毛細管氣相色譜法測定八寶五膽藥墨中冰片的含量

許紅葉，萬 慶，孫 松

(1 銅陵市食品藥品檢驗中心，安徽 銅陵 244000；2 合肥遠志醫藥科技開發有限公司，安徽 合肥 230088)

八寶五膽藥墨是由人工麝香、冰片、熊膽、人工牛黃等多味藥材制成，具有消炎解毒、活血止痛、涼血止血、消腫軟堅、防腐收斂等功效。用于吐血、咳血、鼻衄、便血、赤白痢下、癰疽瘡瘍、無名腫毒、頑癬、皮炎、濕疹等。該品種現收載于國家衛生部藥品標準中藥成方制劑第十四冊中，其質量標準的質控方法僅有鑒別，未對處方中冰片的含量進行測定。經文獻檢索，未見對八寶五膽藥墨的冰片的測定方法，為了更有效地控制本品質量保證藥品療效，本文在參考相關文獻[1-8]與實驗研究的基礎上建立了毛細管氣相色譜法測定八寶五膽藥墨中冰片主要成分龍腦的含量測定方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀 器

GC-2014C氣相色譜儀，日本島津儀器公司；HGH-300E氫氣發生器、HGA-2L空氣發生器，北京匯龍公司；SK1200H超聲波清洗器，上海科導超聲儀器有限公司；KQ-100E超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；AB135-S電子天平(d=0.01 mg)，梅特勒-托利多公司；BT25-S電子天平(d=0.01 mg)，賽多利斯科學儀器(北京)有限公司。

1.2 試 劑

對照品為龍腦(批號為110881-201709)，中國食品藥品檢定研究院；八寶五膽藥墨由某廠家提供，批號為A201101、A201102、A201103；水楊酸甲酯、無水乙醇為分析純；水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性

以50%苯基-甲基聚硅氧烷為涂布液的毛細管柱(DM-17毛細管柱，柱長為30 m，柱內徑為0.32 mm，膜厚度為0.25 μm)；檢測器：氫火焰離子化檢測器，氣化室溫度：210 ℃；檢測器溫度：250 ℃；柱溫：初溫 100 ℃(保持3 min)，以5 ℃/min升溫至130 ℃(保持2 min)，再以50 ℃/min升溫至220 ℃(保持21 min)；載氣：氮氣，流速：1 mL/min，進樣量：1 μL；分流比5:1。理論板數按水楊酸甲酯峰計算，應不低于2000；龍腦與水楊酸甲酯峰的分離度應符合要求。

2.2 溶液的制備

2.2.1 校正因子測定

取水楊酸甲酯適量，精密稱定，加無水乙醇制成每1 mL含67.83 μg的溶液，作為內標溶液。另取龍腦對照品適量，精密稱定，加入內標溶液制成每1 mL含43.03 μg的溶液，搖勻，吸取1 μL注入氣相色譜儀，計算校正因子。

2.2.2 供試品溶液的制備

取八寶五膽藥墨10錠，研細，稱取約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入內標溶液40 mL，混勻，精密稱定重量，超聲處理10 min，放冷，再稱定重量，用無水乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，吸取續濾液1 μL，注入氣相色譜儀，測定，即得。

2.2.3 陰性對照溶液制備

按照處方組成，取除冰片外的其余藥材，按制備工藝要求，制備缺冰片的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備缺冰片的陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗

分別精密吸取上述龍腦對照品溶液、內標溶液、供試品溶液和龍腦陰性對照溶液各1 μL，按上述“3.1”項下色譜條件進樣測定，注入氣相色譜分析，記錄色譜圖。結果表明，龍腦和水楊酸甲酯峰的理論塔板數為53288和78309，分離度13.5，分離度均大于2。缺冰片的陰性樣品溶液色譜圖中，在與龍腦色譜峰相應位置上無干擾，見圖1所示。

圖1 專屬性試驗(A-D)

