金銀花提取物功能性質的研究進展

張艷杰

（上海晨冠乳業有限公司, 上海 201401）

0 引言

金銀花屬于大宗藥材品種, 是我國藥食同源的一味中藥, 其性寒味甘, 具有清熱解毒、涼散風熱的功效[1]。金銀花常作為主要成分應用在臨床藥劑中, 如金銀花顆粒沖劑、金銀花膠囊等。因其藥食同源特性, 不僅作為中藥研究其藥理作用, 也作為保健食品研究其生物活性作用。對金銀花及其提取物活性成分的研究和利用進行歸納總結, 旨在為金銀花的深入研究及開發利用提供理論依據。

1 金銀花活性成分

金銀花為忍冬科植物, 富含有機酸類、黃酮類、揮發油類、環烯醚萜苷類等活性成分[2]。其中, 有機酸類成分可以分離出具有清熱解毒抗菌作用的綠原酸及異綠原酸。黃酮類成分, 如木犀草苷、忍冬苷常作為抗病毒、抗腫瘤、抗氧化活性的主要活性物質。揮發油類成分有抑菌、消炎、止血等功效。環烯醚萜苷類則起到保護肝膽的作用。

2 金銀花提取物功能特性

2.1 抗氧化作用

金銀花提取物具有較強的清除自由基的能力。研究表明, 金銀花提取物清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）、2,2-聯氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）自由基能力高于同質量濃度的維生素[3]。通過熱水煮提制備金銀花粗多糖（JLP）, 金銀花中性多糖組分（JLP-N）和酸性多糖組分（JLP-A）均具有一定的體外抗氧化活性。其中, JLP-A活性更強, 對DPPH自由基、羥基自由基和ABTS自由基均具有良好的清除能力, 而JLP-N僅對DPPH自由基具有較強的清除能力。利用H2O2誘導紅細胞氧化性溶血, 觀察JLP-A和JLP-N是否具有緩解作用時, 發現兩者均表現出較好的抑制作用, 且呈現一定的濃度依賴性[4]。金銀花綠原酸DPPH自由基的半數清除率為21.09μg/mL, 具有明顯的抗氧化活性；當金銀花綠原酸與蘆丁復配比例為9∶1時, 協同系數SE值為1.05, 表面兩者間協同增加抗氧化活性作用明顯[5]。金銀花三萜對DPPH自由基、ABTS自由基的清除率試驗證明, 金銀花提取物總三萜具有一定的抗氧化活性[6]。當金銀花多糖的質量濃度達到10 mg/mL時, 其清除DPPH自由基能力及清除ABTS自由基能力為90.78%和85.08%, 呈現一定的濃度依賴性, 說明金銀花多糖可作為抗氧化劑應用具有一定的可行性[7]。不同溶劑提取得到的金銀花多酚均具有一定的清除DPPH、ABTS和OH自由基能力, 即抗氧化活性, 但其清除DPPH自由基和ABTS自由基的能力弱于2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚（BHT）, 清除OH自由基的能力強于BHT, 且不同溶劑提取的金銀花多酚種類不同, 對自由基的清除能力不同[8]。

春播需種薯1 800 kg/hm2左右。要挑選出符合品種特征、完整、無病蟲害、無傷凍、表皮光滑、顏色好的薯塊作為種薯。播前催芽可以淘汰病薯，幼芽發根快，出苗早而齊，發棵早，結薯早，有利于高產。北方地區一般采用室外催芽，選擇背風向陽處挖寬1 m、深50 cm的催芽溝，按室內催芽方法將切塊擺放在溝內催芽，溝上搭小拱棚以提高溫度，17∶00蓋上草苫保溫，8∶00揭去草苫提高溫度。切塊要求∶每千克種薯切50塊左右，每塊以25 g左右為宜，切塊大小要一致，至少每塊上要有1個芽眼。換塊時切刀用酒精或高錳酸鉀水溶液消毒。切口離芽眼要近，可刺激早發芽，利于早出苗。

