菜用大豆莢殼中異黃酮的提取及抑菌作用研究

薛靜文, 周謹(jǐn)文, 黃潔彥, 金千禧, 丁建英

（常熟理工學(xué)院 生物與食品工程學(xué)院, 江蘇 常熟 215500）

菜用大豆, 俗稱毛豆, 一般是指處于鼓粒期至初熟期之間, 其籽粒填充程度達(dá)到莢長(zhǎng)80%～90%時(shí)采摘并專門鮮食嫩莢的蔬菜用大豆[1-2]。菜用大豆在我國(guó)有著5000多年的栽培歷史, 因其有一定藥用價(jià)值, 在早期作為藥用植物, 而其食用習(xí)慣在我國(guó)也有著悠久的歷史。菜用大豆中膳食纖維的含量遠(yuǎn)高于其他蔬菜, 比大家所熟知的芹菜桿的纖維含量還要高, 有著“蔬菜纖維冠軍”的美譽(yù)[2]。其中, 還富含蛋白質(zhì)、脂肪、礦物質(zhì)和各種維生素, 以及皂甙、植酸、低聚糖等保健成分, 具有降血壓、降血脂和強(qiáng)身健體、益氣補(bǔ)虛的功效。我國(guó)已逐漸成為菜用大豆最大的生產(chǎn)國(guó)和出口國(guó), 對(duì)于豆粒已經(jīng)存在許多深加工, 而在莢殼方面, 除了作飼料之外, 其他方面的研究還比較少。

黃酮類化合物是一類廣泛存在于自然界植物中的天然產(chǎn)物, 其中絕大多數(shù)黃酮類化合物會(huì)與葡萄糖結(jié)合成苷類, 而小部分黃酮類化合物則會(huì)以游離苷元的形式存在[3]。根據(jù)研究表明, 此類化合物具有多種活性功能, 包括抗癌、抗炎癥、抗抑菌活性、抗氧化、降血脂、降血壓等功效[4]。除此之外, 黃酮類化合物還可以調(diào)節(jié)人體的腸道菌群[5], 在食品加工中還對(duì)丙烯酰胺有一定的抑制作用[6]。

異黃酮是黃酮類化合物的一種, 主要存在于豆科植物中, 其結(jié)構(gòu)與人體雌激素結(jié)構(gòu)非常相似, 又被稱為植物雌激素。大豆中存在的主要有染料木黃酮、黃豆苷元和大豆黃素3種異黃酮。其功效除一般黃酮擁有的功效外, 還在改善更年期綜合征、延緩衰老、美容養(yǎng)顏, 以及畜牧生產(chǎn)和藥物開(kāi)發(fā)等方面均有很好的作用[7], 具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景。

對(duì)于植物黃酮類化合物的提取, 主要有傳統(tǒng)提取法和現(xiàn)代提取法[8], 這幾種方法相輔相成, 各有優(yōu)缺點(diǎn), 且在實(shí)際工作中經(jīng)常一起使用, 以此提高提取率。包括醇提法和水提法、微波輔助提取法、超聲輔助提取法等, 其中超聲輔助提取法是應(yīng)用最為廣泛的提取方法[9]。試驗(yàn)在此基礎(chǔ)上, 將菜用大豆莢殼作為原料, 進(jìn)行異黃酮提取研究, 并進(jìn)行抑菌作用和抗氧化活性的研究, 為菜用大豆莢殼的廢物利用提供研究基礎(chǔ), 也為利用果蔬廢棄資源研制天然食品防腐劑提供依據(jù)[10]。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

新鮮菜用大豆（毛豆）、染料木素（分析標(biāo)準(zhǔn)品, HPLC≥98%）, 上海源葉生物科技有限公司提供；無(wú)水氯化鋁、無(wú)水乙醇、牛肉膏、蛋白胨、瓊脂粉、氯化鈉、1,1-二苯基-2-苦肼基（DPPH）、硫酸亞鐵、過(guò)氧化氫溶液、水楊酸、抗壞血酸（維C）、活性炭（顆粒）, 以上試劑均為分析純。

