基于多指標成分評價川西高原野生川赤芍的質量

曲別軍長，俸明康，張紹山，蘭建龍，海來約布，黃艷菲，楊正明，李文兵，陳 晨，李 瑩，劉 璇*，劉 圓

基于多指標成分評價川西高原野生川赤芍的質量

曲別軍長1, 3, 4，俸明康1, 3, 4，張紹山2, 3, 4，蘭建龍1, 3, 4，海來約布1, 3, 4，黃艷菲2, 3, 4，楊正明2, 3, 4，李文兵2, 3, 4，陳 晨2, 3, 4，李 瑩2, 3, 4，劉 璇1, 3, 4*，劉 圓3, 4, 5*

1. 西南民族大藥學院，四川 成都 610041 2. 西南民族大學青藏高原研究院，四川 成都 610041 3. 四川省羌彝藥用資源保護與利用技術工程實驗室，四川 成都 610225 4. 青藏高原民族藥用資源保護與利用國家民委重點實驗室，四川 成都 610225 5. 西南民族大學民族醫藥研究院，四川 成都 610225

研究川西高原上野生川赤芍入藥部位（根）和非入藥部位（地上部分）中沒食子酸、氧化芍藥苷、兒茶素、芍藥內酯苷、芍藥苷、苯甲酸和丹皮酚7種化學成分的含量，并綜合評價其品質。以上述7種成分為對照品，采用高效液相色譜（HPLC）法，Agilent HC-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱溫30 ℃，體積流量1 mL/min，進樣量10 μL，檢測波長230 nm，乙腈-0.1%磷酸水梯度洗脫；采用2012版《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》軟件構建指紋圖譜；采用聚類熱圖分析、相似度分析、主成分分析（principal component analysis，PCA）、偏最小二乘回歸分析（partial least squares discrimination analysis，PLS-DA）等方法對各產地川赤芍進行評價。野生川赤芍地上部分和根中均含有7種化學成分，僅有3批次地上部分樣品中芍藥苷含量不符合《中國藥典》2020年版的要求。建立了野生川赤芍根和地上部分的HPLC指紋圖譜，二者均標定了19個相同的共有峰，并指認出其中的7個（沒食子酸、氧化芍藥苷、兒茶素、芍藥內酯苷、芍藥苷、苯甲酸、丹皮酚）。不同產地川赤芍的化學成分種類和含量存在一定差異且存在明顯的區域一致性特征，但芍藥苷的差異相對較小。康定市老榆林、雅江縣相格宗、阿壩縣查理加油站和若爾蓋縣巴西鄉的川赤芍藥材質量相對較好。建立的HPLC方法可用于分析川赤芍中的主要化合物，川西高原野生川赤芍藥材質量符合《中國藥典》要求，川赤芍根和地上部分中化學成分的種類和含量相近，地上部分具有開發利用的潛力。

野生川赤芍；高效液相色譜；沒食子酸；氧化芍藥苷；兒茶素；芍藥內酯苷；芍藥苷；苯甲酸；丹皮酚；品質評價

川赤芍Lynch為毛茛科芍藥屬多年生草本植物，分布在中國西南和西北的高海拔山坡疏林中[1]，與芍藥Pall.共同作為著名中藥材“赤芍”的基原植物收錄在《中國藥典》2020年版中，具有活血化瘀、清熱涼血的功效[2]。化學成分和藥理研究表明，川赤芍具有抗炎、免疫調節、抗動脈粥樣硬化、抗糖尿病、抗腫瘤、保護外周神經和保肝等多種藥理作用[3]，其主要生理活性成分包括單萜苷、酚酸及鞣質類成分[4-5]。此外，雖然芍藥屬植物中化學成分種類繁多，但其主要且獨特的成分為芍藥苷及其衍生物，因此《中國藥典》選取芍藥苷作為“赤芍”藥材的質控指標成分，規定芍藥苷含量不得少于1.8%[2]。

