老年非小細胞肺癌表皮生長因子受體突變的影響因素與分子靶向治療的效果研究

瞿明奎 姜賽賽 陳裕民

438000 黃州區人民醫院呼吸科，湖北黃岡

非小細胞肺癌(NSCLC)是臨床常見的惡性腫瘤疾病，類型主要包括大細胞癌、鱗狀細胞癌及腺癌等。相對于小細胞肺癌，NSCLC 的生長分裂速度較緩慢，擴散時間也偏晚。臨床肺癌患者中約80%為NSCLC，因肺癌早期無典型臨床癥狀，患者到院就診時多已進入了中晚期階段，錯過手術治療最佳時機，5年生存率較低，嚴重影響患者的生命健康和正常生活[1]。近年來，隨著放療及化療技術的不斷發展，根據驅動基因選擇靶向治療方案已成為臨床研究的熱點。研究表明，有40%～80%的NSCLC 患者中表皮生長因子受體(EGFR)呈高表達狀態，EGFR 及其天然配體在NSCLC 啟動和發展過程中發揮重要作用[2]。本研究旨在探討老年NSCLC患者EGFR突變的影響因素與分子靶向治療的效果，現報告如下。

資料與方法

選取2017年1月-2019年6月在黃州區人民醫院經病理檢查確診為NSCLC的268例老年患者作為研究對象。其中男142 例，女126 例；年齡65～84 歲，平均(74.16±3.23)歲；吸煙者112 例，不吸煙者156 例；病理類型：腺癌144例，鱗癌78例，其他(大細胞癌、腺鱗癌、肺泡癌)46 例；腫瘤T 分期：T1～T2期108例，T3～T4期160例。

納入標準：①患者經病理診斷確診為NSCLC；②初始治療的NSCLC患者；③心電圖、血常規、肝腎功能等各項檢查結果正常者；④患者自愿參與本研究，有良好的依從性，可接受定期隨訪；⑤患者預期生存期＞3個月。

排除標準：①以WHO 關于化療藥物相關毒性反應分級為準，患者存在嚴重(3級、4級)不良反應，難以耐受選擇退出研究；②研究中途失訪者；③臨床資料缺失者；④存在認知障礙、精神疾病或溝通障礙者；⑤處于妊娠期的女性。

方法：①EGFR 突變檢測：a.DNA 提取：患者組織蠟塊連續切片5～10 張，經4%中性甲醛固定，進行HE 染色與組織學分型，篩選出腫瘤成分≥70%的腫瘤組織蠟塊，置于1.5 mL 的EP 管內，應用蛋白酶將石蠟融化，采用石蠟包埋組織的DNA 抽提試劑盒，按照試劑盒操作說明提取、純化石蠟組織DNA。提取樣本基因組DNA，采用分光光度儀進行產物濃度及純度檢測，A260/A280=1.8±0.2，A260/A230≥1.7。將DNA 最終濃度稀釋至2 mg/L，-20℃下保存，待測。b.EGFR 突變基因檢測：采用優化寡核苷酸探針法對EGFR 基因進行檢測，設計EGFR 基因探針，通過熒光定量PCR 平臺探針水熒光，判定基因突變狀態，采用人EGFR 基因突變定性檢測試劑盒(生產廠家：北京博奧龍免疫技術有限公司)，根據試劑盒操作說明對EGFR 基 因19-del、 G719A、 L858R、G719C、G719X、T790M、L861Q、S768I、20-ins 外顯子突變進行檢測，每次反應設立陰性及陽性對照，利用熒光定量PCR 儀根據反應孔擴增曲線記錄結果。c.DNA測序：對腫瘤組織標本DNA，應用巢式聚合酶鏈式反應(PCR)法擴增EGFR 基因外顯子，采用水平式瓊脂糖凝膠電泳法檢測PCR 產物，純化PCR 產物用Big Dye v3.1 試劑盒(生產廠家：北京博奧龍免疫技術有限公司)進行測序PCR 擴增，純化產物用ABI 3500xl 試劑盒(生產廠家：北京博奧龍免疫技術有限公司)進行測序分析，標本均進行雙向測序檢測。②酪氨酸激酶抑制劑(EGFR-TKIs)治療：入組患者均給予厄洛替尼(生產廠家：上海羅氏制藥有限公司；批準文號：國藥準字H20170143)口服治療，150 mg/次，1 次/d。或給予?？颂婺?生產廠家：浙江貝達藥業有限公司；批準文號：國藥準字H20110061)治療，125 mg/次，3 次/d，連續服用至出現不可耐受的不良反應。

