IFN-γ、IL-4及Tim-3與布魯菌病病情、治療效果的相關性研究

李俊娜 韓曉亮 謝東文 趙根成

河南省安陽市第五人民醫院綜合科 455000

布魯菌病是一種由布魯桿菌誘發的人和動物共患的傳染疾病，且該疾病在全世界范圍內皆存在廣泛分布，嚴重威脅人與動物的公共衛生及食品安全[1]。據相關研究表明，布魯菌能通過呼吸道、消化道以及皮膚黏膜入侵機體，可侵犯神經、淋巴結、肝脾及骨關節等器官，患者常表現為體溫升高、多汗、乏力、關節疼痛、肝脾以及淋巴結腫大等[2]。此外，布魯菌病有著慢性化的傾向，且具有極高的致殘率。相關研究發現，干擾素-γ(interferon-γ，IFN-γ)為布魯菌主要控制的關鍵因子，可通過與特異性受體結合，增強抵抗增生及病毒等能力；而白細胞介素-4(interleukin-4，IL-4)是免疫的應答重要因子；可溶性T細胞免疫球蛋白黏蛋白3(T cell immunoglobulin and mucin-domain containing molecules family-3，Tim-3)主要存在于免疫細胞的表面，參與調節T細胞介導的免疫應答，同一些變態反應以及自身免疫性病變的發生、發展存在一定的聯系[3-5]。但目前關于IFN-γ、IL-4及Tim-3與布魯菌病病情、治療效果的相關性研究甚少。鑒于此，本研究就IFN-γ、IL-4及Tim-3與布魯菌病病情、治療效果的相關性進行研究分析，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年4月—2020年4月本院收治的布魯菌病患者87例，并將其歸為研究組。其中男56例，女31例，年齡11～70歲，平均年齡(41.56±11.49)歲；急性46例，慢性41例。納入標準：(1)所有患者均符合《布魯桿菌病診斷標準》中關于布魯菌的診斷標準；(2)試管凝集試驗(SAT)滴度≥1∶100++；(3)所有患者家屬均知曉并同意本次研究，且簽署知情同意書。排除標準：(1)存在自身免疫性疾病、血液疾病者；(2)心、腦、肝、腎等臟器功能嚴重不全者；(3)存在精神疾患、意識障礙等依從性差的情況；(4)存在藥物過敏情況者或藥物不耐受者。另選取同期于我院體檢的健康志愿者75例，設為對照組，其中男43例，女32例，年齡22～78歲，平均年齡(43.29±12.41)歲。研究組與對照組一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，存在可比性。

1.2 方法 所有對象均在醫生協助下完善相關檢查，研究組在入院第2天、對照組在體檢當日抽取空腹靜脈血5ml，3 000r/min，離心10min，離心半徑10cm，分離血清，置-80℃保存。IFN-γ、IL-4采用微量樣本多指標流式蛋白定量技術測定(Cytometric Bead Array，CBA)，試劑盒由德國EUROIMMUN公司生產；Tim-3采用酶聯免疫吸附測定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)，儀器為美國貝克曼庫爾特全自動免疫分析儀，試劑盒由福建太陽生物技術公司生產；皆嚴格按照試劑盒說明書進行操作。并給予布魯菌患者利福平、多西環素、利福噴汀膠囊進行治療，共治療9周。

1.3 觀察指標 (1)觀察并對比研究組和對照組IFN-γ、IL-4及Tim-3表達水平。(2)觀察并對比急性和慢性布魯菌病患者IFN-γ、IL-4及Tim-3表達水平。急性：病程在6個月以內；慢性：病程超過6個月仍未痊愈。(3)觀察并對比不同治療效果的布魯菌病患者IFN-γ、IL-4及Tim-3表達水平：根據治療效果將其分為有效組和無效組，統計并對比兩組IFN-γ、IL-4及Tim-3表達水平。有效：經治療后發熱、多汗、肌肉和關節疼痛、乏力等臨床表現完全消失或者較前明顯改善，行動恢復，各項功能正常。無效：經治療后發熱、多汗、肌肉和關節疼痛、乏力等臨床表現未見明顯改善，甚至出現加重現象。(4)采用多元Logistic回歸分析影響布魯菌病患者治療效果的危險因素。

2 結果

2.1 研究組和對照組IFN-γ、IL-4及Tim-3表達水平比較 研究組IFN-γ水平低于對照組,IL-4及Tim-3水平高于對照組(P<0.05)。詳情見表1。

表1 研究組和對照組IFN-γ、IL-4及Tim-3表達水平比較

2.2 急性和慢性布魯菌病患者IFN-γ、IL-4及Tim-3表達水平比較 急性組IFN-γ水平低于慢性組,而IL-4及Tim-3水平高于慢性組(P<0.05)。詳情見表2。