Yuan等[6]對生態因子對川赤芍生物活性和化學成分影響的研究表明，年平均氣溫、海拔、全鉀和有機質含量對川赤芍的生物活性以及柚皮苷、沒食子酸、苯甲酰芍藥苷、芍藥苷等成分的含量有重要影響。目前，川赤芍尚無規模化人工栽培，藥材資源主要依靠野生，理論上，野外環境因子的差異會導致川赤芍藥材質量的不穩定[6-9]。《中國藥典》1977年版前的僅收錄芍藥作為“赤芍”的基原植物，而芍藥在我國栽培歷史悠久、種植區域廣泛、種植技術成熟、藥材產量充沛，以及以芍藥為基原的“白芍”藥用廣泛。以上因素導致有關芍藥的研究眾多，而針對川赤芍的研究鮮有報道。鐘海蓉等[10]利用超高效液相色譜法（UPLC）法評價了18個不同產地的川赤芍質量，但該研究僅測定了芍藥苷、氧化芍藥苷、1,2,3,4,6--五沒食子酰葡萄糖3個化學成分，且該研究的川赤芍樣品主要來源于甘孜州康定縣、道孚縣、爐霍縣、甘孜縣及阿壩州汶川縣和壤塘縣；此外，川赤芍藥材的品質評價也出現在部分已有的研究報道中，但均是少量川赤芍與芍藥一起綜合評價[11-12]。川赤芍為青藏高原東南緣特有高海拔植物種，無雪期短導致植物生長期短，種子自身繁殖率低、再生資源困難，產量大幅減少，資源日趨枯竭，而其地上部分生物產量大。故本研究采用HPLC法對川西高原的野生川赤芍中芍藥苷、氧化芍藥苷、芍藥內酯苷、沒食子酸、兒茶素、丹皮酚、苯甲酸7種主要成分進行含量測定，并結合指紋圖譜、相似度分析、聚類熱圖分析、主成分分析（principal component analysis，PCA）、偏最小二乘回歸分析（partial least squares discrimination analysis，PLS-DA）等方法多角度綜合評價野生川赤芍的根和地上部分的藥材質量，對川赤芍的質控和資源綜合開發利用提供科學依據。

1 儀器與材料

Waters2695高效液相（美國Waters公司）；BP211D型電子天平（德國Sartorius公司）；KQ-5200E型超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）；METTLERAE240電子分析天平（上海梅特勒-托利多儀器有限公司）。乙腈為色譜純（美國Sigma公司）；水為屈臣氏蒸餾水；其余試劑為分析純。

對照品沒食子酸（批號RP191126）、氧化芍藥苷（批號RP191206）、兒茶素（批號RP200829）、芍藥內酯苷（批號RP191223）、芍藥苷（批號RP190519）、丹皮酚（批號RP190）均購自成都麥德生科技有限公司，質量分數均≥98.00%；苯甲酸（批號18020501）購于成都普菲德生物技術公司，質量分數98.76%。

樣品于2020年6月采自四川省甘孜藏族自治州與阿壩藏族羌族自治州的不同縣鎮，所有樣品均來源于野生環境，且經西南民族大學青藏高原研究院劉圓教授、張紹山助理研究員鑒定為毛茛科芍藥屬植物川赤芍Lynch，編號S1～S22，對應其根部和地上部分分別編號G1～G22和DS1～DS22信息見表1。

表1 川赤芍樣品來源

Table 1 Origins of P. veitchii

編號來源海拔/m采集日期 S1四川省阿壩州馬爾康縣卓克基鄉32522020-06-20 S2四川省阿壩州馬爾康縣卓克基鄉32672020-06-20 S3四川省阿壩州阿壩縣查理加油站29852020-06-22 S4四川省阿壩州阿壩縣查理加油站29872020-06-22 S5四川省阿壩州若爾蓋縣巴西鄉27892020-06-26 S6四川省阿壩州若爾蓋縣巴西鄉27862020-06-26 S7四川省阿壩州若爾蓋縣巴西鄉27862020-06-26 S8四川省阿壩州松潘縣大巖坊32962020-06-27 S9四川省阿壩州松潘縣大巖坊32922020-06-27 S10四川省阿壩州松潘縣大巖坊32922020-06-27 S11四川省阿壩州黑水縣達古冰川30062020-06-28 S12四川省阿壩州黑水縣達古冰川30152020-06-28 S13四川省阿壩州黑水縣西爾鎮24752020-06-28 S14四川省阿壩州黑水縣西爾鎮24772020-06-28 S15四川省阿壩州馬爾康縣阿木果腳35762020-10-26 S16四川省甘孜州康定市折多山41222020-06-20 S17四川省甘孜州康定市老榆林31502020-06-21 S18四川省甘孜州雅江縣相格宗49622020-06-22 S19四川省甘孜州雅江縣相格宗49662020-06-22 S20四川省甘孜州雅江縣麻格宗47862020-06-22 S21四川省甘孜州雅江縣勒察卡45262020-06-23 S22四川省甘孜州雅江縣勒察卡45632020-06-23