2.2 抗炎作用

通過體內試驗驗證, 復方峰膠金銀花提取物可降低小鼠的耳廓腫脹值和腫脹率, 降低大鼠的足趾腫脹率, 減輕小鼠的急性炎癥和大鼠的慢性炎癥, 抑制炎性細胞的侵入, 具有一定抗炎效果[9]。作為調節劑, 100 g/L金銀花提取物通過下調Wnt3a/β-catenin信號通路活性促進致癌因子脫氧膽酸（DCA）誘導的GES-1細胞的凋亡, 對胃黏膜上皮細胞起到保護作用[10]。金銀花提取物可以顯著抑制NO釋放, 降低IL-1β, IL-6, TNF-α炎癥因子的釋放[11]。通過抑制中性粒細胞的活化和分化、抑制炎癥介質生成, 金銀花提取物可以發揮抗炎和免疫調節作用, 緩解LPS誘導的急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）模型大鼠的炎癥, 改善ARDS大鼠肺組織病理損傷情況[12]。金銀花提取物還可以緩解小鼠撓鼻、噴嚏及流涕情況[13]。金銀花提取物通過作用于角質形成細胞, 可明顯抑制瘙癢小鼠模型的皮炎癥[14]。通過促進機體淋巴細胞增殖分化, 金銀花提取物可提高免疫抑制小鼠的T淋巴細胞活力、提高自然殺傷細胞活性、恢復T淋巴細胞亞群之間的平衡、抑制脾細胞凋亡, 進而改善免疫抑制小鼠的細胞免疫功能來提高小鼠的免疫功能, 對機體的免疫功能起到正向調節作用[15]。金銀花提取物能夠通過抑制NF-κB轉位入核, 并啟動炎癥因子相關基因從而減少炎癥因子TNF-α與IL-1β表達, 阻斷NF-κB的激活進而減少炎癥介質的合成和釋放, 抑制炎癥反應, 減輕LPS所致大鼠急性肺損傷[16]。

吸附-分離材料分離純化中藥提取液逐漸成為中藥活性成分分離純化的主流方法。鄭乃仁等人[30]通過優化連續色譜分級分離裝置參數, 確定最適宜的分級條件：以2 BV/h的流速上樣流經717型樹脂和AB-8型樹脂, 上樣液為生藥質量濃度0.2 g/mL金銀花水提液上樣體積為10 BV, 并以2 BV/h的流速用3 BV的70%乙醇溶液（pH值為3）、2 BV 70%乙醇溶液分別洗脫717型樹脂和AB-8型樹脂, 將總黃酮和其他雜質的分離, 得到純化后的總黃酮純度為90.3%。該裝置實現了金銀花水提液中綠原酸、總黃酮連續分級, 且處理過程中可實現純化金銀花水提液中總黃酮, 減少單獨純化步驟。

2.3 抗菌作用

通過體內試驗驗證, 隨著金銀花提取物添加量的增加, 草魚腸道樣本中微生物物種的豐度和均勻度呈現逐漸升高的趨勢[24]。金銀花醇提液和綠原酸會刺激腸道產生免疫因子, 使Th1細胞分化增多, 并通過調節腸黏膜免疫因子來增強腸道免疫屏障。金銀花提取液中木犀草苷能夠降低堿性磷酸酶的酶活性, 減少腸道中有害病原菌, 降低腸道有害菌的豐度、改善腸道環境, 且醇提金銀花比水提金銀花的效果更好[25]。

2.4 降糖降脂

高速剪切提取技術（High-speed Shearing Extraction, HSSE）作為一種新型提取技術, 具有快速、高效、常溫等特點, 能夠避免金銀花的活性物質受熱效應影響發生結構變化。付元真等人[26]得到高速剪切法的最佳工藝為乙醇體積分數60%, 料液比1∶25（g∶mL）, 轉速10000 r/min, 提取時間120 s, 該條件下金銀花的11種活性成分總提取率為35.86 mg/g, 且該條件下測得活性成分仍有較高的抗氧化活性。

