重慶市合川區5歲及以下兒童感染性腹瀉監測結果研究*

劉莉莉，何臘梅△，劉柏林，段華安，彭雨崟，張 麗，王良鳳，秦先偉，秦曉紅

(重慶市合川區疾病預防控制中心：1.檢驗科；2.辦公室，重慶 401520)

腹瀉是目前全球重要的公共衛生問題[1-2]，是導致兒童營養不良、生長發育障礙的重要疾病。嬰幼兒由于自身免疫系統發育尚不完全，來自母體的免疫力維持時間較短，抵抗力較差，是腸道病毒感染的高危人群。每年全球約有17億例兒童腹瀉，約52.5萬例5歲以下兒童死于腹瀉病[3]。引起腹瀉因素很多，包括細菌、病毒、非感染性因素等，隨著人們生活水平提高和良好衛生習慣的養成，細菌性腹瀉得到了有效控制，而病毒感染則越來越多地成為5歲以下兒童腹瀉的重要原因[4]。

病毒性腹瀉是一組廣泛存在并高發的腸道傳染病，其具有傳播速度較快、涉及范圍廣、發病率高、不合理治療或不及時治療可導致死亡等特點[3]。2012年以來，諾如病毒已成為我國其他感染性腹瀉病暴發的優勢病原體，病毒性腹瀉尤以諾如病毒和輪狀病毒的檢出居多，札如病毒、星狀病毒和腸道腺病毒也有不同程度檢出[5]。2016—2019年合川區感染性腹瀉的報告數分別為1 384、1 841、2 176、1 795例，其中5歲及以下感染性腹瀉報告病例數分別為776、1 338、1 692、1 377例。病例報告主要集中在合陽城、南津街、釣魚城等3個地區。近年來，合川區中小學和托幼機構兒童群體性腹瀉暴發疫情也時有發生。因此，調查分析合川區5歲及以下兒童感染性腹瀉病的常見病原體及流行病學特征，采取有效的防控措施勢在必行。本研究主要針對本中心3個辦事處所在的3個兒童集中就診醫院，即合川區婦幼保健院、合川區人民醫院和合川區宏仁醫院進行調查。共采集316例0～5歲組兒童腹瀉糞便及肛拭子標本，并針對輪狀病毒、諾如病毒、軋如病毒、星狀病毒、腸道腺病毒、新型冠狀病毒等6種病毒進行檢測分析，現將結果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年6月1日至2021年5月31日到合川區宏仁醫院(合陽城街道)、合川區婦幼保健院(南津街街道)、合川區人民醫院(釣魚城街道)以腹瀉癥狀為主就診的0～5歲兒童作為研究對象，通過所在地區疾控中心辦事處調取患者相關資料。腹瀉病例為24 h內排便大于或等于3次，并伴有大便性狀的改變(呈稀便、水樣便、膿血便或黏液便等)。本研究主要針對病毒引起的腹瀉，要求采集的大多為水樣便。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑 核酸提取儀：中元全自動核酸提取儀EXM6000；實時熒光聚合酶鏈式反應(PCR)儀：ABI Quant Studio TM7Flex,伯樂CFX96 DeepWeel；核酸提取試劑：zybio核酸提取試劑盒(96人份/盒，重慶中元匯吉生物技術有限公司，試劑批號5107017，渝食藥監械生產備20180001號)。核酸檢測試劑：輪狀病毒A組、諾如病毒GⅠ/GⅡ型病毒重熒光PCR檢測試劑盒(48T/盒，試劑批號20061304/1、20111804/1)，札如病毒、星狀病毒、腺病毒三重熒光PCR檢測試劑盒(48T/盒，試劑批號20060511/1，20121903/1)均采用深圳生科原生物科技股份有限公司生產的核酸檢測試劑盒(粵食藥監械生產許20051134號)；新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒(50人份/盒，上海伯杰醫療科技有限公司，國械注準20203400065)。上述試劑均在有效期內使用。

