心病的風險。以1.5、0.5、0.25 g/kg·BW 劑量受試物干預30 d 后，高、中劑量組血清的TC 與模型對照組相比分別下降了28.27%、16.35%，且差異顯著（<0.05）；高、中劑量組血清TG 與模型對照組比分別下降了27.91%、15.12%，且差異顯著（<0.05），說明該組合物可以起到調節體內脂質代謝的作用。血液中的TC、TG 需要與載脂蛋白結合進行運輸。LDL 是膽固醇含量最高的脂蛋白，同時也是導致動脈粥樣硬化的因素；HDL 則被證實能將外周組織的膽固醇轉運至肝臟進行分解代謝，提示了其抗動脈粥樣硬化作用。高、中劑量組血清的HDL-C 與模型對照組相比分別上升了65.72%、41.30%，且差異極顯著（<0.01），高、中劑量組血清的LDL-C 與模型對照組相比分別下降了40.28%、15.28%，且差異顯著（<0.05），說明該組合物可以調節血脂并抑制脂質的沉積，進而降低動脈粥樣硬化發生的風險。Han 等通過給予肝損傷小鼠山楂果皮提取物，發現其血清TG、TG、LDLC 水平下降，HDL-C 水平上升，Mahmoudi 等也發現葡萄皮與葡萄籽提取物可以降低TC 水平，提高HDL-C 水平，這也與本文的研究結果相似。以上結果表明，本研究將這些食物或藥物進行科學組方，得到的組合物具有一定的調節血脂作用，且各組分均屬于藥食同源的中藥，更兼顧了使用的安全性、規范性及方便性。

表2 受試物對大鼠血清總膽固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、血清高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、血清低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）的影響（，n=10）Table 2 Effects of test substances on serum total cholesterol,serum triglyceride,serum high-density lipoprotein cholesterol and serum low-density lipoprotein cholesterol in rats (,n=10)

2.3 受試物對大鼠肝臟系數和肝酯酶（HL）、脂蛋白脂肪酶（LPL）活性的影響

肝臟系數為肝臟重量與體重的比值，由表3 可見，以1.5、0.5、0.25 g/kg·BW 劑量的受試物給予大鼠灌胃30 d 后，除空白對照組外，各組肝臟系數無明顯差異（>0.05），但各劑量組與模型對照組相比有一定的下降趨勢，提示該組合物可能對于緩解大鼠肝臟脂肪堆積有一定作用。

表3 受試物對大鼠肝臟系數的影響（，n=10）Table 3 Effect of test substance on liver coefficient of rats(,n=10)

肝脂肪酶（HL）是一種主要由肝細胞產生的脂肪分解酶，在HDL 代謝中起重要作用。HL 不僅能水解HDL 中的甘油三酯和磷脂，還能刺激肝細胞對HDL-C 的攝取。脂蛋白脂肪酶（LPL）則是甘油三酯水解的限速酶，負責分解血液中的甘油三酯，同時還以不同方式促進不同組織的脂質和能量代謝。HL 及LPL 的活性降低會導致HDL-C 水平降低以及TG 水平上升，引起高脂血癥。由表4 可見，以1.5、0.5、0.25 g/kg·BW 劑量的受試物給予大鼠灌胃30 d 后，高劑量組的HL、LPL 活性與模型對照組相比極顯著升高（<0.01），提示該組合物可能通過提高HL 和LPL 活性加速脂質代謝，從而起到調節血脂的作用。此外，本研究結果顯示，該組合物在低、中劑量時，對HL 及LPL 活性影響較小，提示其通過提高酶活性改善血脂代謝的作用可能需要在較為充足的劑量范圍內實現。

表4 受試物對大鼠肝酯酶（HL）和脂蛋白脂肪酶（LPL）活性的影響（，n=10）Table 4 Effects of test substances on rat liver esterase and lipoprotein lipase activities (,n=10)

