研究電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)在乙型肝炎病毒臨床檢驗(yàn)中的應(yīng)用效果

梅紅杰 王士賢

（南樂縣計(jì)劃生育服務(wù)站 河南 457400）

乙型病毒性肝炎主要是指受到乙型肝炎病毒侵襲，導(dǎo)致肝臟出現(xiàn)器官損傷和病變等情況的慢性疾病，會(huì)對(duì)患者身心健康造成嚴(yán)重威脅，有發(fā)病緩慢、傳染風(fēng)險(xiǎn)高、傳播途徑多特征表現(xiàn)[1]。乙肝若未得到及時(shí)有效治療，可能導(dǎo)致患者出現(xiàn)肝硬化、肝衰竭、肝癌等情況，嚴(yán)重甚至?xí)＜盎颊呱踩；颊叽蠖喟l(fā)病后癥狀表現(xiàn)不明顯，極易出現(xiàn)漏診、誤診等情況，因此積極采取有效措施及時(shí)確診病變尤為必要。臨床針對(duì)乙肝的診斷，主要通過乙型肝炎病毒、血清學(xué)檢查結(jié)果為依據(jù)[2]。酶聯(lián)免疫吸附法憑借低廉的成本和簡便的操作，在實(shí)際診斷期間已成為應(yīng)用廣泛的檢驗(yàn)措施，是乙肝血清學(xué)標(biāo)志物主要的檢測方式。隨著生物醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，使得電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)因其較寬的線性范圍、高敏感性、良好的精密度、迅速檢測速度等優(yōu)勢(shì)，逐漸被應(yīng)用于臨床診斷治療中。由于兩種檢驗(yàn)措施存在不同的原理和檢測特性，會(huì)造成乙肝血清標(biāo)志物結(jié)果造成不同程度的影響[3-4]。上述診斷方式的具體檢查結(jié)果尚無明確的診斷價(jià)值，基于以上背景，本次研究選入66例乙型肝炎患者進(jìn)行分析，結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 基礎(chǔ)資料

此次研究開展起止時(shí)間在2020年6月到2021年10月，隨機(jī)抽選該時(shí)段我院診治的66例乙型肝炎患者作為觀察對(duì)象，以計(jì)算機(jī)抽簽法作為分組方法，將其分成兩組。研討組（33例）男性有19例，女性有14例；年齡24-56歲，均值（33.65±3.12）歲。參考組（33例）男性有18例，女性有15例；年齡22-57歲，均值（33.58±3.27）歲。組間一般資料對(duì)比顯示P＞0.05。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①接受臨床檢查確認(rèn)為乙型肝炎者；②門診病歷；③在知情同意書上簽名。排除標(biāo)準(zhǔn)：①精神性疾病或認(rèn)知障礙，神經(jīng)系統(tǒng)疾病者；②重要臟器器官嚴(yán)重功能不全者；③合并惡性腫瘤者。

1.2 方法

采集患者清晨空腹靜脈血10毫升，經(jīng)過3000r/min的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心，將其放置15分鐘，儲(chǔ)存在零下20℃冰箱中等待檢查，根據(jù)先后順序完成酶聯(lián)免疫吸附法、電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)檢驗(yàn)，由技術(shù)水平較高的檢驗(yàn)人員，應(yīng)選取全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀以電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)進(jìn)行檢測，酶聯(lián)免疫吸附法則將采集血液樣品加入到反應(yīng)板中，稀釋液還原后進(jìn)行各項(xiàng)操作，均嚴(yán)格按照說明書完成。

參考組接受酶聯(lián)免疫吸附法檢測：選擇對(duì)應(yīng)試劑完成各項(xiàng)檢測操作，洗板機(jī)為伯樂1575型，梅標(biāo)儀為伯樂iMark型，應(yīng)用雙抗體夾心法對(duì)HBsAg指標(biāo)進(jìn)行檢驗(yàn)，在室溫下對(duì)上述試劑盒平衡30分鐘。隨后將待檢血清加入到微孔反應(yīng)條，封片后將其置入水浴（溫度為37℃）中，孵育60分鐘后，把血清標(biāo)本拿出，加入酶結(jié)合物封板，隨后將制成的標(biāo)本置入水浴（溫度為37℃）中，孵育30分鐘，重復(fù)洗滌5次，加入檢測劑，孵育30分鐘，隨后把終止液加入其中，對(duì)數(shù)據(jù)應(yīng)用酶標(biāo)儀進(jìn)行讀取，結(jié)果顯示OD值處于臨界值以上者，判定為陽性，對(duì)HBsAb用雙抗體夾心法檢測，對(duì)于OD值在臨界值及以上者即為陽性,HBeAb采用中和競爭法進(jìn)行檢測，對(duì)于OD值在臨界值及以上者即為陰性,通過競爭抑制法檢驗(yàn)HBcAb，對(duì)于OD值在臨界值及以上者即為陰性。嚴(yán)格根據(jù)說明書完成上述各項(xiàng)步驟操作。

