藥用鹵化丁基橡膠塞中2-巰基苯并噻唑的檢測

賈菲菲，程佳美，趙霞，楊會英，肖新月

(中國食品藥品檢定研究院，北京 100050)

藥用鹵化丁基橡膠塞是由生膠經配合、混煉、預成型、硫化、沖切、清洗硅化、包裝等步驟制備而成[1]，其中硫化是非常重要的一步。在制備橡膠塞時，需要在生膠中加入各種硫化劑、硫化活性劑和硫化促進劑。2-巰基苯并噻唑作為通用型硫化促進劑，合成研究報道很多，廣泛應用于各種橡膠的制備中，硫化狀態比較平穩，硫化性能良好。對于天然橡膠和通常以硫黃硫化的合成膠具有硫化促進作用，可以使橡膠制品具有很高的拉伸強度和硬度。

2-巰基苯并噻唑在橡膠中易分散，但具有一定的毒性。2-巰基苯并噻唑可能會刺激皮膚和黏膜，能引起皮炎及難以治療的皮膚潰瘍，可致敏而且在2A類致癌物清單中。在與藥品的長期接觸中，藥用鹵化丁基橡膠塞中的添加劑有可能會遷移至藥品中，對藥品的質量、安全性和有效性產生影響。根據2018年4月發布的《化學藥品與彈性體密封件相容性研究技術指導原則(試行)》[11]，2-巰基苯并噻唑被列為慎用添加劑，需要高度重視其遷移至藥品中的可能性。因此，有必要對2-巰基苯并噻唑進行考察及控制，以保障其殘留量安全。本研究采用超聲萃取及高效液相色譜法，建立了藥用鹵化丁基橡膠塞中2-巰基苯并噻唑含量的測定方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Waters 2695液相色譜儀及PDA檢測器(美國沃特世公司)；電子天平(美國梅特勒-托利多集團)；MARS5微波消解儀(CEM)。

1.2 試藥 2-巰基苯并噻唑(中國食品藥品檢定研究院,純度：99.1%，195066-202001)；乙腈(Fisher，203096)；丙酮(Fisher，172014)；去離子水(Millipore)。

試驗樣品共2批，1批注射液用氯化丁基橡膠塞，1批注射液用溴化丁基橡膠塞，均由廠家A提供。回收率試驗采用注射液用氯化丁基橡膠塞的樣品。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：ZORBAX SB-C8(4.6 mm×250 mm，5 μm)；檢測器：紫外檢測器，檢測波長：320 nm；流動相：A液為1%乙腈水溶液，B液為乙腈，洗脫梯度見下表；流速：1.0 mL·min-1；柱溫：25 ℃；進樣量：10 μL。

表1 液相色譜洗脫梯度

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取2-巰基苯并噻唑約10 mg，置于10 mL容量瓶，加丙酮溶解并定容，即得2-巰基苯并噻唑對照品溶液。精密量取上述2-巰基苯并噻唑對照品溶液，依次稀釋制成濃度為1、5、10、30、50、80、100 μg·mL-1的系列2-巰基苯并噻唑對照品溶液。

2.2.2 樣品溶液制備 取剪碎后的膠塞樣品約1.0 g，精密稱定，置萃取罐中，共2份，每份加入10 mL丙酮，蓋好瓶塞，在60 ℃條件下微波提取30 min后取出，經0.45 μm的濾膜過濾后收集于25 mL容量瓶中，取出樣品放回萃取罐中按上述過程加入15 mL丙酮再提取一次和過濾。合并濾液并定容至25 mL，即得樣品溶液。

2.3 方法學驗證

2.3.1 線性關系考察 取“2.2”項下的系列對照品溶液，依次注入液相色譜儀，按照“2.1”項下的色譜條件檢測，記錄色譜圖。以濃度及峰面積繪制標準曲線，計算相關系數。試驗結果見表2，相關系數良好，表明2-巰基苯并噻唑在1.02～102.26 μg·mL-1范圍內線性良好。2-巰基苯并噻唑的典型色譜圖如圖1所示。

表2 2-巰基苯并噻唑線性試驗結果

圖1 2-巰基苯并噻唑對照品溶液色譜圖

2.3.2 檢出限和定量限 吸取“2.2”項下濃度約1 μg·mL-1的對照品溶液，逐步稀釋注入液相色譜儀，按照“2.1”項下的色譜條件檢測，信號與噪音之比為3時為檢出限，信號與噪音之比為10時為定量限。經試驗，2-巰基苯并噻唑的檢出限和定量限分別為0.03 μg·mL-1和0.10 μg·mL-1。

