血清前列腺特異抗原、糖類抗原153、神經(jīng)元特異性烯醇化酶在乳腺癌中的表達(dá)及其與新生血管和預(yù)后的相關(guān)性

於瀟瀟，張玲玲，張小霞，金 慧

（1.南通市腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科；2.南通市腫瘤醫(yī)院乳腺科，江蘇 南通 226361）

乳腺癌是源于乳腺腺體、血管、淋巴及乳頭等乳腺相關(guān)的組織病變，該疾病早期癥狀不明顯，導(dǎo)致患者很難及時(shí)就醫(yī)，從而使得治療效果不理想，甚至導(dǎo)致死亡。目前，對乳腺癌的診斷方法主要是通過影像學(xué)檢查與腫瘤標(biāo)志物檢查，影像學(xué)檢查方式簡單，但容易造成漏診，血清腫瘤標(biāo)志物檢測具有簡便無創(chuàng)、測定結(jié)果定量客觀、費(fèi)用相對低廉等優(yōu)點(diǎn)，且患者接受高，在臨床上應(yīng)用廣泛。糖類抗原153（CA153）是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的特異性糖蛋白抗原，具有抗原性，可以用于早期發(fā)現(xiàn)乳腺癌、判斷療效和檢測預(yù)后[1]。前列腺特異抗原（PSA）是一種具有組織特異性的絲氨酸蛋白酶，包括總前列腺特異性抗原（TPSA）、游離前列腺特異性抗原（FPSA），有研究表明PSA可作為乳腺癌患病風(fēng)險(xiǎn)的評估指標(biāo)[2]。神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）是神經(jīng)組織和神經(jīng)內(nèi)分泌組織中特有的酸性蛋白酶，參與神經(jīng)內(nèi)分泌組織相關(guān)的腫瘤的發(fā)展[3]。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）通過誘導(dǎo)血管生成和淋巴管生成來促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展。本研究旨在探討血清PSA、CA153、NSE在乳腺癌中的表達(dá)及其與新生血管和預(yù)后的相關(guān)性，為后期疾病的臨床治療提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料回顧性分析南通市腫瘤醫(yī)院2017年9月至2019年8月收治的176例乳腺癌患者和92例良性乳腺結(jié)節(jié)患者的臨床資料，分別將其作為惡性組與良性組；另回顧性分析同期120例健康體檢者的體檢資料，將其作為健康組。健康組研究對象年齡31～59歲，平均（46.29±10.79）歲；體質(zhì)量指數(shù)（BMI）20～25 kg/m2，平均（22.09±1.21） kg/m2。良性組患者年齡29～59歲，平均（47.36±10.28）歲；BMI 20～26 kg/m2，平均（22.26±1.27） kg/m2。惡性組患者年齡31～62歲，平均（49.29±11.62）歲；BMI 20～26 kg/m2，平均（21.96±1.19） kg/m2；TNM分期[4]：Ⅰ ～ Ⅱ期84例，Ⅲ期51例，Ⅳ期41例。對比3組研究對象一般資料（年齡、BMI），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間可比。納入標(biāo)準(zhǔn)：惡性組患者符合《中國抗癌協(xié)會(huì)乳腺癌診治指南與規(guī)范（2015版）》[5]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；良性組患者符合《乳腺疾病防治指南》[6]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)者；良性組與惡性組患者均經(jīng)影像學(xué)檢查、病理組織活檢等確診；入院前未接受乳腺癌相關(guān)治療者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：妊娠期與哺乳期女性；合并心腦血管疾病；合并全身性重度感染性疾病、其他良惡性腫瘤者；合并血液系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)及自身免疫系統(tǒng)重度病變者等。本研究經(jīng)院內(nèi)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2血清PSA、CA153、NSE水平檢測方法采集3組研究對象空腹靜脈血5 mL，經(jīng)3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min后取血清，利用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀（Roche Diagnostics GmbH，型號：cobas 6000 e 601）檢測血清TPSA、FPSA、CA153及NSE水平。各指標(biāo)參考值：TPSA（0～0.36 ng/mL），F(xiàn)PSA（0～0.02 ng/mL），CA153（0～25 U/mL），NSE（0～17.0 ng/mL），高于參考值上限為陽性[7-8]。