高速中藥粉碎機(jī), 廣州市旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司產(chǎn)品；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱, 上海新苗醫(yī)療器械有限公司產(chǎn)品；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀, 上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品；HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋, 國(guó)華電器有限公司產(chǎn)品；高速臺(tái)式離心機(jī), 湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司產(chǎn)品；超聲波清洗器, 昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司產(chǎn)品；生化培養(yǎng)箱, 上海一恒科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；立式高壓蒸汽滅菌鍋, 上海申安醫(yī)療器械廠產(chǎn)品；TU-1901型雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì), 北京普析通用儀器有限公司產(chǎn)品。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 菜用大豆莢殼中異黃酮的提取工藝流程

（1）原材料處理。將新鮮的菜用大豆剝?nèi)ザ沽? 收集豆莢, 清洗干凈后先自然風(fēng)干24 h, 再放入恒溫干燥箱中烘干24 h, 烘干的過(guò)程溫度不宜過(guò)高, 控制在60℃。干燥至恒質(zhì)量后, 取出粉碎成粉末并過(guò)60目篩, 將粉末放入干凈的密封袋中, 置于冰箱4℃下冷藏備用。

（2）異黃酮的提取。參考王桃云等人[11]的研究方法, 并進(jìn)行了改進(jìn)。準(zhǔn)確稱取5 g的菜用大豆莢殼粉末, 按照一定量的乙醇溶液, 在一定溫度下超聲提取一段時(shí)間, 然后以轉(zhuǎn)速5000 r/min離心10 min, 取上清液, 再旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)行濃縮, 溫度控制在60℃, 最后加入活性炭并通過(guò)濾紙過(guò)濾, 得到最終提取液。異黃酮得率按公式（1）計(jì)算：

式中：P——樣品中異黃酮得率, mg/g；

C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算得到的提取液質(zhì)量濃度, mg/mL；

N——樣品提取液總體積, mL；

k——稀釋倍數(shù)；

m——稱取粉末的質(zhì)量, g。

1.2.2 最大吸收波長(zhǎng)的確定

參考王桃云等人[12]的方法, 并進(jìn)行了適當(dāng)修改。首先分別準(zhǔn)確量取染料木素標(biāo)準(zhǔn)液和提取液各1.0 mL放置于10 mL容量瓶中, 加入體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇定容至刻度線, 搖勻, 用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)在波長(zhǎng)200～800 nm進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描, 從而確定提取液的最大吸收波長(zhǎng)為263 nm。

1.2.3 染料木素標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

準(zhǔn)確稱取染料木素標(biāo)準(zhǔn)品3.4 mg, 先用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇溶解后, 置于100 mL的容量瓶中, 再用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇沖洗幾次燒杯, 將液體倒入容量瓶中, 最后用體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇定容至刻度線, 搖勻。從中取出10 mL置于50 mL的容量瓶中, 用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇定容至刻度線, 即得到染料木素標(biāo)準(zhǔn)液, 質(zhì)量濃度為6.8μg/mL。

準(zhǔn)確量取已制備好的標(biāo)準(zhǔn)液0, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0 mL分別置于10 mL的容量瓶中, 用95%的乙醇定容至刻度線, 搖勻。用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇調(diào)零, 在波長(zhǎng)263 nm處測(cè)定吸光度, 記錄數(shù)據(jù), 以溶液質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo), 以吸光度為縱坐標(biāo)繪制染料木素標(biāo)準(zhǔn)曲線[12]。

1.2.4 單因素試驗(yàn)

選定對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮提取產(chǎn)生影響的4個(gè)因素進(jìn)行單因素試驗(yàn), 分別為料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲時(shí)間和超聲溫度。

單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)水平見(jiàn)表1。

表1 單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)水平

1.2.5正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)

為了進(jìn)一步優(yōu)化菜用大豆莢殼中異黃酮的提取工藝, 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)[13]。分別選擇料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)、超聲時(shí)間及超聲溫度這4個(gè)因素的3個(gè)水平, 再通過(guò)L9（34）的正交表進(jìn)行正交試驗(yàn)[14]。