2.3.3 精密度 分別吸取“2.2”項下制備的濃度約為10、30、50 μg·mL-1對照品溶液10 μL，連續注入液相色譜儀6次，按照“2.1”項下的色譜條件檢測，計算峰面積的RSD，結果見表3。經計算，峰面積RSD小于3.0%，表明方法精密度良好。

表3 2-巰基苯并噻唑精密度試驗結果

2.3.4 穩定性 分別吸取“2.2”項下制備的濃度約為10、30、50 μg·mL-1對照品溶液10 μL，于放置0及24 h后再注入液相色譜儀，按照“2.1”項下的色譜條件檢測，計算峰面積的RSD，結果見表4。經計算，峰面積RSD小于3.0%，表明對照品溶液放置24 h穩定性良好。

表4 2-巰基苯并噻唑穩定性試驗結果

2.3.5 回收率試驗 精密稱取2-巰基苯并噻唑約10 mg，置于10 mL容量瓶，加丙酮溶解并定容，即得2-巰基苯并噻唑提取回收對照品溶液。

取剪碎后的注射液用氯化丁基橡膠塞約1.0 g，精密稱定，置萃取罐中，共9份，每3份中分別加入0.20、0.25、0.30 mL上述2-巰基苯并噻唑提取回收對照品溶液，然后加丙酮至10 mL，蓋好瓶塞，在60 ℃條件下微波提取30 min后取出，經0.45 μm的濾膜過濾后收集于25 mL容量瓶中，取出樣品放回萃取罐中按上述過程加入15 mL丙酮再提取1次和過濾。合并濾液并定容至25 mL，即得回收率試驗樣品溶液。

通過外標法計算得注射液用氯化丁基橡膠塞中2-巰基苯并噻唑的回收率在97.8%～108.9%之間，表明方法準確度良好，測定結果見表5。

表5 氯化丁基橡膠塞中2-巰基苯并噻唑提取回收率試驗結果

2.4 樣品測定 取注射液用氯化丁基橡膠塞和注射液用溴化丁基橡膠塞各2份，按“2.2”項下制備樣品溶液，按“2.1”項下色譜條件進行試驗。經檢測，注射液用氯化丁基橡膠塞和注射液用溴化丁基橡膠塞中均未檢出2-巰基苯并噻唑。

3 討論

2-巰基苯并噻唑為基因毒性雜質，具有比一般雜質更大的危害性，可能會間接或直接損傷細胞DNA，誘導細胞產生基因突變，導致染色體重排或斷裂，從而產生致突變或致癌的風險[12]。根據《化學藥品與彈性體密封件相容性研究技術指導原則(試行)》，2-巰基苯并噻唑被列為慎用添加劑，應開發高靈敏度的檢測方法對密封件中可能殘留的2-巰基苯并噻唑進行檢測。本研究所考察的2種藥用鹵化丁基橡膠塞中均未檢測到2-巰基苯并噻唑。

在后續的相容性研究中，對鹵化丁基膠塞中的2-巰基苯并噻唑進行定性定量分析后，還應進一步建立藥品中該添加劑的檢測方法及其含量的測定。尤其是在穩定性試驗中，隨著藥品放置時間的延長，應關注藥品中2-巰基苯并噻唑的含量變化，判定是否會對藥品的安全性和有效性帶來影響。本研究也將在后續工作中繼續對藥用鹵化丁基橡膠塞所保護的藥品中的2-巰基苯并噻唑進行檢測方法的建立研究。

本研究建立了一種高效液相色譜法測定藥用鹵化丁基橡膠塞中的2-巰基苯并噻唑的分析測試方法。該方法簡便快速，選用丙酮作為萃取劑，通過兩次微波萃取后可以達到很好的提取效果。該方法檢測限低，精密度高，加標回收率好。在1.02～102.26 μg·mL-1的濃度范圍內線性良好，相關系數r=0.999 9，檢出限為0.03 μg·mL-1，精密度、穩定性RSD均小于3%，樣品加標回收率為97.8%～108.9%，證明通過此方法可獲得準確、可靠的2-巰基苯并噻唑測試結果。