1.3免疫組織化學(xué)染色采用免疫組織化學(xué)染色檢測惡性組和良性組患者病理組織VEGF陽性表達(dá)情況。以乳腺癌患者癌組織和乳腺結(jié)節(jié)患者結(jié)節(jié)組織作石蠟包埋標(biāo)本。將標(biāo)本制成3～4 μm厚的切片，經(jīng)脫蠟、水化、煮沸、修復(fù)后，利用抗VEGF單克隆抗體進(jìn)行SP染色，DAB顯色，最后進(jìn)行復(fù)染，出現(xiàn)在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的棕黃色顆粒為陽性表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)陽性細(xì)胞百分比計(jì)分，無陽性細(xì)胞為0分；陽性細(xì)胞占比≤ 10%為1分；10%＜陽性細(xì)胞占比≤ 50%為2分；50%＜陽性細(xì)胞占比≤ 75%為3分；陽性細(xì)胞占比＞75%為4分；根據(jù)著色強(qiáng)度由淺到深分別記為0、1、2、3分。將上述2項(xiàng)評分相乘，最終得分0～2分為（-），3～5分為（+），6～9分為（++），10～12分為（+++），≤ 2分為陰性，＞2分為陽性[9]。

1.4隨訪通過電話和門診對惡性組和良性組患者定期進(jìn)行為期2年的隨訪，計(jì)算1、2年生存率。

1.5觀察指標(biāo)①比較3組研究對象血清PSA、CA153、NSE水平。②比較惡性組與良性組患者血清VEGF表達(dá)水平。③比較惡性組與良性組患者生存情況。④分析血清PSA、CA153、NSE表達(dá)水平與VEGF表達(dá)情況、生存率的相關(guān)性。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)，使用S-W法檢驗(yàn)計(jì)量資料數(shù)據(jù)是否服從正態(tài)分布，對于符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以(±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[ 例(%)]表示，采用χ2檢驗(yàn)；應(yīng)用K-M法繪制患者隨訪2年內(nèi)的生存曲線，并采用log-rank檢驗(yàn)進(jìn)行比較；采用Pearson相關(guān)系數(shù)法分析血清PSA、CA153、NSE表達(dá)水平與VEGF表達(dá)情況、生存率的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組研究對象血清PSA、CA153、NSE水平比較與健康組比，良性組和惡性組患者血清TPSA、FPSA、CA153及NSE水平均升高，且惡性組高于良性組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表1。

表1 3組研究對象血清PSA、CA153、NSE水平比較( ±s)

表1 3組研究對象血清PSA、CA153、NSE水平比較( ±s)

注：與健康組比，*P＜0.05；與良性組比，#P＜0.05。TPSA：總前列腺特異性抗原；FPSA：游離前列腺特異性抗原；CA153：糖類抗原153；NSE：神經(jīng)元特異性烯醇化酶。

組別 例數(shù)TPSA(ng/mL)FPSA(ng/mL)CA153(U/mL)NSE(ng/mL)健康組120 0.26±0.10 0.02±0.01 18.65±4.43 7.04±2.12良性組 92 0.52±0.18* 0.04±0.01* 32.26±9.57*18.56±4.61*惡性組176 0.84±0.21*# 0.09±0.02*# 45.59±12.95*# 25.32±6.65*#F值 397.929 808.993 251.061 450.192 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2惡性組與良性組患者VEGF水平比較惡性組患者VEGF陽性表達(dá)率高于良性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 惡性組與良性組患者VEGF水平比較[ 例(%)]

2.3惡性組與良性組患者生存曲線比較隨訪第1年內(nèi)，惡性組患者出現(xiàn)21例死亡病例（11.93%），良性組患者出現(xiàn)2例死亡病例（2.17%）；隨訪第2年內(nèi)，惡性組患者出現(xiàn)13例死亡病例（7.39%），良性組未出現(xiàn)死亡病例；隨訪2年內(nèi)惡性組患者總生存率80.68%（142/176）低于良性組97.83%（90/92），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=15.272，P＜0.05），見圖1。

圖1 惡性組與良性組患者生存曲線

2.4血清PSA、CA153、NSE表達(dá)水平與VEGF陽性表達(dá)水平、生存率的相關(guān)性Pearson相關(guān)系數(shù)法分析結(jié)果顯示，血清TPSA、FPSA、CA153、NSE表達(dá)水平與VEGF均呈正相關(guān)（r= 0.663、0.617、0.652、0.587），與生存率呈負(fù)相關(guān)（r= -0.514、-0.493、-0.501、-0.472），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見表3。