正交試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)見(jiàn)表2。

表2 正交試驗(yàn)因素與水平設(shè)計(jì)

1.3 抑菌與抗氧化性研究

1.3.1 抑菌試驗(yàn)

采用紙片法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)[15-16]。首先用打孔器打成直徑為8mm的圓紙片, 包扎好后連同培養(yǎng)皿及試驗(yàn)所用到的器材一同滅菌。無(wú)菌操作臺(tái)事先紫外滅菌30 min。點(diǎn)燃酒精燈并消完毒后, 在酒精燈旁打開(kāi)滅好菌的培養(yǎng)基, 將培養(yǎng)皿中倒入15～20 mL的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基, 蓋上蓋, 待其冷卻凝固之后, 再將培養(yǎng)基上加入制備好的菌懸液200μL, 用酒精燈灼燒過(guò)的涂布棒將菌液涂布均勻, 待其完全吸收。用灼燒過(guò)的鑷子取出事先在提取液中浸泡過(guò)一夜的紙片（共3片）以及在蒸餾水中浸泡過(guò)的紙片（1片）, 在火焰旁微微干燥過(guò)后, 整齊地放在一個(gè)培養(yǎng)皿上, 蓋上蓋, 待紙片上的液體被完全吸收, 放入恒溫培養(yǎng)箱中37℃下培養(yǎng)24 h后, 觀察并測(cè)量抑菌圈直徑。

1.3.2 對(duì)DPPH自由基的清除作用

由于DPPH自由基存在單個(gè)電子, 而其醇溶液又呈現(xiàn)紫色, 并且在波長(zhǎng)517 nm處有強(qiáng)吸收, 加入抗氧化劑之后, 因?yàn)殡娮舆M(jìn)行了配對(duì)而導(dǎo)致溶液顏色變淺, 吸光度變小, 因此可以利用這個(gè)原理來(lái)測(cè)定對(duì)DPPH自由基的清除能力。

參考王蔚新等人[17]的研究, 并進(jìn)行了適當(dāng)修改：配置不同質(zhì)量濃度的提取液（0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 mg/mL）, 分別量取2.0 mL于試管當(dāng)中, 加入0.2 mmol/L的DPPH溶液2.0 mL, 充分搖勻, 避光靜置30 min。用無(wú)水乙醇調(diào)零, 在波長(zhǎng)517 nm處測(cè)得吸光度A2；用無(wú)水乙醇代替DPPH溶液, 作為對(duì)照測(cè)其吸光度A3；取相同體積DPPH溶液和無(wú)水乙醇混合, 測(cè)其吸光度A1。按照上述相同步驟, 將抗壞血酸作為參照物, 測(cè)定其吸光度。進(jìn)行平行試驗(yàn), 減少誤差。對(duì)DPPH自由基清除率按公式（2）計(jì)算：

式中：A2——提取液和DPPH溶液的吸光度；

A3——提取液和無(wú)水乙醇的吸光度；

A1——無(wú)水乙醇和DPPH溶液的吸光度。

1.3.3 對(duì)羥基自由基的清除作用

在Fenton反應(yīng)中, Fe2+催化分解H2O2, 產(chǎn)生羥基自由基, 其具有高活性。在該反應(yīng)體系中加入水楊酸, 水楊酸有效捕捉羥基自由基并反應(yīng)生成2,3-二羥基苯甲酸羥基化合物, 該化合物在波長(zhǎng)510 nm處有強(qiáng)吸收。如果往該體系中加入可以清除羥基自由基的物質(zhì), 使得化合物含量減少, 其吸光度也隨之降低。利用吸光度值的變化測(cè)得對(duì)羥基自由基的清除能力。

