傣藥腎葉山螞蝗對雄性大鼠性行為及性激素的影響

楊麗萍 ， 馮德強 ， 王艷妮 ， 段小花

(云南中醫(yī)藥大學 云南省傣醫(yī)藥與彝醫(yī)藥重點實驗室 ， 云南 昆明 650500)

腎葉山螞蝗[Desmodiumrenifolium(L.) Schindl.]是云南省西雙版納州傣族人民常用的植物藥之一，其主要功能為清熱解毒、止咳化痰、通氣止痛、利水退黃，主治熱季感冒頭痛、咽喉腫痛、咳嗽喘息、體弱多病、性冷淡等[1-2]。云南傣族民間醫(yī)生長期運用腎葉山螞蝗泡酒治療腎虛證，并取得了很好的療效，但對于其在治療腎虛方面相關的藥效藥理研究尚未見報道。中醫(yī)理論認為腎為“先天之本”“生命之源”，中醫(yī)學對男子性功能障礙主要責之于腎、心、肝三臟，且主要在于腎臟，采用補腎壯陽的藥物治療性功能障礙，是中醫(yī)常用之法?，F代藥理研究證實，具有補腎壯陽功效的中藥可通過性激素、中樞神經系統(tǒng)等方面發(fā)揮其改善性功能的效應[3]。因此，本試驗通過研究腎葉山螞蝗對雄性大鼠性行為和性激素的影響，初步探討其補腎壯陽的藥效及作用機制，為其進一步的應用開發(fā)以及民間流傳的科學與否提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 SPF級SD大鼠，體重(200±20)g，購自成都達碩實驗動物有限公司，合格證號：SCXK(川)2013-24，飼養(yǎng)在明暗交替，室溫18～22 ℃，相對濕度40%～65%的環(huán)境中，自由飲水采食。

1.2 試驗儀器 旋轉蒸發(fā)儀，瑞士BUCHI公司產品；臺式高速冷凍離心機、全波長掃描式多功能酶標儀，均為美國THERMO FISHER公司產品。

1.3 藥材和試劑 龜鹿補腎片，購自廣東新寶制藥有限公司；腎葉山螞蝗由云南省高校民族醫(yī)藥現代研究重點實驗室提供；睪酮酶聯(lián)免疫試劑盒和雌二醇酶聯(lián)免疫試劑盒，均購自伊萊瑞特生物科技有限公司。

1.4 藥材提取 腎葉山螞蝗分別采用水提和醇提的方法得到相應的提取物。醇提：加8倍量95%乙醇進行連續(xù)回流提取，重復3次，每次 45 min，合并提取液后趁熱抽濾，濾液置旋轉蒸發(fā)儀上濃縮揮干乙醇，即得乙醇提取液，保存?zhèn)溆?。水提：?倍量的冷水浸泡藥材1～2 h，煮沸45 min，過濾；藥渣加5倍量水繼續(xù)煎煮35 min，過濾，再重復煎煮1次后合并3次濾液濃縮，保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5 雌性大鼠的準備 為消除雌性大鼠在進行交配試驗時動情期不同帶來的影響，進行雙側卵巢切除，并注射雌激素，具體方法為：雌性大鼠在10%水合氯醛[0.3 mL/(100 g·bw)]麻醉后，背部朝上固定于鼠板上，在大鼠最末肋骨下，腋中線和距脊柱外側約2 cm交叉處剪除長毛，切開皮膚和背肌，有乳白色發(fā)亮的脂肪團，其中包埋著卵巢。用小鑷子輕夾脂肪團，拉出切口外，分離脂肪，即見粉紅色卵巢，取一絲線將卵巢下輸卵管及脂肪一并結扎，剪下卵巢，將子宮角送回腹腔，然后摘取對側卵巢，術后3 d肌注青霉素抗感染，常規(guī)飼養(yǎng)1個月后進行交配試驗，試驗前48 h皮下注射苯甲酸雌二醇0.2 mg/只，4 h前皮下注射黃體酮0.4 mg/只。

1.6 給藥和分組 性成熟的雄性大鼠隨機分為空白組、龜鹿補腎片組[0.93 g生藥/(kg·bw)]、腎葉山螞蟥水提高劑量組[13 g生藥/(kg·bw)]、腎葉山螞蟥水提低劑量組[4.05 g生藥/(kg·bw)]、腎葉山螞蟥醇提組[13 g生藥/(kg·bw)]，共5個組。每組大鼠每天早晚各灌胃1次，連續(xù)28 d，灌胃容積均為1 mL/(100 g·bw)，每日飼料與水正常供給，每周按時稱量大鼠體重，保證其發(fā)育正常。

1.7 交配試驗 試驗于晚上7～11時進行，將雄性大鼠單獨放入籠中5 min，使其適應環(huán)境，然后每籠加入1只雌鼠，觀察記錄捕捉潛伏期(自雌鼠投入至雄鼠第1次捕捉雌鼠的時間)、20 min內雄鼠捕捉雌鼠的次數、交配潛伏期(自雌鼠投入至雄鼠第1次與雌鼠交配的時間)、20 min內交配次數。