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Waters 2695高效液相色譜儀；Agilent HC-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈（A）-0.1%磷酸水溶液（B），二元梯度洗脫程序：0～5 min，5%～10% A；5～20 min，10%～15% A；20～25 min，15%～17% A；25～40 min，17%～19% A；40～45 min，19%～40% A；45～46 min，40%～70% A；46～60 min，70% A；柱溫30 ℃；體積流量1 mL/min；進樣量10 μL；檢測波長230 nm。對照品及供試品色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備

分別精密稱取沒食子酸、氧化芍藥苷、兒茶素、芍藥內酯苷、芍藥苷、苯甲酸、丹皮酚對照品適量，加色譜甲醇制成含沒食子酸0.202 mg/mL、氧化芍藥苷0.201 mg/mL、兒茶素0.206 mg/mL、芍藥內酯苷0.212 mg/mL、芍藥苷0.666 mg/mL、苯甲酸0.221 mg/mL、丹皮酚0.225 mg/mL的混合對照品溶液，搖勻后經0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

3-沒食子酸 6-氧化芍藥苷 8-兒茶素 9-芍藥內酯苷 10-芍藥苷 15-苯甲酸 19-丹皮酚

2.3 供試品溶液的制備

將干燥的待測川赤芍樣品粉碎，過40目篩，稱取藥材粉末約0.5 g，精密稱定，置于100 mL錐形瓶中，按料液比1∶50加入80%甲醇，搖勻，密封稱定質量，浸泡2 h后，超聲45 min，冷卻至室溫，密封稱定質量，用80%甲醇補足減失質量，搖勻后用 0.45 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.4 方法學考察

2.4.1 專屬性試驗 分別取供試品溶液（根、地上部分）和混合對照品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，得到特征峰，供試品溶液與雜質分離良好。

2.4.2 線性關系考察 精密吸取混合對照品溶液適量，加色譜甲醇稀釋成不同質量濃度，按“2.1”項下色譜條件測定。以對照品進樣量為橫坐標（），峰面積為縱坐標（），繪制標準曲線，并進行線性回歸，得7種成分的回歸方程與線性范圍，見表2。

表2 7種對照品的線性回歸方程

Table 2 Calibration curve of seven reference substances

成分回歸方程線性范圍/μgR2 沒食子酸Y＝17 772 295.66 X－62 962.530.020～2.020.999 9 氧化芍藥苷Y＝2 462 994.43 X0.020～2.010.999 6 兒茶素Y＝25 820 934.78 X－209 560.080.026～2.060.999 8 芍藥內酯苷Y＝9 597 000 X－120 5200.021～2.120.999 6 芍藥苷Y＝12 539 991.54 X－354 074.850.067～6.661.000 0 苯甲酸Y＝72 427 705.98 X－377 916.900.022～2.210.999 8 丹皮酚Y＝10 800 009 X－67 412.620.023～2.250.999 5

2.4.3 精密度試驗 取S1（G）批次供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件連續進樣6次，記錄7個對照品色譜峰的峰面積。結果各對照品色譜峰的峰面積均RSD＜2%，表明儀器精密度良好。

2.4.4 重復性試驗 取S1（G）批次藥材按“2.3”項下方法制備6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄7個對照品色譜峰的峰面積。結果各對照品色譜峰的含量RSD均＜2%，表明方法重復性良好。

2.4.5 穩定性試驗 取S1（G）批次供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別于0、2、4、8、12、24 h進樣測定，記錄7個對照品色譜峰的峰面積。結果各對照品色譜峰的峰面積均RSD＜2%，表明供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.4.6 加樣回收率試驗 精密稱取已測定含量的S1（G）批次樣品6份，分別精密稱量加入一定量的7個對照品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，計算回收率，沒食子酸、氧化芍藥苷、兒茶素、芍藥內酯苷、芍藥苷、苯甲酸、丹皮酚的加樣回收率分別為98.98%、96.48%、98.73%、95.98%、109.39%、105.39%、108.46%，RSD分別為0.96%、1.47%、0.86%、0.85%、1.62%、0.72%、2.23%。

2.5 樣品含量測定

2.5.1 川赤芍不同部位含量測定結果 將“2.3”項下制得的44批（根和地上部分）供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，測定結果見表3。由表3可知，川赤芍根樣品中沒食子酸、氧化芍藥苷、兒茶素、芍藥內酯苷、芍藥苷、苯甲酸、丹皮酚質量分數分別為0.09%～0.31%、0.07%～0.88%、0.11%～0.44%、0.10%～1.10%、2.63%～5.67%、0.18%～0.69%、0.07%～0.16%；地上部分樣品中沒食子酸、氧化芍藥苷、兒茶素、芍藥內酯苷、芍藥苷、苯甲酸、丹皮酚質量分數分別為0.03%～0.49%、0.09%～0.74%、0.08%～0.72%、0.10%～0.49%、0.13%～3.70%、0.08%～0.88%、0.04%～0.09%。芍藥苷在藥用部位（根）中的平均質量分數為3.94%，且各樣品均≥1.8%，符合藥典規定；地上部分樣品中芍藥苷平均質量分數為2.56%，其中19批次的含量達到了藥典標準。