參考王蔚新等人[17]的研究, 并進(jìn)行了適當(dāng)修改：配置不同質(zhì)量濃度的提取液（0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0 mg/mL）, 分別量取2.0 mL于試管當(dāng)中, 先加入9 mmol/L FeSO4溶液和8.8 mmol/L H2O2溶液各2.0 mL, 充分搖勻, 靜置5 min。然后再加入9 mmol/L水楊酸溶液2.0 mL, 充分搖勻, 放置于水浴鍋中于37℃下恒溫水浴30 min。用蒸餾水調(diào)零, 于波長(zhǎng)510 nm處測(cè)得吸光度A2；用蒸餾水代替提取液為空白對(duì)照測(cè)其吸光度A1；用蒸餾水代替H2O2測(cè)其吸光度A3。按照上述相同步驟, 將抗壞血酸作為參照物, 測(cè)定其吸光度。進(jìn)行平行試驗(yàn), 減少誤差。對(duì)羥基自由基清除率按公式（3）計(jì)算：

式中：A2——加入提取液和H2O2溶液的吸光度；

A3——加入提取液和蒸餾水的吸光度；

A1——加入蒸餾水和H2O2溶液的吸光度。

2 結(jié)果與分析

2.1 最大吸收波長(zhǎng)

根據(jù)1.2.2的方法對(duì)染料木素和菜用大豆莢殼中異黃酮進(jìn)行紫外吸收光譜掃描。

染料木素紫外吸收光譜掃描圖見(jiàn)圖1, 菜用大豆莢殼中異黃酮紫外吸收光譜掃描圖見(jiàn)圖2。

圖1 染料木素紫外吸收光譜掃描圖

由圖1和圖2可知, 染料木素在波長(zhǎng)263 nm處有最大吸收波長(zhǎng), 而菜用大豆莢殼中異黃酮在波長(zhǎng)267 nm處有最大吸收波長(zhǎng), 兩者十分接近, 因此選擇263 nm作為測(cè)定菜用大豆莢殼中異黃酮含量的波長(zhǎng)。

圖2 菜用大豆莢殼中異黃酮紫外吸收光譜掃描圖

2.2 染料木素標(biāo)準(zhǔn)曲線

按照1.2.3的方法進(jìn)行試驗(yàn), 得到染料木素標(biāo)準(zhǔn)曲線。

染料木素標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖3。

圖3 染料木素標(biāo)準(zhǔn)曲線

由圖3可知, 線性回歸方程為Y=0.1533X-0.0008, R2=0.9991, 線性關(guān)系良好。

2.3 單因素試驗(yàn)結(jié)果與分析

2.3.1 料液比對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮得率的影響

選擇料液比1∶5, 1∶10, 1∶15, 1∶20, 1∶25, 1∶30（g∶mL）進(jìn)行研究, 按照乙醇體積分?jǐn)?shù)為85%, 溫度為40℃下超聲提取30 min。

料液比對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮得率的影響見(jiàn)圖4。

圖4 料液比對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮得率的影響

由圖4可知, 當(dāng)料液比為1∶15時(shí), 菜用大豆莢殼中異黃酮得率最高。料液比低于1∶15時(shí), 無(wú)法完全溶解粉末, 使異黃酮完全溶出；料液比高于1∶15時(shí), 粉末已被完全溶解, 異黃酮完全溶出, 隨著料液比的增加會(huì)使其他雜質(zhì)也溶解于乙醇中, 導(dǎo)致異黃酮得率降低[18]。因此, 選擇1∶10, 1∶15, 1∶20（g∶mL）作為正交試驗(yàn)的料液比范圍。

2.3.2 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮得率的影響

選擇乙醇體積分?jǐn)?shù)65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%進(jìn)行研究, 按照料液比為1∶20, 溫度為40℃下超聲提取30 min。

乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮得率的影響見(jiàn)圖5。

圖5 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮得率的影響

由圖5可知, 當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)為75%時(shí), 菜用大豆莢殼中異黃酮得率最高。乙醇體積分?jǐn)?shù)低于75%時(shí), 隨著體積分?jǐn)?shù)的上升異黃酮得率也逐漸提高；當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)高于75%時(shí), 異黃酮得率隨著體積分?jǐn)?shù)上升而逐漸降低, 原因可能是菜用大豆莢殼中異黃酮的極性與75%乙醇的極性相近[11], 且過(guò)高的濃度可能破壞了溶解出的異黃酮, 使得率降低。因此, 選擇70%, 75%, 80%作為正交試驗(yàn)的乙醇體積分?jǐn)?shù)范圍。