表2 急性和慢性布魯菌患者IFN-γ、IL-4及Tim-3表達水平比較

2.3 有效組和無效組IFN-γ、IL-4及Tim-3表達水平比較 87例布魯菌病患者中，治療有效67例(77.01%)，治療無效20例(22.99%)。有效組IFN-γ水平高于無效組，IL-4及Tim-3水平低于無效組(P<0.05)，詳情見表3。

表3 有效組和無效組IFN-γ、IL-4及Tim-3表達水平比較

2.4 分析影響布魯菌病患者治療效果的危險因素 經Logistic回歸模型分析顯示，IFN-γ(異常降低)、IL-4(異常升高)、Tim-3(異常升高)是影響布魯菌病患者治療效果的獨立危險因素(P<0.05)。詳情見表4。

表4 影響布魯菌病患者治療效果的危險因素分析

3 討論

布魯菌是一類細胞內的寄生菌，易于春秋季發病，可于吞噬細胞內存活甚至繁殖[6-8]。布魯菌病感染患者于早期的急性期常伴有流感樣癥狀，此類癥狀往往是由細胞毒性免疫反應誘發，若不予以及時治療，可能會使得病情拖延至慢性期，從而造成無法治愈的情況[9-10]。故對于布魯菌病應予以及時有效的診斷與治療。此外，據相關研究表明，對于細胞內細菌的保護性免疫取決于細胞因子間的相互作用以及T細胞亞群，其中最主要的為細胞免疫[11]。亦據Pnioar IO等[12]研究表明，對于布魯菌的保護性獲得免疫關聯到巨噬細胞中的T細胞依賴性激活，在T細胞中可使機體避免遭受布魯氏菌感染的以CD4+與CD8+為主。可見，機體對布魯菌病的免疫可能包括激活淋巴及巨噬細胞以產生抗布魯菌活性的細胞因子。

IFN-γ是由Th1細胞分泌的細胞因子，具有調節免疫及抑制腫瘤細胞增殖作用，可通過強化機體適應性免疫及固有免疫，實現其抗腫瘤及抗病毒效應[13-14]。據相關研究指出，IFN-γ能促使Th0向Th1分化，從而抑制Th2分化；IL-4是由T細胞分泌的因子，在免疫應答過程中具有重要作用[15]。亦據相關研究指出，IL-4可促使Th0向Th2分化，從而抑制Th1。Th1/Th2細胞之間相互抑制、調節，協同維持機體的免疫穩態[16]。本研究數據顯示，與對照組比較，研究組IFN-γ水平更低，IL-4水平更高，與Soumya等[17]報道結果相符，表明在布魯菌患者中IL-4水平呈升高趨勢，而IFN-γ水平呈下降趨勢。進一步比較發現，急性組IFN-γ水平低于慢性組、IL-4水平高于慢性組，且有效組IFN-γ水平高于無效組、IL-4水平低于無效組。由此推測，在機體遭受到布魯氏菌感染的過程中，可能會存在Th1/Th2細胞的紊亂，形成Th2優勢的免疫應答，致使Th1細胞功能下調，從而引起細胞免疫遭到抑制，最終造成機體的持續感染。

Tim-3是第一個被發現的TIM家族的一員，其特定表達于輔助性T細胞上，是Th1型免疫應答的負性調節劑，其通過與其配體半乳凝素-9結合內能夠特異性的誘導Th1細胞凋亡，從而下調Th1免疫應答，降低機體的免疫水平，從而促進結核的發展[18-19]。本研究數據顯示，布魯菌病患者血清Tim-3表達水平明顯升高，與健康受檢者比較差異顯著，證實Tim-3可能與布魯菌病的發生發展有關，同時急性組Tim-3水平高于慢性組，且有效組Tim-3水平低于無效組，結果進一步證實高Tim-3確實參與了布魯菌病患者的病情發展，與既往研究報道結果相似[20]。由此推測，在機體遭受到布魯氏菌感染的過程中，Tim-3可能參與了Th1/Th2細胞的免疫紊亂，使得Th1細胞的免疫功能下調，致使Th2細胞處于優勢情況，從而抑制了細胞免疫，使得布魯菌出現免疫逃逸。為明確影響布魯菌病患者治療效果的危險因素，本研究通過Logistic回歸模型分析，結果顯示，IFN-γ(異常降低)、IL-4(異常升高)、Tim-3(異常升高)是影響布魯菌病患者治療效果的獨立危險因素。

綜上所述，布魯菌病患者IFN-γ呈低表達，IL-4及Tim-3呈高表達，其可能參與了布魯菌病病情發生、發展的過程，檢測上述因子水平有助于評估治療效果。