2.5.2 聚類熱圖分析 聚類熱圖可通過縱向聚類和橫向聚類同時反映樣品間和性狀間的關系，以及可以利用熱圖顏色的深淺反映樣品中相應性狀的變化[14-15]。為了直觀地分析川赤芍根和地上部位中7種主要化學成分在不同產地中的含量變化，采用Heml-1.0軟件進行聚類熱圖分析，結果如圖2所示。聚類分析結果顯示，川赤芍根樣品可分為3類，S15、S16和S17聚為一類，S18、S19和S22號聚為一類，其他編號的聚為一類，其中S16、S17、S18、S19和S22均采自甘孜州；川赤芍地上部分也分為2類，S17、S18、S19、S20和S21號聚為一類，其他編號的聚為一類。熱圖分析結果顯示，“芍藥苷”及其衍生物“氧化芍藥苷”和“芍藥內酯苷”的含量在川赤芍中存在此消彼長的關系，這與它們能相互生物轉化的關系一致，同時也說明它們的總含量在川赤芍中維持著一定的平衡。

表3 44份樣品中7種化學成分的含量結果()

X1-沒食子酸 X2-氧化芍藥苷 X3-兒茶素 X4-芍藥內酯苷 X5-芍藥苷 X6-苯甲酸 X7-丹皮酚

2.6 指紋圖譜的建立與分析

中藥色譜指紋圖譜法是評價中藥質量和穩定性的最優方法，具有綜合、宏觀、模糊等非線性特點[16-18]。為了綜合表征和評價各川赤芍樣品的品質，故對各批次川赤芍樣品建立色譜指紋圖譜，從整體上分析其化學成分及其與產地等因素的關系。

2.6.1 指紋圖譜的建立 分別將“2.5”項下22個產地的川赤芍根和地上部分的HPLC數據以CDF格式導入《2012版中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》軟件，分別以G1和DS1樣品作為參照圖譜，采用中位數法，時間窗寬度為0.5，經過多點校正后，進行色譜峰的匹配，分別生成川赤芍根和地上部分的指紋圖譜疊加圖和對照圖譜，分別見圖3和4。以13號峰作為對照峰，得到根和地上部分分別有19個共有峰，與對照品色譜圖比對，共指認出7個共有峰，分別為沒食子酸（3號峰）、氧化芍藥苷（6號峰）、兒茶素（8號峰）、芍藥內酯苷（9號峰）、芍藥苷（10號峰）、苯甲酸（15號峰）、丹皮酚（18號峰）。

2.6.2 相似度分析 利用《2012版中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統》軟件分別對“2.6.1”項中川赤芍根和地上部分的色譜圖與對照圖譜進行相似度分析，結果見表4。由表可知，22批次川赤芍根樣品中有20批次的相似度在0.900～0.992，而G11和G22均低于0.900，分別為0.844和0.802；22批次川赤芍地上部分樣品中有15批次的相似度在0.912～0.995，而G5、G15～G17、G19、G20和G22均低于0.900，分別為0.899、0.881、0.784、0.722、0.801、0.755和0.811。說明各產地川赤芍根和地上部分的質量存在一定差異。

圖3 川赤芍根(A)和地上部分(B)指紋圖譜

圖4 川赤芍根(A) 和地上部分(B)對照指紋圖譜

表4 不同產地川赤芍相似度分析結果

Table 4 Similarity of P. veitchii from different habitats

編號相似度編號相似度 G10.920DS10.970 G20.977DS20.988 G30.951DS30.989 G40.986DS40.966 G50.948DS50.899 G60.945DS60.995 G70.966DS70.942 G80.956DS80.965 G90.945DS90.977 G100.992DS100.965 G110.844DS110.968 G120.911DS120.978 G130.975DS130.959 G140.944DS140.978 G150.933DS150.881 G160.915DS160.784 G170.900DS170.722 G180.919DS180.912 G190.911DS190.801 G200.927DS200.755 G210.964DS210.978 G220.802DS220.811

2.6.3 PCA分析 采用SPSS 23.0軟件，以19個共有峰（X1～X19）峰面積為變量，對川赤芍根、地上部分樣品進行PCA分析，川赤芍各樣品主成分因子載荷矩陣、公因子方差、Norm值以及主成分特征值、累積貢獻率及主成分綜合得分等分析結果見表5。