1.8 性激素檢測 待測定行為學指標結束后，雄性大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，腹主動脈取血，3 000 r/min，離心15 min后取上清液，-20 ℃分裝保存，按相應試劑盒說明書測定血清睪酮、雌二醇含量。

1.9 統(tǒng)計學處理 試驗數據以平均值±標準差表示，采用SPSS軟件進行統(tǒng)計學分析。對樣本進行正態(tài)性檢驗和方差齊性檢驗，滿足條件者，多組間差異比較采用單因素方差分析，P<0.05表示差異有顯著性意義，P<0.01表示差異有非常顯著性意義。

2 結果

2.1 腎葉山螞蝗對大鼠性行為的影響 由表1可知，與空白組比較，陽性對照藥龜鹿補腎片能縮短雄性大鼠捕捉潛伏期(P<0.05)，增加捕捉次數(P<0.05)，縮短交配潛伏期(P<0.05)，明顯增加20 min內交配次數(P<0.01)；腎葉山螞蝗水提高劑量組和醇提組均能縮短雄性大鼠捕捉潛伏期(P<0.05)，增加捕捉次數(P<0.05)，能明顯縮短交配潛伏期(P<0.05)，增加20 min內交配次數(P<0.05)，水提低劑量組則與空白組大致相似，無顯著效果(P>0.05)。

表1 腎葉山螞蝗對大鼠性行為的影響Table 1 Effect of Desmodium renifolium (L.) Schindl. on sexual behavior in rats

2.2 腎葉山螞蝗對大鼠血清睪酮和雌二醇含量的影響 從表2可知，與空白組比較，陽性對照藥龜鹿補腎片可以明顯升高大鼠血清睪酮水平(P<0.01)，降低血清雌二醇的含量(P<0.05)。腎葉山螞蝗醇提組與水提高劑量組和陽性對照藥有類似的效果，且醇提組對睪酮和雌二醇的影響差異具有非常顯著性意義(P<0.01)，而水提低劑量組對二者無顯著影響(P>0.05)。

表2 傣藥腎葉山螞蝗對雄性大鼠血清睪酮和雌二醇含量的影響Table 2 Effect of Desmodium renifolium (L.) Schindl. on the serum estradiol and testosterone levels in rats

3 討論

腎葉山螞蝗[Desmodiumrenifolium(L.) Schindl.]是豆科山螞蝗屬的矮灌木，主產于云南、海南和臺灣等地。云南西雙版納的少數民族長期用腎葉山螞蝗泡酒服用，顯示出了良好的補腎壯陽，改善性功能的功效[4]。研究報道，腎葉山螞蝗中主要活性成分是以異戊基查爾酮為主的黃酮類化合物，顯示出豐富的藥理活性[5]，但目前對于性功能方面相關的藥理研究報道甚少，基于良好的民間用藥基礎，有必要對腎葉山螞蝗補腎壯陽的藥理作用進行深入研究。本試驗以雄性大鼠為研究對象，從性行為和性激素兩方面對腎葉山螞蝗的補腎壯陽功效進行初步研究，可以為民族藥廣泛運用于臨床提供部分試驗依據，也是研發(fā)補腎壯陽藥的有效途徑之一。

性功能是衡量雄性動物生殖強弱的主要指標[6]。雄性性活動受多種因素的影響，如神經機制、體液因素、情緒、年齡、疾病等[7]。雄性大鼠性行為的發(fā)生依賴于雌性大鼠的性誘感，交配試驗是觀察大鼠性能力的主要評價方法，試驗選擇了捕捉潛伏期、捕捉次數、交配潛伏期和交配次數作為觀察指標，可以反應雄性的性反應速度和性活動能力情況[8]。結果表明，連續(xù)灌胃28 d后，腎葉山螞蝗能顯著縮短雄性大鼠捕捉潛伏期和交配潛伏期，增加捕捉次數和交配次數。雄性的性行為高度依賴于激素，其中包括最主要的睪酮，缺乏睪酮既會干擾雄性性行為的欲望階段，也會干擾行為階段[9]。雌二醇是雌激素的成分之一，主要由芳香化酶催化雄激素產生。研究證實，通過芳香化酶抑制劑的干預降低雌二醇水平，可以治療男性勃起障礙，而外源性的雌二醇升高會導致性功能障礙[10]。試驗采用龜鹿補腎片作為陽性對照藥，臨床和試驗研究表明該藥具有補腎壯陽、增強性功能的作用[11-12]。本試驗結果顯示，腎葉山螞蝗可明顯增加正常雄性大鼠睪酮的水平，并明顯降低雌二醇的水平，和龜鹿補腎片具有類似的作用。

本試驗結果表明，腎葉山螞蝗對雄性大鼠具有提高性功能、改善性欲的藥理作用，且醇提物是其主要有效部位，這也解釋了當地少數民族泡酒服用的原因。試驗結果為腎葉山螞蝗在補腎壯陽方面的藥效學評價提供了理論依據，更深入的作用機制還需今后進一步研究。