2.4 系統適用性試驗

精密吸取龍腦對照品溶液1 μL注入氣相色譜儀，連續進樣6次，其校正因子的相對標準偏差為0.47%(應≤2.0%)，符合藥典規定。結果見表1所示。

表1 系統適用性試驗

結果表明：本法測定冰片含量方法系統適用性良好。

2.5 線性關系考察

精密稱取龍腦對照品8.91 mg，置10 mL量瓶中，用內標液溶解并稀釋置刻度，搖勻，精密移取上述溶液5 mL，置50 mL量瓶中，用內標液溶解并稀釋置刻度，搖勻，作為母液。精密移取母液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0 mL分別置7個10 mL容量瓶中，用內標液稀釋至刻度，搖勻。分別取1 μL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，由龍腦峰面積和內標峰面積的比值(A)對溶液濃度(C)作線性回歸，得回歸方程，結果見表2所示。

表2 線性考察

結果表明：在17.250～68.999 μg/mL濃度間，本法的線性良好，回歸方程為y=0.0222x+0.0098(R=1.0，n=7)。

2.6 精密度試驗

取批號為A201101樣品6份，照“3.1”項方法測定，計算相對標準偏差(RSD)。結果見表3所示。

表3 中間精密度考察結果

結果表明：RSD%=0.98(n=6)小于2，表明本法中間精密度良好。

2.7 重復性試驗

取批號為A201101樣品6份，照“3.1”項方法測定，計算相對標準偏差(RSD)，結果見表4所示。

表4 重復性試驗

結果表明：RSD%=0.70(n=6)小于2，表明本法重復性良好。

2.8 穩定性試驗

取對照品和批號A201101樣品適量，照“3.1”項下方法處理，按氣相色譜法(中國藥典2020年版通則0521)用火焰離子化檢測器檢測，于配制后立即注入氣相色譜儀，并分別于0、2、4、8、12、24 h注樣分析，計算相對標準偏差(RSD)，結果見表5所示。

表5 穩定性試驗

結果表明：校正因子RSD%=0.73(n=6)小于2，樣品含量RSD%=1.00(n=6)小于2，在24 h以對照品溶液和內被測樣品溶液基本穩定。

2.9 加樣回收率試驗

精密移取龍腦對照品適量，加入到已知含量(9.26 mg/g)(批號：A201101)的6份樣品中，按“3.1”項下的方法測定，計算回收率[回收率=(測得量-樣品含量)/加入對照品量×100%]，數據見表6所示。

表6 加樣回收率試驗

結果表明：本法測定冰片的平均回收率在95%～102%之間，且RSD小于2.0，加樣回收率良好。

2.10 樣品含量測定

取A201101、A201102、A201103三批樣品，照“3.1”項冰片含量測定方法測定，計算含量。結果見表7所示。

表7 含量測定

3 結 論

冰片為八寶五膽藥墨中主要藥味之一，具有開竅醒神，清熱止痛的作用。龍腦作為冰片中的主要有效成分選擇測定龍腦的含量可更好地控制八寶五膽藥墨的藥品質量，保證藥品的質量及有效性。

鑒于毛細管柱比填充柱具有更高的柱效和色譜分辨率，以及龍腦分子結構中含有一定的極性基團，在參考有關文獻的基礎上，我們選用了以50%苯基-甲基聚硅氧烷為涂布液的毛細管柱作為實驗用色譜柱，通過實驗考察發現樣品中龍腦成分在50%苯基-甲基聚硅氧烷為涂布液的毛細管柱色譜柱條件擁有良好的分離效果，最終決定選用以50%苯基-甲基聚硅氧烷為涂布液的DM-17毛細管柱作為實驗用色譜柱。

通過比較不同的提取溶劑(無水乙醇、乙醚、乙酸乙酯)發現無水乙醇溶劑提取的結果較其他溶劑充分，從溶劑的提取效率和環境安全考慮，選擇無水乙醇作為提取溶劑。考察不同的提取時間(5 min、10 min、20 min)和不同的提取方式(超聲、浸漬)，結果表明超聲較浸漬提取充分，提取10 min已提取充分，故最終選擇為用無水乙醇超聲10 min作為樣品的提取方式。