金銀花被廣泛應用于飲料制備, 包括復合飲料、乳酸菌飲料、涼茶飲料、固體飲料等。張澤生等人[33]以紅茶、枸杞、金銀花為主要原料, 紅茶菌為菌種, 最佳工藝條件為紅茶添加量6 g/L, 枸杞添加量8.7 g/L, 金銀花添加量8 g/L, 紅茶菌接種量9.8%, 糖的加入量56.5 g/L, 30℃下振蕩通氣培養發酵。通過加入枸杞和金銀花增加紅茶菌發酵液中的營養成分, 結合紅茶菌原有酸甜香醇品質制得紅茶菌復合發酵飲料。張浩等人[34]以金銀花、菊花、木糖醇研制營養保健功能于一體的復合保健飲料, 得出最佳配方為菊花提取液添加量5%, 金銀花提取液添加量20%, 木糖醇添加量0.006%, 檸檬酸添加量0.0006%。該飲料澄清透明, 黃色的主色調中略顯紅褐色, 具有金銀花和菊花茶特有的色澤與風味。單垣愷等人[35]以蒲公英和金銀花為原料研制蒲公英金銀花復合保健飲料, 得到最佳配方為蒲公英提取液30%, 金銀花提取液30%, 白砂糖15%, 檸檬酸0.08%, 0.1%CMC-Na和0.1%海藻酸鈉。此外, 還有以雪菊、決明子、金銀花研制清熱解毒、涼散風熱、降脂降壓的復合保健涼茶飲料[36], 以及胖大海、金銀花和羅漢果等為原料研制的具有清熱涼血、清熱潤肺、止咳化痰功效的復合保健飲料[37]。王冬雪等人[38]以金銀花、夏枯草和雞蛋花為原料研制復合飲料, 最佳配方為金銀花浸提液為10%, 夏枯草浸提液為5%, 雞蛋花浸提液為30%, 白砂糖與檸檬汁配比為200∶120（g∶mL）；采用最佳配方研制的復合飲料總黃酮和總酚含量分別為0.52, 0.90 mg/mL, 具有同質量濃度下高于維C的抗氧化能力。

2.5 調節腸道菌群

金銀花提取物有良好的抑菌效果, 對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和銅綠假單胞菌的最小抑菌濃度（MIC）分別為31.25, 31.25, 125.00, 250.00 mg/mL[17]。王琳等人[18]使用熒光染料FITC標記法發現金銀花提取物質量濃度高于MIC時, 主要通過抑制菌體生長、減少胞外多糖產生而降低假單胞菌的黏附能力；金銀花提取物質量濃度低于MIC時, 主要通過溶解菌體胞外多糖、增強通透性、降低均勻度而降低假單胞菌的黏附能力。金銀花提取物通過抑制假單胞菌生長, 使假單胞菌無法聚集黏附, 降低黏附能力, 防止加速冷卻肉腐敗變質。賀常亮等人[19]以金黃色葡萄球菌為供試菌對小鼠進行了體內試驗, 研究金銀花提取物對細菌體內琥珀酸脫氫酶（SDH）活性的影響, 發現金銀花提取物可以減輕小鼠腎臟炎性滲出物, 從而減少注射金黃色葡萄球菌菌液小鼠的致死率。以金銀花、薄荷和干藏青果制備口嚼片, 當其配比為5∶1∶1時, 對牙齦單胞卟啉和具核梭桿菌具有最好的抑菌效果, 在抑菌的同時還能夠起到清新口氣的作用[20]。金銀花三萜同樣具有較強的抗菌作用, 通過微量稀釋法檢測常見致病菌對金銀花總三萜的敏感性, 最小抑菌質量濃度范圍在3～24 mg/mL[6]。

3 金銀花活性成分的提取方法

3.1 高速剪切提取法

在500～1500 mg/L質量濃度范圍內, 金銀花綠原酸提取物對α-葡萄糖苷酶活性有一定的抑制作用, 比新型口服降糖藥阿卡波糖的α-葡萄糖苷酶活性的抑制率高, 從而起到預防糖尿病的作用。同時, 對比醇浸水提、PEG提取和雙水相萃取3種提取方法得到的金銀花提取物, 得到PEG提取方法對α-葡萄糖苷酶活性抑制率最高[21]。元哲進等人[22]通過建立高糖的果蠅模型, 分析胰島素信號通路中重要基因-S6k基因低表達果蠅的脂肪儲存和細胞大小的影響, 發現金銀花提取物有效緩解由于S6k的缺失導致的果蠅脂肪油滴的面積減小和細胞減小, 進一步證明金銀花提取物對胰島素信號傳導途徑的影響, 從而起到降血糖的作用。此外, 葉清華[23]發現金銀花多糖組分能夠降低胰島素水平, 調控Ⅱ型糖尿病模型大鼠空腹血糖表達和改善胰島素抵抗。