1.2.2標本采集、保存和運送 兒科醫生采集0～5歲組腹瀉兒童大便5 g或5 mL直接放置于裝有3 mL病毒采樣液(非滅活型)的病毒采樣管中，確實不好留存糞便的，可采集患兒肛拭子，肛拭子上應有可見的糞便，采集后立即放入病毒采樣管中。完成患兒的流行病學調查并把標本凍存于-20 ℃或以下的冰箱里，盡快集中送到疾控中心開展檢測。

1.2.3檢測方法 采用實時熒光定量RT-PCR方法對輪狀病毒、諾如病毒Ⅰ型、諾如病毒Ⅱ型、札如病毒、星狀病毒、腸道腺病毒和新型冠狀病毒核酸進行檢測。反應體系、反應條件按照深圳生科原生物股份有限公司核酸檢測試劑盒說明書和上海伯杰醫療科技有限公司核酸檢測試劑盒說明書。輪狀病毒、諾如病毒、札如病毒、星狀病毒和腺病毒PCR擴增循環參數設置均為：50 ℃ 30 min，95 ℃ 3 min，再按95 ℃ 10 s，55 ℃ 60 s，循環45次，熒光檢測在55 ℃；新型冠狀病毒PCR擴增循環參數設置均為：50 ℃ 10 min，95 ℃ 5 min，再按95 ℃ 10 s，55 ℃ 40 s，循環45次,熒光檢測在55 ℃。反應體系均為25 μL。病毒熒光通道選擇FAM、VIC、ROX。

1.2.4判讀方法 按照深圳生科原生物股份有限公司核酸檢測試劑盒說明書和上海伯杰醫療科技有限公司核酸檢測試劑盒說明書中的結果判讀要求進行判讀。

1.3統計學處理 采用Excel2010和SPSS17.0統計軟件包進行數據整理和統計分析，計數資料以率或構成比表示，組間比較采用χ2檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1病毒核酸檢測基本情況 共檢測了316份0～5歲腹瀉兒童糞便及肛拭子標本，檢出了腸道腺病毒、諾如病毒Ⅱ型、輪狀病毒、札如病毒、星狀病毒共133例，總檢出率為42.09%，其中腸道腺病毒檢出率為8.54%(27/316)，諾如病毒Ⅱ型檢出率為8.23%(26/316)，輪狀病毒檢出率為13.92%(44/316)，札如病毒檢出率為5.70%(18/316)，星狀病毒檢出率為5.70%(18/316)，見表1。99份標本中只有1種病毒感染，16份標本有混合感染，單病原感染(單感)和混合感染(混感)數量比較，差異有統計學意義(χ2=73.23,P<0.05)。未檢出新型冠狀病毒。見表2。

表1 病毒核酸檢測基本情況

表2 單感和混感情況比較

2.2不同地區病毒核酸檢測情況 本研究主要針對合陽城街道、南津街街道、釣魚城街道以腹瀉癥狀為主就診的0～5歲兒童。病毒檢出率最高的是釣魚城街道(60.0%)，其次是南津街街道(44.4%)，最后是合陽城街道(26.2%)，不同地區檢出病原陽性率比較，差異有統計學意義(χ2=27.55,P<0.05)。見表3。

表3 不同地區病毒核酸檢測情況[n(%)]

2.3不同月份不同地區病毒核酸檢測情況 合川區不同月份0～5歲組兒童腹瀉患者病毒核酸陽性率不同。輪狀病毒與諾如病毒流行特點皆為冬春季多見，夏秋季少見。2021年1-5月輪狀病毒陽性率高于諾如病毒，2020年7-12月諾如病毒陽性率高于輪狀病毒。見表4。

表4 不同月份病毒核酸檢測情況(n)

2.4不同性別病毒核酸檢測情況 合川區316 例0～5歲兒童腹瀉病例中，男童190例，女童126例，男女性別比為1.51∶1。男童各種病毒感染率均略高于女童，但總感染率兩者差異均無統計學意義(P>0.05)。