觀察指標：①觀察NSCLC患者EGFR基因突變情況。②分析影響NSCLC患者EGFR基因突變的相關因素。③根據WHO 實體瘤療效評價標準評價兩組治療效果，比較兩組疾病控制率(DCR)[3]。

統計學方法：數據均用SPSS 22.0 統計學軟件予以處理；計數資料以[n(%)]表示，比較采用χ2檢驗；P＜0.05為差異有統計學意義。

結 果

NSCLC 患者EGFR 基因突變情況：納入的268 例NSCLC 患者中，EGFR 基因突變陽性136 例，突變率為50.75%，其中19del 突變66 例(48.53%)，L858R 突變54(39.71%)例，G719X 突變6 例(4.41%)，20-ins 突變4 例(2.94%)，19del 和L858R雙突變2 例(1.47%)，19del 和T790M雙突變2 例(1.47%)，L858R 和T790M雙突變2例(1.47%)。

影響NSCLC患者EGFR基因突變的相關因素：年齡＞70歲與≤70歲患者的突變率比較，差異無統計學意義(P＞0.05)；女性患者突變率高于男性，無吸煙史患者突變率高于有吸煙史患者，腺癌患者突變率高于黏液腺癌及其他類型NSCLC 患者，差異均有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 影響NSCLC患者EGFR基因突變的相關因素[n(%)]

EGFR 基因突變陽性、陰性患者療效比較：EGFR 基因突變陽性患者的DCR 高于EGFR 基因突變陰性患者，差異有統計學意義(P＜0.05)。見表2。

表2 EGFR基因突變陽性、陰性患者療效比較[n(%)]

討 論

NSCLC 是臨床發病率較高的惡性腫瘤疾病，也是導致患者死亡的主要原因，危及患者生命安全。NSCLC 的誘因較多，較為典型的有遺傳、輻射、吸煙以及職業接觸等，早期階段患者主要表現為胸部輕微的悶痛或隱痛，并無典型臨床癥狀，因此，極易被患者忽視。大部分患者到院確診時已進入中晚期，主要表現為體重異常下降、容易疲乏等，部分合并呼吸障礙、咯血等局部癥狀[4]。準確的臨床檢測及診斷是保障NSCLC 患者治療效果的關鍵，臨床應根據相關檢測結果制定對應的治療措施，以控制患者病情惡化，延長生存期，提高生活質量[5]。

EGFR基因突變是NSCLC中第一代驅動基因，表現為一個或一段堿基缺失，插入及堿基替換的錯義突變，主要集中在第19號外顯子缺失和第21號外顯子L858R突變為主，約占EGFR 基因總突變率的85%～91%，EGFR 基因突變可引起EGFR 酪氨酸激酶活性增強。本研究結果顯示，NSCLC 患者EGFR 基因突變率為50.75%，女性、無吸煙史及腺癌患者突變率高，與相關研究結果一致[6-7]。

EGFR-TKIs 是目前治療晚期NSCLC 的有效方法，其治療效果突出，且安全性高。在晚期NSCLC 患者中，腫瘤樣本的可獲得性較差，且EGFR 基因突變的NSCLC 患者對EGFR-TKIs 會產生耐藥性。本研究結果顯示，接受EGFR-TKIs 治療后，EGFR 基因突變陽性患者DCR(90.44%)高于EGFR 基因突變陰性患者(59.09%)，說明EGFR-TKIs 靶向治療EGFR 基因突變患者的有效率更高。

綜上所述，NSCLC 患者EGFR 基因突變率較高，以女性、無吸煙史和腺癌患者多見，EGFR 基因突變陽性患者應用EGFR-TKIs治療的效果更好。