3.2 超聲提取法

宋小鋒等人[27]采用超聲波預處理30.9 min, 提取劑中乙醇的體積分數為73.7%, 提取溫度為68.5℃, 回流提取2.1 h時, 綠原酸提取率為88.39%, 測得DPPH自由基的清除率達到95%以上, 表明金銀花仍具有良好的體外抗氧化性能。通過紙片法測定抑菌圈直徑測定超聲提取后的金銀花, 對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉有一定的抑菌活性。石艷賓等人[5]采用響應面優化法分析得出最佳提取條件為乙醇體積分數69%, 料液比1∶23（g∶mL）, 超聲溫度44℃, 超聲時間20 min時, 金銀花綠原酸提取率為6.20%, 且具有良好的抗氧化活性能力。常霞等人[6]確定最佳提取工藝參數為料液比1∶30（g∶mL）, 乙醇體積分數75%, 超聲時間50 min, 超聲溫度45℃時得到金銀花提取物三萜的提取率為3.71%。任美玲[28]采用超聲輔助乙醇提取金銀花活性成分, 以50%的乙醇作提取溶液, 料液比1∶15（g∶mL）, 超聲輔助提取溫度為50℃, 提取2次, 每次20 min, 金銀花綠原酸提取率為88.3%。

在超高壓條件下, 植物組織細胞間的極大壓力差使溶劑深入速度更迅速, 因此更有利于提取活性成分。范麗[32]得到金銀花最佳提取工藝為提取溶劑60%甲醇, 提取壓力400 MPa, 提取時間3 min料液比1∶30（g∶mL）, 在此條件下, 10種活性成分(新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、蘆丁、木犀草苷、3,4-二咖啡酰奎寧酸、3,5-二咖啡酰奎寧酸、4,5-二咖啡酰奎寧酸和槲皮素)總提取率達到57.62 mg/g, 并且均具有良好的線性關系。

3.3 連續色譜分級分離提取法

建立企業國際化績效評價體系的出發點，是使人們能夠更加準確地把握企業國際化經營發展的變化，能夠確定企業目前所處的國際化階段和國際化發展趨勢。通過構建新形勢下中國企業國際化績效評價指標體系，能夠讓我國企業更加清晰地認識到自身國際化發展的現狀，揚長避短，找到未來發展的方向。下一步的研究應對所提出的國際化績效評價指標體系進行實證檢驗，不斷加以完善。

3.4 醇提法

乙醇是親水有機溶劑, 常用于提取金銀花中綠原酸成分。曹曉琴等人[31]采用條件為提取溶劑為乙醇∶水（75∶25, V∶V）, 提取溫度為90℃, 提取時間為2 h, 該種方法證明綠原酸的平均回收率介于85.6%～88.8%。任美玲[28]采用水提醇沉法的到最佳提取工藝為料液比1∶30（g∶mL）, 提取溫度90℃, 提取2次, 每次45 min, 醇沉質量分數75%, 綠原酸提取率為73.72%。

3.5 超高壓提取法

除單獨使用超聲方法外, 劉思思等人[29]采用超聲波協同半仿生法提取金銀花。當先后加入50倍pH值為2.0, 7.5, 8.3的緩沖液, 在60℃下超聲提取60 min可以達到最佳提取效果。該方法通過降低提取溫度, 增加溶劑之間的滲透力, 得到有效成分綠原酸、連翹脂苷A、木犀草苷及連翹苷的綜合評分高達96.47分, 取得良好的提取效果。

4 金銀花提取物開發與應用

4.1 功能飲料

夜里戴菲兒躺在中間，艾莉和秦川，各守一側。每夜艾莉都會驚醒好幾次，她知道，戴菲兒隨時可能死去。戴菲兒早已不能下地，吃喝屙撒睡，全都需要艾莉和秦川的照顧。有時艾莉試圖喚來女傭，秦川急忙制止她說，讓我來吧！他明曉戴菲兒的心思，他想在她生命的盡頭，給她一點“做人”的尊嚴。想想便覺得滑稽，兩個人為一個即將報廢的玩偶夜不能寐，兩個人為這個玩偶的所謂尊嚴筋疲力盡，這樣的事情說出去，絕不會有人相信。可是這樣的事情每天都在發生，艾莉和秦川，已經很久沒有做愛。