表5 不同性別病毒核酸檢測情況[n(%)]

3 討 論

除霍亂、細菌性和阿米巴性痢疾、傷寒和副傷寒以外的感染性腹瀉是我國法定傳染病丙類傳染病之首[6]。本研究主要檢測合川區5歲及以下兒童感染性腹瀉的病原，其中輪狀病毒是優勢病原,這和其他地區研究結果一致[7]；其次是諾如病毒，腸道腺病毒、星狀病毒和札如病毒也有檢出。輪狀病毒是引起5歲及以下兒童腹瀉的常見病原體，可經糞-口、呼吸道和接觸等多種途徑傳播，主要通過糞口途徑傳播[8]。諾如病毒是導致腹瀉的第二大病因，常在冬季引起一個發病高峰。近年來，國內外研究發現，諾如病毒已成為引發感染性腹瀉的主要原因，消化道傳播是最重要的傳播途徑，也有接觸傳播和氣溶膠傳播[9]。諾如病毒疫情發生的場所主要集中在中小學校和托幼機構，疾病負擔嚴重[10],本研究整理患兒的流行病學資料分析，檢出的諾如病毒感染患兒多集中在同一托幼機構，且為關聯病例。因此，加強5歲及以下兒童良好衛生習慣教育，教導正確的洗手方法，監督學校、幼兒園、幼兒集中的娛樂場所做好飲食、飲用水、玩具、玩樂設施和衛生間衛生防治工作,能夠有效地防止病毒傳播。由于不同病原導致的腹瀉癥狀相似，雙重或者多重感染情況下無法區別具體是哪種病原引起的相應臨床癥狀，病毒間的相互組合是否會增加疾病的嚴重程度尚無定論。在今后的監測中，應重視混合感染的臨床及病原學監測[11]。

本研究中，3家醫療機構就診腹瀉兒童病原陽性檢出率比較，差異有統計學意義(χ2=27.55,P<0.05)，醫療機構對感染性腹瀉兒童的篩選和大便標本采集質量可能是造成統計學差異的原因。諾如病毒、輪狀病毒、札如病毒在不同醫療機構間陽性率比較差異均無統計學意義(P>0.05)，可能與諾如病毒傳播能力較強，目前仍無特效藥物和特別有效防控手段有關。

本研究中，輪狀病毒和諾如病毒引起的感染性腹瀉多發生在冬春季節，夏秋較少，具有明顯的季節性，這與有關研究報道結果一致[12-13]。主要是因為該病毒具有耐冷不耐熱的特性，冬春季節溫度較低，室內開窗通風較少，病毒存活時間較長，會污染餐具、飲用水、玩具等，容易造成兒童聚集的學校和托幼機構發生輪狀病毒或諾如病毒聚集性/暴發性疫情，引起社會層面的廣泛關注。病毒對所有人群普遍易感，不同性別檢出率比較差異無統計學意義(P>0.05)。

綜上所述，在0～5歲兒童病毒性腹瀉的防控工作中，應當針對不同季節和主要致病病原采取相應的防疫控制措施。加強兒童衛生習慣教育，落實學校晨午檢，對發現的首例病例應立刻做停課處理，及時控制好傳染源；注重對家長的健康教育和宣傳，要求家長主動配合病童停課管理和復課要求。疾控中心應加強對學校規范消毒指導，要求學校做好日常消毒、開窗通風。輪狀病毒疫苗能有效預防輪狀病毒引起的腹瀉，醫療機構和學校應加強宣傳推廣，提高0～5歲兒童輪狀病毒疫苗的接種覆蓋率。諾如病毒傳播能力很強，需要對重點人群開展腸道傳染病知識的宣傳教育，提高人群的防病意識及能力。疾控中心也應連續、系統、科學地開展相關病原學監測，掌握相關病原變化趨勢，做好疾病風險研判，采取科學合理的防控措施，有效降低0～5歲組兒童病毒性腹瀉的發病率。