4種中藥單體與丁酸鈉誘導豬宿主防御肽表達的協同效果研究

儲 蓄，張軍霞，王 晶

(1．北京市農林科學院畜牧獸醫研究所，北京 100097；2.青海大學農牧學院，西寧 810016；3.北京市農林科學院-美國俄克拉荷馬州立大學動物科學聯合實驗室，北京 100097)

動物生產中抗生素的濫用已成為重大公共安全問題，嚴重危害動物和人類健康。因此，通過營養手段提高機體免疫力和抗病毒能力成為目前畜禽替抗研究的熱點之一。宿主防御肽(host defense peptides,HDPs)又稱抗菌肽(antimicrobial peptides,AMPs)，是一種具有抗菌、抗病毒和調節機體免疫力等多種功能的小分子肽[1]。豬源HDPs發現較早，主要分為Cathelicidin和Defensin兩大家族。研究發現，HDPs具有抗炎抑炎[2]和抑制細菌真菌增殖[3]等能力，且HDPs不易產生耐藥性[4]，這些特性使得HDPs成為一種潛在的抗生素替代物，用以增加動物機體免疫力。目前體外合成HDPs價格較昂貴，還存在穩定性差、易酶解等問題，而通過營養物質調控機體產生內源HDPs是提高機體免疫的可能途徑之一。近年來研究發現，維生素、脂肪酸、益生菌、氨基酸、礦物質等均能誘導內源性HDPs的表達[5-6]。

丁酸是一種揮發性脂肪酸，主要由機體腸道中一些特定的微生物發酵產生[7]。研究發現，丁酸鈉可顯著增加豬腎細胞(PK-15)中pBD3、pBD128、pBD123、pBD115和pEP2C基因的表達，且不引起炎癥反應[8]；而在仔豬飼糧中添加0.2%的丁酸鈉，也可顯著增加仔豬回腸和結腸pBD2和pBD3基因的表達，減輕仔豬炎癥反應，并降低糞便中產腸毒素性大腸桿菌(enterotoxigenicEscherichiacoli，ETEC)含量[9]。丁酸鈉與某些HDPs誘導劑之間存在一定的協同效應，如丁酸鈉與渥曼青霉素、橡精和粉防己堿可協同誘導雞巨噬細胞β防御素9(AvBD9)基因的表達[10]；同時飼喂毛喉素和丁酸鈉也可協同誘導雞嗉囊和空腸中AvBD9基因的表達[11]。北京市農林科學院畜牧獸醫研究所動物營養研究室在前期開展的高通量篩選研究中，從1 261個天然產物化合物中篩選出黃腐酚(xanthohumol)、異丹葉大黃素(isorhapontigenin)、去氧紫草素(deoxyshikonin)和毛蕊異黃酮(calycosin)4種可明顯誘導豬腸上皮細胞IPEC-J2和豬肺泡巨噬細胞3D4/31 HDPs表達的中藥單體[12]。然而，這些中藥單體與丁酸鈉在誘導豬細胞HDPs表達方面是否具有潛在的協同作用尚不清楚。因此，為獲得更多提高豬HDPs表達的可能，本研究擬對上述4種中藥單體成分與丁酸鈉在IPEC-J2和3D4/31細胞中是否對HDPs表達具有協同作用進行進一步研究，以期為動物生產實踐中提高機體防御功能提供新方法和新思路。

1 材料與方法

1.1 材料

豬腸道上皮細胞IPEC-J2和豬肺泡巨噬細胞3D4/31均由美國俄克拉荷馬州立大學饋贈；ETEC(F4+ETEC),血清型O149∶K91，購自國家獸醫微生物菌種保藏中心。丁酸鈉(sodium butyrate)購自Sigma公司；黃腐酚(C21H22O5)、異丹葉大黃素(C15H14O4)、去氧紫草素(C16H16O4)、毛蕊異黃酮(C16H12O6)均購自Target Molecule公司；胎牛血清、DMEM/F12、RPMI 1640培養基均購自Gibco公司；RNAzol RT購自Molecular Research Center公司；iScriptTMcDNA試劑盒和iTapTMUniversal SYBR@Green Supermix試劑盒均購自Bio-Rad公司；Trypticase soy培養基購自Thermo公司。超凈工作臺、臺式離心機、DS-11超微量光度計、QuantStudio 3 Real-Time PCR儀、超聲細胞破碎儀、酶標儀。

1.2 IPEC-J2和3D4/31細胞培養

將IPEC-J2細胞接種于含有10%胎牛血清、1%雙抗(100 μg/mL鏈霉素和100 U/mL青霉素)的DMEM/F12完全培養基，于37 ℃、5% CO2恒溫培養箱內進行培養，待細胞匯合度為70%～80%時消化傳代，并進行后續試驗。

將3D4/31細胞接種于含有10%胎牛血清、1%雙抗和1%丙酮酸鈉的RPMI 1640完全培養基中，37 ℃、5% CO2恒溫培養，待細胞匯合度為70%～80%時消化傳代，并進行后續試驗。

1.3 不同中藥單體和丁酸處理對IPEC-J2和3D4/31細胞HDPs和細胞因子表達的影響

取生長狀態良好的IPEC-J2和3D4/31細胞分別按1.25×105和4×105/孔接種到12孔板中，在37 ℃、5% CO2培養箱中過夜培養，待細胞貼壁后處理細胞，37 ℃培養。試驗所用化合物濃度均基于前期試驗結果[12]，均為誘導HDPs表達的最佳處理濃度。試驗分為10組，具體分組信息見表1，每組3個復孔，試驗重復3次。