川赤芍根中特征值＞1的主成分有6個，累積貢獻率為83.4%，總體上可以表征川赤芍根樣本信息，參考文獻報道[11, 19]，選取6個主成分中因子最大載荷矩陣值10%范圍內和最高Norm值10%范圍內的指標進入品質指標評價的最小數據庫集（minimum data set，MDS），計算后選取共有峰X1、X5、X6、X8、X10、X11、X17、X19進入MDS，表明這些共有峰可以基本反映川赤芍根的品質信息。川赤芍地上部分中特征值＞1的主成分有5個，累積貢獻率為82.623%，基本可以反映川赤芍地上部分的品質信息，計算后選取共有峰X3、X4、X6、X7、X8、X10、X16、X18、X19進入MDS，表明這些共有峰可以基本反映川赤芍地上部分的品質信息。根據各樣品主成分綜合得分結果（表6），川赤芍根的綜合得分排名為G17＞G18＞G4＞G19＞G5……G14＞G7＞G6，表明康定市老榆林（G17）、雅江縣相格宗（G18、G19）、阿壩縣查理加油站（G4）、若爾蓋縣巴西鄉（G5）這4個產地的川赤芍根樣品質量較好。川赤芍地上部分的綜合得分排名為DS19＞DS17＞DS20＞DS16＞DS18……DS1＞DS2＞DS12，表明雅江縣相格宗（DS19）、康定市老榆林（DS17）、雅江縣麻格宗（DS20）、康定市折多山（DS16）、雅江縣相格宗（DS18）這5個產地的川赤芍地上部分樣品質量較好。

2.6.4 PLS-DA分析 為了篩選引起川赤芍根和地上部分差異的標志性成分，采用SIMCA 14.0軟件分別對根和地上部分HPLC指紋圖譜的共有峰峰面積（X1～X19）進行PLS-DA分析，以X1～X19的VIP值＞1作為評價標準，篩選引起差異的潛在化學成分。篩選結果（圖5）表明，川赤芍根樣品中共有峰11、19、8、6、13、14、15、5、3等的VIP值大于1，說明這些峰所代表的成分是造成不同產地川赤芍根樣品差異的主要標志性物質。地上部分樣品中色譜峰15、3、8、11、16、19、17、6、9等的VIP值大于1，說明這些峰所代表的成分是造成不同產地川赤芍地上部分樣品差異的主要標志性物質。這些色譜峰中并不包含川赤芍的特征物質“芍藥苷”，表明芍藥苷在樣品采集地域中的含量穩定性較好，這與含量測定結果中芍藥苷含量的RSD值相對較小一致。

3 討論

川赤芍為川產野生道地藥材。在四川，川赤芍主要分布在川西高原的甘孜州和阿壩州，以往關于野生川赤芍質量評價的研究主要集中在川西高原上甘孜州康定縣、道孚縣、爐霍縣、甘孜縣及阿壩州汶川縣和壤塘縣，以及一些未具體標注的地區[10, 12, 19]。本研究對川西高原上阿壩州的馬爾康縣、阿壩縣、若爾蓋縣、松潘縣和黑水縣以及甘孜州的康定市和雅江縣的野生川赤芍進行了質量評價，填補了這些川赤芍產區的數據空白，為川產川赤芍藥材的質量控制提供了更加全面的支撐。《中國藥典》規定川赤芍干燥根莖中芍藥苷含量≥1.8%，而本研究川赤芍根莖中芍藥苷含量均≥1.8%，這與前人對四川省其他區域的檢測結果一致[11, 13, 20]，表明川產野生川赤芍根中芍藥苷的含量符合藥典規定。

表5 川赤芍根和地上部分樣品PCA結果

Table 5 Results of principal component analysis in roots and aerial parts of P. veitchii