2.3.3 超聲時(shí)間對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮得率的影響

選擇超聲時(shí)間25, 30, 35, 40, 45, 50 min進(jìn)行研究, 按照料液比為1∶20, 乙醇體積分?jǐn)?shù)為85%, 超聲溫度為40℃下進(jìn)行提取。

超聲時(shí)間對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮得率的影響見(jiàn)圖6。

圖6 超聲時(shí)間對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮得率的影響

由圖6可知, 超聲時(shí)間為25～40min時(shí), 菜用大豆莢殼中異黃酮得率快速提高, 且在40 min時(shí)到達(dá)最高, 之后隨著時(shí)間的增加, 異黃酮得率反而下降。原因可能是超聲波具有較強(qiáng)的機(jī)械剪切作用, 使得異黃酮裂解, 結(jié)構(gòu)被破壞, 含量減少[11]；而且過(guò)長(zhǎng)的時(shí)間可能會(huì)使溶解的雜質(zhì)增多, 降低了異黃酮的純度, 得率降低。因此, 選擇35, 40, 45 min作為正交試驗(yàn)的超聲時(shí)間范圍。

2.3.4 超聲溫度對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮得率的影響

選擇超聲溫度30, 40, 50, 60, 70, 80℃進(jìn)行研究, 按照料液比為1∶20, 乙醇體積分?jǐn)?shù)為85%, 超聲提取30 min。

超聲溫度對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮得率的影響見(jiàn)圖7。

圖7 超聲溫度對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮得率的影響

由圖7可知, 超聲溫度為30～60℃時(shí), 菜用大豆莢殼中異黃酮得率隨著溫度上升而逐漸提高, 并在60℃時(shí)達(dá)到最高, 之后隨著溫度的上升, 異黃酮得率逐漸下降。原因可能是溫度的上升使得溶劑滲透作用加強(qiáng), 分子擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)加快, 異黃酮的溶出量也隨之增多；但是, 過(guò)高的溫度反而會(huì)影響穩(wěn)定性, 使異黃酮的結(jié)構(gòu)被破壞, 進(jìn)而導(dǎo)致異黃酮得率降低。因此, 選擇50, 60, 70℃作為正交試驗(yàn)的超聲溫度范圍。

2.4 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析

L9（34）正交試驗(yàn)分析見(jiàn)表3。

表3 L9（34）正交試驗(yàn)分析

由表3可知, 這4個(gè)因素均對(duì)菜用大豆莢殼中異黃酮得率有影響, 其中料液比對(duì)異黃酮得率影響最大, 而超聲時(shí)間對(duì)異黃酮得率影響最小, 影響的順序?yàn)锳＞B＞D＞C, 即料液比＞乙醇體積分?jǐn)?shù)＞超聲溫度＞超聲時(shí)間。最佳工藝條件組合為料液比1∶10（g∶mL）, 乙醇體積分?jǐn)?shù)80%, 超聲時(shí)間45 min, 超聲溫度70℃。在此條件下進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn), 得到菜用大豆莢殼中異黃酮得率為2.39 mg/g, 低于大豆莢殼中異黃酮的含量, 為3.5 mg/g[11]。

2.5 抑菌作用結(jié)果與分析

菜用大豆莢殼中異黃酮提取液對(duì)2種菌的抑菌圈直徑見(jiàn)表4。

表4 菜用大豆莢殼中異黃酮提取液對(duì)2種菌的抑菌圈直徑/mm

表4中數(shù)據(jù)為平行3次, 共6組數(shù)據(jù)的平均值且均已減去8 mm紙片的直徑。由表4可知, 菜用大豆莢殼中異黃酮提取液對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有一定的抑制作用。其中, 大腸桿菌的抑菌圈直徑大小為3.83±1.77 mm, 金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑大小為11.50±2.75 mm, 抑菌效果良好。對(duì)照組浸泡蒸餾水的紙片未出現(xiàn)抑菌圈。