其一，要凸顯“互聯網+”的技術優勢，充分發揮其電子技術的特點，做好財務信息的整合，對下屬組織的財務狀況加以監管，以便節約成本，減少浪費；其二，加強非結構化的財務管理，財務數據可以證實，及時為支持服務器，并自動傳輸到財務信息系統，可以方便的進行相關的測試工作，促進了財務集中管理、閑置資金的靈活應用，提高企業管理人員的資本平衡和資金調度能力，進行集中財務控制。

(2)學生活動時間長不等于學生的參與度高，關鍵要看學生活動中動腦和動手是不是相輔相成，是不是統一的整體．在思路5中，得到α2-α1=90° 后，教師提示“既然求角的正切值行不通，那么求余弦值會怎樣？大家試一試．”和教師提示“既然求角的正切值行不通，大家看看有沒有其他辦法？”兩種提示下，學生都要動手嘗試，但前者只是被動的活動，學生思維并沒有真正參與，“為什么求余弦”這個重要的“思維起點”被忽視了；后者則是腦與手聯動，如果學生自己意識到求余弦時，動手的活動就具有思維的含量了，如果多數學生意識不到，那么教學重心應放在引導學生發現“求余弦”上．總之，不要讓學生成為驗證教師想法的工具．

4.2 醫用紡織品

王禹蘇等人[39]量取濃度為1.0 mmol/L的硝酸銀溶液47 mL再加入預先配置好的20 g/L的金銀花提取液3 mL, 放入油浴鍋中于130℃下反應30 min, 得到納米銀溶液。將棉織物浸入納米銀溶液中（浴比1∶50）, 于50℃下浸漬整理1 h, 取出后在60℃下烘1 h。經過測定, 金銀花提取物還原制備的納米銀溶液整理后的棉織物對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌率分別為99.99%, 99.97%, 抗菌效果優異, 且該棉織物的抗菌性達到醫用抗菌標準。朱炯霖等人[40]檢測經金銀花提取物制備的納米銀溶液處理過的織物, 經過洗滌30次, 50次后, 抗菌率仍然在99%以上, 金銀花提取物制備的納米銀溶液處理后的棉織物可以獲得長期有效的抗菌性能。

4.3 護膚品

由于金銀花提取物自身具有一定的抑菌能力。崔鳳玲等人[41]發現采用0.5%的金銀花提取物與0.2%的PE9010（苯氧乙醇與乙基己基甘油的復配物）復配使用, 抑菌效果更加顯著。梁蕓等人[42]發現質量分數為0.5%的金銀花提取物、0.25%的金銀花提取物與0.25%的乙基己基甘油復配物在受試乳液化妝品中都表現出有效的抑菌效果, 證實了金銀花提取物的廣譜抑菌效能。

4.4 畜牧業

金銀花具有清熱消炎功效, 向飼料中加入金銀花提取物可以緩解高溫帶給奶牛的熱應激反應, 改善奶牛的生理指標。馬峰濤[43]發現向飼糧中添加28 g/d金銀花提取物可顯著降低熱應激奶牛血清肌酐含量、直腸溫度, 提高熱應激奶牛血清IgG含量。由于奶牛熱應激反應會引起氧化應激導致氧化和抗氧化系統之間的不平衡, 活性氧的產生超過了抗氧化防御系統的能力, 造成活性氧在體內的蓄積。通過向奶牛注射金銀花提取物, 使血清丙二醛的濃度下降, 表明補充金銀花提取物可提高熱應激奶牛的抗氧化性能。同時, 金銀花提取物中所含的高抗氧化多酚類物質去除了多余的自由基, 有利于維持TH1/Th2細胞平衡并改善熱應激奶牛的免疫功能。此外, 金銀花提取物通過抑制促炎因子、殺死致病菌, 可應用于預防圍產期奶牛乳房炎。

5 結語

金銀花化學成分復雜, 生物活性物質眾多, 具有抗氧化、抗炎、抗菌、降糖降脂及調節菌群等功能特性, 有待于深入探究其作用機制, 系統揭示內在保護作用原理。同時, 隨著提取方法的不斷發展, 對于金銀花及其提取物的研究和利用會越發深入。這將為金銀花的精深加工提供思路, 對金銀花資源高值化利用具有重要意義。