共有峰根地上部分 F1F2F3F4F5F6公因子方差Norm值F1F2F3F4F5公因子方差Norm值 X10.2610.7810.2070.145?0.423?0.1800.9531.615?0.1970.6590.0210.4230.2860.7341.501 X2?0.2890.4040.1390.328?0.429?0.5930.9101.374?0.1180.4940.4270.2630.2140.5551.214 X30.7270.441?0.033?0.4350.078?0.1990.9592.1290.9680.1130.0110.057?0.0950.9612.682 X40.0180.2200.097?0.6730.454?0.1750.7471.118?0.1390.808?0.134?0.4820.0960.9321.710 X50.8200.3580.218?0.101?0.1480.1380.9002.2660.4750.674?0.159?0.234?0.2060.8031.888 X60.902?0.018?0.0090.041?0.1650.2030.8852.3810.8870.199?0.186?0.1790.2420.9522.513 X7?0.6060.455?0.0210.2460.1040.0570.6491.7950.0440.8000.208?0.0890.0880.7001.570 X80.849?0.2570.0310.1950.191?0.1930.9002.3000.9380.110?0.1010.026?0.1070.9152.603 X90.575?0.3710.3080.4540.0910.1400.7981.7920.809?0.1180.118?0.1030.4630.9082.311 X100.1340.4660.389?0.0390.4880.1340.6441.193?0.210?0.042?0.4420.6290.4020.7991.204 X110.8510.117?0.3220.2770.062?0.0210.9222.3110.8460.1580.1150.208?0.2870.8792.393 X12?0.4100.537?0.3350.2250.373?0.0920.7671.5790.3590.6430.3980.342?0.2170.8641.733 X13?0.6020.3450.583?0.097?0.0560.2900.9181.896?0.5800.4010.358?0.2970.2760.7901.896 X140.4620.322?0.4730.3970.2020.2200.7881.6020.291?0.3530.7110.0930.2730.7981.443 X150.785?0.102?0.007?0.0530.232?0.2890.7672.1050.764?0.0370.1500.304?0.3500.8242.185 X16?0.0860.642?0.4970.0160.0830.2520.7381.3300.864?0.2610.048?0.0490.3170.9192.463 X170.5210.2470.6660.2020.0000.2080.8611.7370.790?0.246?0.190?0.0930.2950.8162.271 X180.2070.065?0.364?0.400?0.6200.2910.8091.2310.026?0.5580.573?0.251?0.0920.7111.349 X190.9210.139?0.037?0.224?0.107?0.0450.9332.4450.8880.084?0.110?0.1690.0450.8392.468 主成分特征值6.8602.8061.9711.6371.5601.0117.6123.6771.7291.4381.243 主成分貢獻率/%36.10514.76810.375 8.616 8.212 5.32440.06119.3549.0987.5706.540 主成分累積貢獻率/%36.10550.87361.24869.86478.07683.40040.06159.41568.51376.08382.623

表6 川赤芍根和地上部分主成分綜合得分分析結果

Table 6 Results of comprehensive score of principal component analysis in roots and aerial parts of P. veitchii

編號主成分編號主成分 F值排名F值排名 G1 0.357 9DS1?1.03520 G2?1.42919DS2?1.25921 G3 0.31310DS3 0.088 9 G4 1.312 3DS4?0.85818 G5 0.988 5DS5?0.30312 G6?2.22022DS6?0.49814 G7?2.10821DS7?0.11011 G8 0.23711DS8?0.37013 G9?0.37215DS9 0.175 8 G10?0.58116DS10?0.85117 G11?0.03813DS11?0.82916 G12 0.800 7DS12?1.53122 G13?0.17814DS13 0.05210 G14?1.47420DS14?0.64815 G15?1.28018DS15 0.253 7 G16 0.06212DS16 1.246 4 G17 2.139 1DS17 2.148 2 G18 1.957 2DS18 1.060 5 G19 1.040 4DS19 2.288 1 G20 0.422 8DS20 1.411 3 G21?0.75117DS21?0.97719 G22 0.807 6DS22 0.549 6

藥理研究表明，川赤芍中芍藥苷、沒食子酸及它們的衍生物等物質是川赤芍中的主要活性成分，具有鎮靜、鎮痛、擴張血管、抗炎、抗潰瘍、抗癌、抗病毒等生物活性[20-22]，本研究對川赤芍地上部分的檢測結果中，芍藥苷、氧化芍藥苷、芍藥內酯苷、沒食子酸等活性成分均被檢測到，其中芍藥苷的平均含量高達2.56%；此外，傳統入藥部位“根莖”和“地上部分”的指紋圖分析結果顯示，川赤芍地下部分和地上部分的化學成分種類幾乎一致。以上結果表明川赤芍地上部分存在潛在的藥用價值，有待進一步的資源綜合開發利用，如獸藥或日化品等。

本研究建立的指紋圖譜共匹配出19個共有峰，并指認出其中的7個（芍藥苷、氧化芍藥苷、芍藥內酯苷、沒食子酸、兒茶素、丹皮酚和苯甲酸），均是迄今已有川赤芍指紋圖譜中最多的，表明本研究建立的高效液相色譜的分離分析方法最適合川赤芍的指紋圖譜研究。相似度分析結果表明各產地川赤芍根和地上部分的相似度分別在0.802～0.992和0.722～0.995，說明各產地川赤芍的化學成分存在一定差異，這與Yuan等[7]發現生態因子（年平均氣溫、海拔、全鉀和有機質含量）對川赤芍中沒食子酸、苯甲酰芍藥苷、芍藥苷等成分的含量有重要影響的結論一致。此外，基于上述7個化學成含量的聚類熱圖分析結果顯示，川赤芍存在明顯的區域一致性特征，這可能是這些區域的生態因子相對一致導致的，進一步支持了Yuan等[6]的研究結果。