表3 血清PSA、CA153、NSE水平與VEGF、生存率的相關(guān)性

3 討論

乳腺癌是臨床上常見的惡性腫瘤，該疾病的致病因素多而雜，包括內(nèi)分泌激素的分泌水平、生活方式、遺傳因素以及基因突變等，早期乳腺癌可以在乳腺上摸到腫塊，大多不伴有疼痛，有些患者同時(shí)伴有乳腺脹痛，甚至雙側(cè)乳腺脹痛，部分乳腺癌病灶可遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移至肺、肝、腦等位置，造成治療難度進(jìn)一步增大[10]。因此，要提高乳腺癌治愈率，恢復(fù)患者健康，需要盡早對疾病進(jìn)行確診。目前，腫瘤標(biāo)志物診斷乳腺癌相對便捷，在臨床上應(yīng)用較為廣泛。

PSA為激肽釋放酶（KLK）基因家族中KLK3的一種表達(dá)物，能夠?qū)?xì)胞生長進(jìn)行有效的刺激，促進(jìn)血管形成，對細(xì)胞基層進(jìn)行降解，在惡性腫瘤特別是前列腺癌、卵巢癌、乳腺癌等性激素相關(guān)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中均會(huì)產(chǎn)生顯著作用[11]；PSA具有兩種分子形式，分別為TPSA和FPSA，有研究表明，在乳腺惡性腫瘤切除術(shù)后，F(xiàn)PSA表達(dá)水平低，提示了游離狀態(tài)的PSA的產(chǎn)生與腫瘤密切相關(guān)[12]。CA153是黏蛋白1（MUC-1）分泌到血液中一種可溶性片段，在細(xì)胞癌變后，細(xì)胞膜表面的唾液酸酶和蛋白酶活性會(huì)增強(qiáng)，從而破壞細(xì)胞骨架，導(dǎo)致CA153從細(xì)胞脫落進(jìn)入血清中；相關(guān)研究顯示，CA153對于早期乳腺癌的診斷雖特異性高但靈敏度較低，臨床常用于浸潤性和轉(zhuǎn)移性乳腺癌的監(jiān)測[13]；NSE主要特異性地存在于神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的胞質(zhì)中，其在起源于神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞的惡性腫瘤中也有異常表達(dá)信號[14]。VEGF是一種對血管生長有促進(jìn)作用的細(xì)胞因子，其在癌細(xì)胞中能夠通過促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖和構(gòu)建血管來推動(dòng)腫瘤發(fā)展；同時(shí)還能增加微血管的滲透性，加速細(xì)胞進(jìn)出血管，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[15]。本研究中，與健康組比，良性組和惡性組患者血清中TPSA、FPSA、CA153及NSE表達(dá)水平均升高，且惡性組高于良性組；惡性組患者VEGF陽性表達(dá)率高于良性組，提示TPSA、FPSA、CA153、NSE及VEGF在乳腺癌病情診斷中有十分重要的意義，且VEGF在乳腺癌患者體內(nèi)的高表達(dá)，反映了乳腺癌患者體內(nèi)血管生長速度較良性乳腺結(jié)節(jié)患者快，且微血管密度更高。

雷巧等[16]研究中對100例乳腺癌患者進(jìn)行了7～24個(gè)月的術(shù)后隨訪，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，發(fā)生術(shù)后轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者血清F-PSA、TPSA及CA153水平均顯著高于未轉(zhuǎn)移組，提示血清FPSA、PSA及CA153均可作為預(yù)測乳腺癌預(yù)后的重要標(biāo)志物。裴生新等[17]研究中，將86例乳腺癌患者分為良性組與惡性組，并對比分析了兩組患者的PSA、CA153等指標(biāo)的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PSA、CA153在惡性組患者體內(nèi)顯著高于良性組，說明PSA、CA153的升高能夠提示乳腺癌的疾病進(jìn)展和預(yù)后情況。本研究結(jié)果顯示，隨訪2年內(nèi)惡性組患者總生存率80.68%低于良性組97.83%，提示乳腺癌患者預(yù)后質(zhì)量明顯低于良性乳腺結(jié)節(jié)患者。通過相關(guān)性分析得出，血清TPSA、FPSA、CA153、NSE表達(dá)水平與VEGF呈正相關(guān)，與生存率呈負(fù)相關(guān)，提示血清TPSA、FPSA、CA153、NSE水平越高，VEGF水平也越高，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤血管的生長，導(dǎo)致預(yù)后質(zhì)量下降。

綜上，腫瘤標(biāo)志物血清TPSA、FPSA、CA153、NSE與VEGF均呈正相關(guān)，與生存率呈負(fù)相關(guān)，表明可通過檢測PSA、CA153、NSE表達(dá)水平來反映血管新生速度，對乳腺癌的發(fā)展與預(yù)后具有重要意義，值得臨床推廣應(yīng)用。