研討組接受電化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)檢測：選取化學(xué)全自動(dòng)發(fā)光免疫分析儀實(shí)施檢查，儀器型號(hào)為i3000型，配合使用配套的試劑。對(duì)HBsAg應(yīng)用雙抗體夾心法原理完成檢驗(yàn)，在檢驗(yàn)前首先混合免疫微粒與樣本，隨后將其充分洗滌，把抗乙肝病毒抗體加入到溶液中，形成復(fù)合物，并于樣本中加入溶液，讓物質(zhì)間發(fā)生化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，測定其發(fā)光值，測量結(jié)果與HBsAg含量成正比，HBeAg應(yīng)用雙抗體夾心法，HBsAb應(yīng)用雙抗原夾心法，HBcAb應(yīng)用間接法，HBeAb應(yīng)用中和競爭法。

完成檢查操作后，對(duì)其進(jìn)行重復(fù)性檢驗(yàn)，把不同濃度的乙肝表面抗原（HBsAg）陽性血清22份進(jìn)行冷凍保存，定期完成對(duì)保存樣本的檢查，將其分成各包含11份的兩組，通過批間重復(fù)性計(jì)算和批內(nèi)重復(fù)性計(jì)算的方式分別計(jì)算。

1.3 觀察指標(biāo)

比較兩組檢測準(zhǔn)確性、乙肝5項(xiàng)檢測陽性率及不同濃度乙肝表面抗原檢測重復(fù)率。對(duì)兩組檢驗(yàn)的準(zhǔn)確性進(jìn)行評(píng)價(jià)和計(jì)算。觀察兩組患者乙型肝炎病毒5項(xiàng)檢測陽性率結(jié)果，各項(xiàng)目標(biāo)陽性限值參考標(biāo)準(zhǔn)：乙肝核心抗體（HBcAb）上限值為0.6IU/mL，乙肝e抗體（HBeAb）上限值為0.2 IU/mL，乙肝e抗原（HBeAg）上限值為0.1IU/mL，乙肝表面抗體（HBsAb）上限值為10.0mIU/mL，乙肝表面抗原（HBsAg）上限值為0.05IU/mL。觀察對(duì)比兩組患者在不同濃度（低、中、高濃度）HBsAg的檢測重復(fù)率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

數(shù)據(jù)的檢驗(yàn)應(yīng)用工具為SPSS27.0，計(jì)數(shù)資料的比較經(jīng)卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料的比較經(jīng)t檢驗(yàn)，表述方法分別為（n %）和（±s），有統(tǒng)計(jì)分析意義則：P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)比兩組檢驗(yàn)準(zhǔn)確性

研討組檢出率較參考組明顯更高，P＜0.05。如表1。

表1 兩組檢驗(yàn)準(zhǔn)確性的比較（n %）

2.2 兩組檢驗(yàn)陽性率對(duì)比

研討組HBeAb、HBeAg、HBsAg檢驗(yàn)陽性率均較參考組明顯更高，P＜0.05。如表2。

表2 比較兩組檢驗(yàn)的陽性率（n %）

2.3 兩組HBsAg檢驗(yàn)重復(fù)率對(duì)比

研討組對(duì)低、中濃度HBsAg檢驗(yàn)的批內(nèi)重復(fù)率和批間重復(fù)率均較參考組明顯更高，P＜0.05。如表3。

表3 比較兩組HBsAg檢驗(yàn)重復(fù)率（±s，%）

表3 比較兩組HBsAg檢驗(yàn)重復(fù)率（±s，%）

組名 n 高濃度 中濃度 低濃度批內(nèi) 批間 批內(nèi) 批間 批內(nèi) 批間研討組 33 2.54±0.81 8.86±1.15 10.53±0.41 13.85±0.13 17.92±1.27 11.35±0.42參考組 33 2.23±0.83 8.35±1.26 2.65±0.32 4.27±0.16 2.95±0.31 8.36±0.54 t- 1.535 1.717 87.036 266.948 65.782 25.107 P- 0.129 0.090 0.000 0.000 0.000 0.000