圖5 川赤芍根(A)和地上部分(B) 的HPLC指紋圖譜共有色譜峰的PLS-DA VIP值

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] Hong D Y. Peonies of the world: Taxonomy and phytogeography [M]. London:, 2010.

[2] 中國藥典[S]. 一部. 2020: 87.

[3] Zhang Y, Liu P, Gao J Y,.seeds as a promising high potential by-product: Proximate composition, phytochemical components, bioactivity evaluation and potential applications [J]., 2018, 125: 248-260.

[4] 張海生. 基于多層次相互作用網絡的赤芍抗腫瘤、抗氧化及降血脂協同作用藥效成分的篩選 [D]. 鎮江: 江蘇大學, 2019.

[5] Shi Y H, Zhu S, Ge Y W,. Monoterpene derivatives with anti-allergic activity from red peony root, the root of[J]., 2016, 108: 55-61.

[6] Yuan M, Yan Z G, Sun D Y,. New insights into the impact of ecological factor on bioactivities and phytochemical composition of[J]., 2020, 17(12): e2000813.

[7] 中國科學院中國植物志編輯委員會. 中國植物志-第二十七卷 [M]. 北京: 科學出版社, 1979.

[8] 簡在友, 王文全, 俞敬波. 赤芍野生資源調查及可持續利用技術途徑探討 [J]. 中國現代中藥, 2010, 12(5): 10-11.

[9] 向楚兵, 劉友平, 陳鴻平, 等. 赤芍二基源藥材的HPLC指紋圖譜鑒別及質量評價 [J]. 中國實驗方劑學雜志, 2011, 17(23): 43-48.

[10] 鐘海蓉, 張紹山, 肖芳, 等. 基于UPLC法測定指標成分結合指紋圖譜評價不同產地川赤芍不同部位的質量 [J]. 中草藥, 2021, 52(7): 2062-2071.

[11] 付士朋, 沈宏偉, 王謙博, 等. 指紋圖譜結合灰色關聯度分析法對不同產地赤芍質量的評價研究 [J]. 中草藥, 2019, 50(23): 5865-5871.

[12] 孫冬梅, 陳秋谷, 畢曉黎, 等. 二基原赤芍HPLC指紋圖譜的建立和5種成分的含量測定 [J]. 中藥材, 2018, 41(4): 898-903.

[13] Moon J Y, Jung H J, Moon M H,. Heat-map visualization of gas chromatography-mass spectrometry based quantitative signatures on steroid metabolism [J]., 2009, 20(9): 1626-1637.

[14] 瞿城, 唐于平, 史旭芹, 等. 基于化學計量學和多指標綜合指數法比較研究丹參-紅花藥對不同制法活血化瘀作用 [J]. 中國中藥雜志, 2017, 42(15): 3017-3025.

[15] 李洋, 陳健, 張越, 等. 基于指紋圖譜結合化學模式識別及多成分含量測定的白芍藥材質量評價研究[J]. 中草藥, 2022, 53(1): 231-237.

[16] Xie P S, Chen S B, Liang Y Z,. Chromatographic fingerprint analysis: A rational approach for quality assessment of traditional Chinese herbal medicine [J]., 2006, 1112(1/2): 171-180.

[17] Wagner H, Bauer R, Melchart D,.et—Xixin [A] // Chromatographic Fingerprint Analysis of Herbal Medicines [C]. Vienna: Springer Vienna, 2011: 45-57.

[18] 楊正明. 川產道地藥材江油附子和川烏品質及其與土壤養分相關性研究[D]. 雅安: 四川農業大學, 2019.

[19] 余捷婧, 吳金雄, 梁亞鳳, 等. HPLC同時測定赤芍和白芍中沒食子酸等6種成分的量 [J]. 中草藥, 2015, 46(11): 1673-1677.

[20] Zheng Y Q, Wei W, Zhu L,. Effects and mechanisms of Paeoniflorin, a bioactive glucoside from paeony root, on adjuvant arthritis in rats [J]., 2007, 56(5): 182-188.