2.4 受試物對大鼠肝組織病理形態的影響

由圖1 可見，空白對照組肝細胞排列整齊，細胞內基本無脂滴分布。模型對照組肝細胞內出現嚴重的脂變，且脂滴較大，說明高脂模型是成功的，造模大鼠的肝臟內存在脂肪堆積現象。而以1.5、0.5、0.25 g/kg·BW 劑量的受試物給予大鼠灌胃30 d 后，與模型對照組比，高、中劑量組脂滴空泡明顯減少、脂滴泡縮小，低劑量組則略微減輕。肝臟吸收血液中的脂肪酸，并將其酯化為中性脂肪，而肝脂肪變通常是由于脂蛋白合成障礙等原因脂肪運輸障礙，或對脂肪利用下降造成的，因此該結果提示了組合物具有一定代謝及轉運脂肪的作用。

圖1 HE 染色各組大鼠肝組織病理形態（100×）Fig.1 Pathological morphology of rat liver tissues in each group by HE staining (100×)

3 結論與討論

血脂異常是心血管疾病的重要危險因素，尤其與動脈粥樣硬化息息相關。一項流行病學調查顯示，2010 年我國45 歲及以上人群的血脂異常患病率達到了42.84%，但其知曉率、治療率和控制率僅為20.27%、14.41%、4.94%。研究表明，植物性保健食品中含有的許多生物活性成分，如類黃酮、生物堿、多糖、多酚等均具有調節血脂的作用。而傳統醫學中部分中藥屬藥食同源中藥，既具有調節血脂的作用，同時更兼顧了使用的安全性、規范性及方便性，提示可以將這些藥物用于血脂異常的日常保健及預防。

本實驗首次將山楂、烏梅、葡萄皮、枸杞、桑葚這些藥物或食物進行科學配比，制備出一種具有輔助降血脂功能保健食品。通過構建高脂大鼠模型，探究該組合物的調節血脂作用。研究結果表明，該組合物能降低高、中劑量組大鼠血清總膽固醇、甘油三酯，低密度脂蛋白膽固醇水平，提高血清高密度脂蛋白膽固醇水平，提高肝酯酶、脂蛋白脂肪酶活性，改善肝細胞變性，具有調節血脂的作用。推測該組合物輔助調節血脂的機制可能為：該組合物中，山楂、烏梅及葡萄皮主要起到抗氧化的作用，調節機體氧化應激水平，抑制高脂飲食誘導的血管炎癥，這種作用可能與山楂提取物的主要成分山楂黃酮、葡萄皮中富含的多酚、花青素及烏梅中所含的有機酸有關。與本文的研究結果相似，Shatoor 等發現，山楂提取物可以通過抗氧化機制及調節血清氧化低密度脂蛋白的水平；鄧婉婷等研究了烏梅總有機酸提取物的抗氧化效果，結果表明其對DPPH 有較強的清除能力，提示了烏梅的抗氧化的能力；而葡萄皮中富含的多酚可以通過調節胰島素敏感性和GLUT4 表達、預防骨骼肌和脂肪組織中的氧化應激來對肥胖和高脂飲食引起的相關代謝紊亂產生有益影響。同時，組合物中添加了枸杞、桑葚，這兩種組分均具有減輕內臟脂質堆積的作用。現代藥理學證明，枸杞中的枸杞多糖作為一種潛在益生元，可以通過增加腸道菌群多樣性，尤其是降低了厚壁菌/擬桿菌的比例，改善脂質代謝和腸道疾病；桑葚果實可以防止食欲亢進，降低高脂血癥帶來的體重增加和內臟脂肪堆積，降低血清TG 及HDL-C 水平。該組合物中的成分相結合，從調節氧化應激水平、減輕內臟脂質堆積等方面共同作用，與傳統醫學中“寒溫并用，消補同施”的理念相符合，共同起到輔助調節血脂的作用。

根據本實驗結果，這種組合物可以起到輔助調節血脂的作用，但其具體機制尚未明確。同時該結果與動物模型的造模嚴重程度及動物個體差異有關，該組合物在人體中能否發揮同樣的作用，以及在未來推廣使用中可能存在的潛在問題都有待于進一步的研究。綜上所述，本研究結果提供了一種更為安全無毒副作用的調節血脂新思路，并為其使用提供初步指導，進一步為新型降脂保健食品的開發提供支持。