3 討論

乙型肝炎病毒是感染率相對(duì)較高的病毒類型，患者大多會(huì)出現(xiàn)不同程度的血液功能性障礙情況。乙型肝炎病毒感染患者易出現(xiàn)慢性肝炎或急性肝炎等情況，若未進(jìn)行有效及時(shí)的治療，可能進(jìn)展成為肝衰竭，甚至肝癌等情況，嚴(yán)重危及患者生命安全[5]。現(xiàn)階段我國乙型肝炎病毒感染患者超過7000萬，其中約有1/13的患者攜帶乙型肝炎病毒，因此盡早明確乙型肝炎病毒感染十分必要，能有效控制其引起肝炎。

臨床大多通過血清學(xué)標(biāo)志物方式診斷乙型肝炎病毒感染，臨床常用的兩種技術(shù)主要包括酶聯(lián)免疫吸附法和化學(xué)免疫分析法。化學(xué)免疫分析法主要是結(jié)合免疫反應(yīng)和發(fā)光反應(yīng)，檢測衡量抗原抗體的免疫分析技術(shù)，在實(shí)際檢驗(yàn)過程中，發(fā)光體系存在較大差異，主要可以將其分成直接標(biāo)記發(fā)光物質(zhì)免疫分析、電化學(xué)發(fā)光免疫分析及酶催化化學(xué)發(fā)光免疫分析三種[6-7]。其中電化學(xué)發(fā)光免疫分析屬于最為先進(jìn)的操作技術(shù)，在實(shí)際應(yīng)用該種技術(shù)檢驗(yàn)的過程中，有著用量少、操作簡便、檢測準(zhǔn)確性較高、無毒害性等特點(diǎn)，在臨床中應(yīng)用更加廣泛。酶聯(lián)免疫吸附法是HBsAg傳統(tǒng)的篩查方式，具有較易自動(dòng)化、檢測方式技術(shù)可靠等特點(diǎn)，但由于該種檢測技術(shù)應(yīng)用的主要是間接法進(jìn)行測定，較難進(jìn)行定量分析。同時(shí)由于操作過程中極易受到洗板、孵育時(shí)間等較多的因素影響，這使得檢驗(yàn)結(jié)果也可能存在誤差情況，較難對(duì)乙肝病毒感染進(jìn)行動(dòng)態(tài)化的觀察，同時(shí)應(yīng)用各種檢測技術(shù)，由于微孔板間距相對(duì)較近，操作時(shí)間過長，極易受到不同因素影響而導(dǎo)致出現(xiàn)污染情況，進(jìn)而對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果造成一定影響[8]。且在檢驗(yàn)血清高濃的樣本過程中，極易出現(xiàn)假陰性情況，檢測準(zhǔn)確率相對(duì)不高。電化學(xué)免疫發(fā)光法是現(xiàn)階段最為先進(jìn)科學(xué)的自動(dòng)化免疫標(biāo)記測定系統(tǒng)，結(jié)合納米微粒子技術(shù)、力生物素親和素系統(tǒng)以及電子發(fā)光技術(shù)等，屬于一種應(yīng)用廣泛且效果顯著的檢驗(yàn)方法，能充分顯示出化學(xué)發(fā)光測定技術(shù)的應(yīng)用效果[9]。

本組結(jié)果顯示，研討組檢出率較參考組明顯更高，P＜0.05；研討組HBeAb、HBeAg、HBsAg檢驗(yàn)陽性率均較參考組明顯更高，P＜0.05。說明電化學(xué)免疫發(fā)光法能通過對(duì)光電信號(hào)的判斷迅速作出反應(yīng)，標(biāo)記物來源豐富，能較好的識(shí)別逃逸菌株，減少由于人為因素而造成的檢驗(yàn)干擾情況，因此具有更高的檢驗(yàn)準(zhǔn)確性。同時(shí)本組結(jié)果顯示，研討組對(duì)低、中濃度HBsAg檢驗(yàn)的批內(nèi)重復(fù)率和批間重復(fù)率均較參考組明顯更高，P＜0.05。由于電化學(xué)免疫發(fā)光法的載體主要是順應(yīng)性微粒，有自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化檢驗(yàn)優(yōu)勢(shì)，在實(shí)際檢驗(yàn)過程中能控制電磁鐵，降低人工操作因素造成的檢驗(yàn)誤差，進(jìn)一步促進(jìn)檢驗(yàn)準(zhǔn)確性的不斷提升，同時(shí)該檢測系統(tǒng)無需借助外部光源，可直接發(fā)光，能顯著提高系統(tǒng)穩(wěn)定性，保證了檢驗(yàn)的精準(zhǔn)度[10]。

綜上所述，在乙型肝炎病毒檢驗(yàn)期間采取電化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)有著較高的線性范圍，與測定物呈線性關(guān)系，能顯著提高檢測的靈敏度和特異度。