唑啉草酯原藥含量測定方法研究

段文勝，劉益紅

(瀘州東方農化有限公司，四川 瀘州 646300)

唑啉草酯是先正達成功開發的選擇性除草劑，主要用于牙后防除小麥和大麥田一年生禾本科雜草，其活性高，起效快，對作物安全，對環境友好，自2006年上市以來，市場已遍布全球多個國家，逐漸成為除草劑家族的大品種[1]。有關唑啉草酯含量測定方法有液相色譜法[2-3]，有資料顯示唑啉草酯分解受pH值影響較大[4]，針對檢測過程中試樣穩定性問題未見有文獻報道。本文采用高效液相色譜法將唑啉草酯及其中雜質分離，并考察了影響檢測試樣穩定性的因素，采用外標法準確測定唑啉草酯的含量。該方法分離效果理想，重復性好，準確度高，結果滿意。

1 試驗部分

1.1 儀器及試劑 LC—20ADVP高效液相色譜儀；SPD—M20A二極管陣列檢測器；LabSolution色譜數據工作站。唑啉草酯標準品99.0%；甲醇 色譜純；乙腈 色譜純；磷酸 優級純；超純水。

1.2 色譜條件 色譜柱：SinoChrom ODS-BP5μ 250mm×4.6mmid；流動相：甲醇/水(75/25) (每500mL流動相中含0.25g磷酸)；流速：1.0mL/min；檢測波長：UV257nm；柱溫：40℃；進樣量：5μL。

1.3 試驗方法

1.3.1 唑啉草酯標準溶液配制 準確稱取唑啉草酯標準品約20mg(精確至0.01mg)于50mL容量瓶中，加乙腈/水(體積比5/5，含0.1%磷酸，下同)溶解，并稀釋至刻度，搖勻，備用。

1.3.2 樣品溶液的配制 準確稱取唑啉草酯原藥樣品約20mg(精確至0.01mg)于50mL容量瓶中，加乙腈/水溶解，稀釋至刻度，搖勻。

1.3.3 樣品的測定 在選定的色譜條件下，分別吸取標準(樣品)溶液5μL，進樣，重復操作，保證其相對標準偏差<0.5%，記錄唑啉草酯的峰面積，并取其平均值。樣品中唑啉草酯的質量分數X按下式計算。

式中：

A1—樣品中唑啉草酯峰面積平均值；

A2—標樣中唑啉草酯峰面積平均值；

m1—稱取樣品的質量，mg；

m2—稱取標樣的質量，mg；

P—唑啉草酯對照品的質量分數，%。

2 結果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 色譜柱的選擇 采用通用型反相色譜柱分別對樣品進行分離，本文對比了Hedera ODS-2柱、SinoChrom ODS-BP柱、Diamonsil C18柱不同生產廠家的3種色譜柱，結果發現在同樣的流動相條件下，無明顯區別，本文選用柱壓較低的SinoChrom ODS-BP柱。

2.1.2 流動相的選擇 采用甲醇(或乙腈)/水(或磷酸鹽緩沖液等)體系分別對唑啉草酯樣品進行色譜分離，發現有機相采用乙腈唑啉草酯分離不理想，分離度差，峰形不對稱，采用甲醇可獲得較好的分離度和峰形，考慮到酸性體系有利于抑制唑啉草酯分解，在流動相中加入適量磷酸可實現檢測過程穩定。所以本文選用甲醇/水做流動相，并對其配比及磷酸加入量進行了調整，最后確定為甲醇/水(75/25)(每500mL流動相中含0.25g磷酸)，其色譜圖(圖1)。

1-溶劑；2-唑啉草酯分解雜質；3，4，6-未知雜質；5-唑啉草酯圖1 唑啉草酯液相色譜圖(乙腈做有機相配樣)

2.1.3 特異性及檢測波長的選擇 采用二極管陣列檢測器分別對唑啉草酯標樣及樣品溶液進行光譜數據采集，獲得唑啉草酯標樣及樣品的紫外波長掃描圖(圖2、圖3)。從圖中可以看到唑啉草酯標樣及樣品分別在202、257nm有較大吸收峰，且202nm較257nm強，但考慮到低波長基線干擾較大，所以本文選用257nm作為檢測波長。

圖2 唑啉草酯標樣紫外吸收譜圖

圖3 唑啉草酯樣品紫外吸收譜圖

2.2 配樣溶液選擇 在分析條件選擇過程中發現試樣會緩慢分解成2#峰雜質(圖1、圖4)，且使用甲醇做有機相配制樣品，會生成4#峰雜質(圖4)。針對試樣不穩定情況對乙腈體系配樣溶液進行了選擇，準確稱取同一樣品分別用乙腈、乙腈/水(5/5，含0.1%磷酸，pH值約為2.6)、乙腈/水(5/5，含0.2%磷酸，pH值約為2.3)配樣，在實驗規定的條件下連續進樣10次，計算唑啉草酯峰面積與分解雜質峰面積比，以進樣次數為橫坐標，峰面積比為縱坐標做圖(圖5)，由圖可以發現乙腈/水酸性溶液配制的試樣穩定性較好，考慮到酸性太強會影響色譜柱壽命，所以本文選擇乙腈/水(5/5，含0.1%磷酸)做為配樣溶液。

1-溶劑；2-唑啉草酯分解雜質；3，5，7-未知雜質；4-唑啉草酯甲醇溶解產生雜質；6-唑啉草酯圖4 唑啉草酯液相色譜圖(甲醇做有機相配樣)

系列1-純乙腈配樣(稱樣量：19.64mg)；系列2-乙腈/水(0.1%磷酸)配樣(稱樣量：20.46mg)；系列3-乙腈/水(0.2%磷酸)配樣(稱樣量：20.57mg)；圖5 唑啉草酯試樣穩定性

2.3 分析方法的線性相關性試驗 準確稱取唑啉草酯標準品150mg(精確至0.01mg)于50mL容量瓶中，加乙腈/水溶解，并稀釋至刻度，搖勻(標準貯備液)。分別準確吸取0、2、4、6、8、10mL，分別加入到6個50mL的容量瓶中，加乙腈/水稀釋至刻度，搖勻。根據試驗規定 的操作方法測定，記錄唑啉草酯色譜峰面積，以唑啉草酯面積與濃度作圖，測得唑啉草酯標準曲線為Y=9 510.41C-14 923.31，r=0.999 8，表明唑啉草酯在0～590.79mg/L的濃度范圍內呈線性(表1、圖6)。

表1 分析方法的線性相關性試驗數據

圖6 唑啉草酯線性關系圖

2.4 分析方法的精密度試驗 準確稱取同一樣品，按試驗規定方法，配制6份溶液，在上述實驗條件下進行分析，測唑啉草酯的標準偏差為0.26，RSD為0.27%(表2)。

表2 分析方法的精密度試驗結果

2.5 分析方法的準確度試驗 分別準確稱取已知含量的樣品溶液約20mg 6份，各分別加入實驗2.3配制的唑啉草酯標準貯備液1、2、3mL，按試驗規定的方法配成一系列溶液，測定唑啉草酯的總量，并計算回收率(表3)。

表3 分析方法的準確度試驗結果

本文建立的高效液相色譜法測定唑啉草酯含量的方法，可避免唑啉草酯在檢測過程中緩慢分解，有效保證了唑啉草酯長時間檢測試樣穩定，使檢測結果更準確，重復性更好，實踐證明是一種確實可行的好方法。