[21] Wang D, Tan Q R, Zhang Z J. Neuroprotective effects of paeoniflorin, but not the isomer albiflorin, are associated with the suppression of intracellular calcium and calcium/calmodulin protein kinase II in PC12 cells [J]., 2013, 51(2): 581-590.

[22] 陸小華, 馬驍, 王建, 等. 赤芍的化學成分和藥理作用研究進展 [J]. 中草藥, 2015, 46(4): 595-602.

Quality evaluation of wildin Western Sichuan plateau based on multicomponents

QUBIE Jun-zhang1, 3, 4, FENG Ming-kang1, 3, 4, ZHANG Shao-shan2, 3, 4, LAN Jian-long1, 3, 4, HAILAI Yue-bu1, 3, 4, HUANG Yan-fei2, 3, 4, YANG Zheng-ming2, 3, 4, LI Wen-bing2, 3, 4, CHEN Chen2, 3, 4, LI Ying2, 3, 4, LIU Xuan1, 3, 4, LIU Yuan3, 4, 5

1. College of Pharmacy, Southwest Minzu University, Chengdu 610041, China 2. Institute of Qinghai-Tibetan Plateau, Southwest Minzu University, Chengdu 610041, China 3. Sichuan Qiang-Yi Medicinal Resources Protection and Utilization Technology and Engineering Laboratory, Chengdu 610225, China 4. Key Laboratory of Tibetan Plateau Ethnic Medicinal Resources Protection and Utilization of National Ethnic Affairs Commission of the People's Republic of China, Chengdu 610225, China 5. Ethnic Medicine Institute, Southwest Minzu University, Chengdu 610225, China

To determine the contents of gallic acid, oxypaeoniflorin, catechin, albiflorin, paeoniflorin, benzoic acid and paeonol of the roots and aerial parts ofwildfrom the Western Sichuan plateau, and then comprehensively evaluate of the quality of.High performance liquid chromatography (HPLC) analysis was used to analyze the samples with the following conditions: column type, agilent HC-C18column (250 mm× 4.6 mm, 5 μm); temperature, 30 °C; ?ow rate, 1 mL/min; injection volume, 10 μL; wavelength, 230 nm; and gradually diluted with acetonitrile-0.1% phosphoric acid water. The fingerprints were established by the Similarity Evaluation System of Traditional Chinese Medicine (version 2012). The comprehensive evaluation of the quality ofwas performed by the hierarchical clustering heat map analysis, similarity analysis, partial least squares discrimination analysis (PLS-DA) and principal component analysis (PCA).The results showed that both roots and aerial parts ofcontained gallic acid, oxypaeoniflorin, catechin, albiflorin, paeoniflorin, benzoic acid and paeonol. And the content of paeoniflorin in only three samples did not meet the requirement of the 2020 edition of China Pharmacopoeia. The HPLC fingerprints of roots and aerial parts ofwere established respectively, and both of the two fingerprints had 19 common peaks, of which seven were identified as gallic acid, oxypaeoniflorin, catechin, albiflorin, paeoniflorin, benzoic acid and paeonol. The kinds and contents of chemical components in both roots and aerial parts offrom different areas were variable, but the variation of paeoniflorin was relatively small. There was a feature of obvious regional consistency in the kinds and contents of chemical components of. Moreover, the rhizome (medicinal part) quality offrom Laoyulin of Kangding City, Xianggezong of Yajiang County, Chali gas station of Aba County and Baxixiang of Ruoergai County was relatively better.HPLC method established in this study could simultaneously separate and analyze the main compounds inThe rhizome quality offrom the Western Sichuan plateau met the requirement of Chinese Pharmacopoeia. Because the kinds and contents of chemical components in roots and aerial parts ofwere similar, the aerial parts had the potentiality of development and utilization.

wildLynch; high performance liquid chromatography; gallic acid; oxypaeoniflorin; catechin; albiflorin; paeoniflorin; benzoic acid; paeonol; quality evaluation

R286.2

A

0253 - 2670(2022)18 - 5842 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.18.027

2022-02-06

國家重點研發計劃（2018YFC1708005）；四川省科技計劃項目（重點研發項目-2021YFS0043）；西南民族大學2022年研究生創新型項目資助碩士重點項目（ZD2022491）

曲別軍長（1998—），男，在讀碩士，主要從事民族藥品種、品質評價及新藥資源開發與利用研究。E-mail: 1756847031@qq.com

劉 璇，女，主要從事民族藥資源品質評價研究。E-mail: 642978155@qq.com

劉 圓，教授，博士生導師，從事民族藥品種、品質評價及新藥資源開發與利用研究。E-mail: 499769896@qq.com

[責任編輯 時圣明]