基于ISO15189 文件要求的孕酮定量檢測項目性能驗證

鄭綺菡，劉仍新，陳在旺

（1 單縣中心醫(yī)院檢驗科 山東 菏澤 274300）

（2 單縣中心醫(yī)院泌尿外科 山東 菏澤 274300）

近年來，越來越多的醫(yī)學實驗室將ISO15189 質量管理體系納入檢驗科發(fā)展規(guī)劃中來。檢驗方法和程序的分析性能驗證作為質量管理體系中技術要素的重要組成部分，在文件《臨床檢驗定量測定項目精密度與正確度性能驗證》《臨床實驗室檢驗項目參考區(qū)間的制定》《臨床生物化學檢驗常規(guī)項目分析質量要求》和《醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則在臨床化學檢驗領域的應用說明》中均提出了明確的性能參數(shù)要求和可參考的實施方案，性能參數(shù)至少應包括正確度、精密度、可報告范圍以及生物參考區(qū)間。現(xiàn)將孕酮各項性能參數(shù)報道如下。

1.資料與方法

1.1 樣本來源

精密度驗證所用樣本為貝克曼庫爾特原裝低值濃度和高值濃度2 種水平的質控品；正確度驗證所用樣本為衛(wèi)健委室間質評物；可報告范圍和參考區(qū)間驗證所用樣本來自就診患者和健康查體人群，樣本為新鮮血清，無脂血、溶血、黃疸等。

1.2 檢測系統(tǒng)與試劑

檢測系統(tǒng)為美國貝克曼DXI800 全自動化學發(fā)光分析儀，檢測試劑盒及校準品使用原裝配套，有效期限內使用。

1.3 方法

（1）試驗前準備。性能驗證試驗開始前，應先進行檢測系統(tǒng)的可靠性評價。提前做好檢測系統(tǒng)的校準工作，并在試驗當天保證室內質控在控，檢測系統(tǒng)運行良好，操作人員熟知標準操作流程及試驗方案。（2）精密度驗證。精密度指規(guī)定條件下，對同一或類似被測對象重復測量所得值或測得值間的一致程度，反映測量結果隨機誤差的大小。如果用標準差（s）和變異系數(shù)（Coefficient of Variation, CV）來表示，則稱為“不精密度”。按照相關要求，選用低值濃度和高值濃度2 種水平的質控品，每天每種濃度重復檢測4 次，連續(xù)檢測5 d，每種濃度質控品共可獲得20 組數(shù)據(jù)，并以此計算各濃度的重復性精密度和中間精密度。若重復性精密度不超過1/4 允許總誤差，中間精密度不超過1/3 允許總誤差，則驗證通過。允許總誤差（TEa）選用國家衛(wèi)健委臨檢中心室間質量評價標準，孕酮檢測項目的允許總誤差為25%。（3）正確度驗證。正確度指無限多次重復測量的平均值與真值的一致程度，反應測量結果系統(tǒng)誤差的大小。但在參考物質和參考方法難以實現(xiàn)的情況下，使用臨檢中心的質評物質評估項目的正確度也是可行的替代方法。故試驗中選用孕酮最近連續(xù)2 次衛(wèi)健委臨檢中心組織的室間質評測定數(shù)據(jù)10 組，以及室間質評報告中提供的靶值，計算各組數(shù)據(jù)的偏倚值。根據(jù)平均偏倚=|測定值-靶值|/靶值×100%，計算平均偏倚。若平均偏倚小于1/2允許總誤差，則驗證通過。（4）可報告范圍驗證。盡量選取接近線性范圍上限的臨床樣本做高值（H）樣本，盡量選取接近線性范圍下限的臨床樣本做低值（L）樣本。然后分別按照5 H、4 H+1 L、3 H+2 L、2 H+3 L、1 H+4 L、5 L 的順序混勻樣本，獲取6 種不同濃度的樣本，并對每種濃度的樣本重復做2 遍檢測。根據(jù)6 組數(shù)據(jù)的平均測定值和理論值，做線性回歸分析，得出平均測定值和理論值的線性關系Y=aX+b，及相關系數(shù)r。若斜率a 在0.970 ～1.030 范圍內，相關系數(shù)r ≥0.975，則驗證通過。（5）生物參考區(qū)間的驗證。至少從本地參考人群中選出20 人（包括剔除離群值后的人數(shù)），按照相關要求進行血液采樣及驗證。將20 組測定結果與參考區(qū)間的數(shù)值比較，若落在參考區(qū)間以外的測定值不超過2 個，則驗證通過。參考區(qū)間的符合率=驗證通過的組數(shù)/總參考組數(shù)×100%。參考區(qū)間驗證時需按男女分組及生理周期分組實施，每組參考人數(shù)至少20 人。女性生理周期控制標準依據(jù)臨床婦產(chǎn)科醫(yī)生建議，最終控制標準見表1，安排工作人員能夠精準采集到符合要求的血液樣本。