根據(jù)革蘭氏染色法可將細(xì)菌分為革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌, 大腸桿菌為革蘭氏陰性菌, 金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽(yáng)性菌。經(jīng)過(guò)上述分析可以推斷出, 菜用大豆莢殼中異黃酮提取液對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌的抑制作用高于革蘭氏陰性菌。

2.6 抗氧化性結(jié)果與分析

2.6.1 對(duì)DPPH自由基的清除效果

菜用大豆莢殼中異黃酮提取液和維C對(duì)DPPH自由基的清除效果見(jiàn)圖8。

圖8 菜用大豆莢殼中異黃酮提取液和維C對(duì)DPPH自由基的清除效果

由圖8可知, 維C和菜用大豆莢殼中異黃酮提取液在對(duì)DPPH自由基的清除上都有較好的效果, 且清除率與濃度呈正相關(guān)趨勢(shì)。此外, 在不同質(zhì)量濃度下, 異黃酮提取液對(duì)DPPH自由基的清除率均小于維C, 但仍有良好的效果, 在質(zhì)量濃度為1 mg/mL時(shí), 菜用大豆莢殼中異黃酮提取液對(duì)DPPH自由基的清除率為86.97%, 與黃福氣等人[18]報(bào)道的醬油渣異黃酮純化物對(duì)DPPH自由基的89.18%清除率相近。

2.6.2 對(duì)羥基自由基的清除效果

菜用大豆莢殼中異黃酮提取液和維C對(duì)羥基自由基的清除效果見(jiàn)圖9。

圖9 菜用大豆莢殼中異黃酮提取液和維C對(duì)羥基自由基的清除效果

由圖9可知, 維C和菜用大豆莢殼中異黃酮提取液在清除羥基自由基上都有著較好的效果, 且清除率與濃度呈正相關(guān)趨勢(shì)。當(dāng)質(zhì)量濃度為0.2～0.6 mg/mL時(shí), 異黃酮提取液的清除率略低于維C；當(dāng)質(zhì)量濃度達(dá)到0.8 mg/mL時(shí), 異黃酮提取液對(duì)羥基自由基清除率超過(guò)了維C；在質(zhì)量濃度為1 mg/mL, 菜用大豆莢殼中異黃酮提取液對(duì)羥基自由基的清除率為68.96%, 高于李超峰等人[19]報(bào)道的銀杏果外種皮總黃酮57.85%的羥基自由基的清除率, 清除效果良好。

3 結(jié)論

以菜用大豆莢殼為原材料, 利用超聲波輔助提取其中的異黃酮, 通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)優(yōu)化了提取工藝, 并對(duì)得到的異黃酮提取液進(jìn)行了抑菌和抗氧化性研究, 得到菜用大豆莢殼中異黃酮的最大吸收波長(zhǎng)為263 nm, 最佳提取工藝條件組合為料液比1∶10（g∶mL）, 乙醇體積分?jǐn)?shù)80%, 超聲時(shí)間45 min, 超聲溫度70℃。該條件下提取得到菜用大豆莢殼中異黃酮的得率為2.39 mg/g。在抑菌試驗(yàn)中, 菜用大豆莢殼中異黃酮提取液對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌圈平均直徑分別為3.83±1.77 mm和11.5±2.75 mm, 有一定的抑菌作用。在抗氧化性研究中, 當(dāng)質(zhì)量濃度為1 mg/mL時(shí), 菜用大豆莢殼中異黃酮提取液對(duì)DPPH自由基和羥基自由基的清除率分別為86.97%和68.96%, 說(shuō)明其具有良好的抗氧化性。

研究結(jié)果表明, 在菜用大豆莢殼中含有一定量的異黃酮, 并且在抑菌和抗氧化方面均有不錯(cuò)的效果。這為利用果蔬廢棄資源研制天然食品防腐劑提供了理論依據(jù)。