表1 孕酮廠家提供的參考區(qū)間及生理周期控制標準

1.4 統(tǒng)計學方法

利用EXCEL 2003 軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析處理。

2.結果

2.1 精密度驗證結果

2 種水平的質控品測得的重復性精密度均小于1/4允許總誤差，中間精密度均小于1/3 允許總誤差，驗證通過，見表2。

表2 20 組孕酮精密度驗證結果

2.2 正確度驗證結果

孕酮的平均偏倚小于1/2 允許總誤差，驗證通過，見表3。

表3 孕酮正確度驗證結果

2.3 可報告范圍驗證結果

孕酮廠家提供的線性范圍為＜0.1 ng/mL ～40 ng/mL，見表4。可知斜率a 為0.980，在0.970 ～1.030范圍內；相關系數(shù)r 為0.998，r ≥0.975；線性方程為y = 0.9802x+0.6324；驗證通過。

表4 孕酮性能驗證結果（ng/mL）

2.4 生物參考區(qū)間驗證結果

不同分組的測定結果可知驗證均通過，參考區(qū)間符合率為95%，廠家提供的生物參考區(qū)間可接受，見表5。

表5 孕酮參考區(qū)間的驗證結果

3.討論

廠家提供的性能參數(shù)是在最佳條件下完成的，與檢驗科的實驗條件和實驗室操作人員的能力等因素存在差異，且《醫(yī)學實驗室質量和能力認可準則》等文件也明確要求需要對檢驗方法和程序的分析性能進行驗證。驗證的時機一般有如下幾種情況：（1）新項目開展檢驗方法和程序常規(guī)應用之前；（2）已確立的檢驗方法和程序發(fā)生變更；（3）已確立的檢驗方法和程序其設備發(fā)生變更；（4）檢測系統(tǒng)發(fā)生了變更，如設備故障維修后、設備重大維護后、設施環(huán)境發(fā)生變更后等。

孕酮是育齡期女性非常重要的性激素之一，但近年由于各種因素影響，性激素分泌異常呈上升趨勢。基于此，保障孕酮準確檢測是檢驗科的重要工作。良好的精密度和正確度是保證檢測系統(tǒng)檢驗結果準確性的重要前提，也是其他方法學評價和驗證的基礎。精密度驗證時，需保證驗證樣品至少有2 個不同的濃度，并盡可能選用參考區(qū)間2 端接近的濃度或臨床決定水平處的濃度。我國參考系統(tǒng)不夠完善、參考物質存在較多弊端，很多檢驗項目的參考方法和有證參考物質正確度驗證難以實現(xiàn)。因此，目前正確度驗證多采用PT/EQA 的統(tǒng)計值實現(xiàn)。參考區(qū)間指依據(jù)所有參考值的分布特性和臨床使用要求，選擇合適的統(tǒng)計學方法進行歸納分析后確定的限值。

本文結果顯示，低水平和高水平質控品測得的重復性精密度分別為2.59%和4.12%，均小于1/4 允許總誤差6.25%；而測得的中間精密度分別為5.46%和4.60%，均小于1/3 允許總誤差8.33%，符合國家衛(wèi)健委臨檢中心室間質量評價標準相關要求。測得的孕酮的平均偏倚為6%，小于1/2 允許總誤差12.5%，符合國家衛(wèi)健委臨檢中心室間質量評價標準相關要求。可報告范圍驗證中，可知斜率a 為0.980，在0.970 ～1.030 范圍內，相關系數(shù)r 為0.998，r ≥0.975，表明實測值與理論值之間相關性良好。與單志鳴等得出的a為0.9716，r為0.9998，Y = 0.9716X+0.138 線性關系研究結果性能指標分析基本一致。參考區(qū)間驗證試驗中，男性測得的20 組數(shù)據(jù)均在0.14 ～2.06 ng/mL 范圍內，女性卵泡中期測得的20 組數(shù)據(jù)有18 組落在0.31 ～1.52 ng/mL 范圍內；女性黃體中期測得的20 組數(shù)據(jù)有18 組落在5.16 ～18.56 ng/mL范圍內，女性絕經(jīng)期測得的20 組數(shù)據(jù)有19 組落在＜0.08 ～0.78 ng/mL 范圍內，妊娠頭3 個月測得的20 組數(shù)據(jù)均在4.73 ～50.74 ng/mL 范圍內，妊娠中3 個月測得的20 組數(shù)據(jù)有19 組落在19.41 ～45.30 ng/mL 范圍內，這與廠家提供的參數(shù)基本一致，能夠滿足質量管理體系文件的要求。

綜上所述，通過對孕酮項目的精密度、正確度、可報告范圍、參考區(qū)間各項性能參數(shù)的驗證與分析，證實孕酮項目的檢測系統(tǒng)性能良好，能夠保證孕酮檢驗結果的準確性和穩(wěn)定性，更好地為臨床服務。