培養24 h后，每孔加入250 μL RNAzol RT裂解細胞，提取總RNA，置于冰上保存。使用DS-11超微量光度計檢測RNA濃度與純度，A260 nm/A280 nm值在1.8～2.0，A260 nm/A230 nm值>2時，表明RNA純度較高。按iScriptTMcDNA試劑盒說明書反轉錄獲得cDNA。以GAPDH為內參基因，進行實時熒光定量PCR，測定HDPspBD2、pEP2C、pBD3、PG1-5基因及細胞因子白細胞介素-6(IL-6)、IL-1β基因的表達。實時熒光定量PCR所用引物序列參照前期研究結果[12]，引物信息見表2。反應體系10 μL：iTaqUniversal SYBR Green Supermix 5 μL，cDNA 4 μL，上、下游引物各0.3 μL，無RNA酶H2O 0.4 μL。反應條件：95 ℃預變性10 min；95 ℃變性30 s，60 ℃退火30 s,72 ℃延伸20 s，共40個循環。反應結束后，用2-ΔΔCt法計算目的基因的相對表達量。

表1 試驗設計及分組Table 1 Experimental design and grouping

表2 實時熒光定量PCR引物信息Table 2 Primer information for Real-time PCR

續表

1.4 不同中藥單體和丁酸鈉處理對3D4/31細胞抑菌活性的影響

將ETEC劃線接種于Trypticase soy瓊脂平板上，于37 ℃培養箱中過夜活化。挑取單菌落至液體Trypticase soy培養基中，37 ℃、250 r/min搖晃培養至對數生長期。配制含1 mmol/L NaH2PO4和25 mmol/L NaHCO3的溶液，并與Trypticase soy液體培養基1∶4混勻制備成稀釋液，將ETEC稀釋到2.5×105CFU/mL備用。

取生長狀態良好的3D4/31細胞以每孔8×105個細胞均勻接種到6孔板中，37 ℃、5% CO2培養箱中過夜培養。按1.3方法處理細胞，培養24 h后，用HBSS平衡液清洗細胞，之后刮取細胞轉移至1.5 mL離心管中，1 000 r/min離心10 min，棄上清，加入120 μL純水重懸，于-80 ℃靜置20 min，隨后置于冰上5 min以裂解細胞。用超聲細胞破碎儀對細胞進行再次裂解后，離心取50 μL上清裂解液與50 μL上述制備的ETEC菌液分別共同培養3、6、9和24 h，用酶標儀測定D600 nm值。

1.5 統計分析

試驗數據采用Excel和SPSS 21.0軟件進行統計分析，采用獨立樣本t檢驗法比較共同處理組與單獨處理組間的差異。結果用平均值±標準誤表示。P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。使用Origin 2019進行圖表繪制。

2 結 果

2.1 不同中藥單體和丁酸鈉共同處理對IPEC-J2細胞HDPs表達的影響

由圖1可知，黃腐酚與丁酸鈉共同處理組的pEP2C基因表達量顯著高于黃腐酚單獨處理組(P<0.05)，與丁酸鈉單獨處理組差異不顯著(P>0.05)；pBD2、pBD3和pG1-5基因表達量在黃腐酚與丁酸鈉共同處理組與單獨處理組間差異不顯著(P>0.05)。異丹葉大黃素與丁酸鈉共同處理組pBD3和pEP2C基因表達量極顯著高于異丹葉大黃素及丁酸鈉單獨處理組(P<0.01)；pBD2和PG1-5基因表達量極顯著高于異丹葉大黃素單獨處理組(P<0.01)，但與丁酸鈉單獨處理組相比差異不顯著(P>0.05)。去氧紫草素和丁酸鈉共同處理組PG1-5基因表達量極顯著高于去氧紫草素和丁酸鈉單獨處理組(P<0.01)；pBD3基因表達量顯著高于去氧紫草素和丁酸鈉單獨處理組(P<0.05)；pBD2和pEP2C基因表達量均極顯著高于去氧紫草素單獨處理組(P<0.01)，但與丁酸鈉單獨處理組差異不顯著(P>0.05)。毛蕊異黃酮和丁酸鈉共同處理組pBD2、pEP2C、pBD3和PG1-5基因的表達均顯著或極顯著高于毛蕊異黃酮和丁酸鈉單獨處理組(P<0.05；P<0.01)。

2.2 不同中藥單體和丁酸鈉共同處理對3D4/31細胞HDPs表達的影響

由圖2可知，黃腐酚和丁酸鈉共同處理組與黃腐酚單獨處理組相比，pEP2C和pBD3基因表達均差異不顯著(P>0.05)。異丹葉大黃素和丁酸鈉共同處理組pBD2和pEP2C基因表達量均顯著高于異丹葉大黃素單獨處理組(P<0.05)；pBD3基因表達量極顯著高于異丹葉大黃素單獨處理組(P<0.01)，但與丁酸鈉單獨處理組相比差異不顯著(P>0.05)。去氧紫草素和丁酸鈉共同處理組各基因表達差異均不顯著(P>0.05)，其他基因未表現增強效果。毛蕊異黃酮與丁酸鈉共同處理組pBD3基因表達量分別極顯著和顯著高于毛蕊異黃酮單獨處理組(P<0.01)和丁酸鈉單獨處理組(P<0.05)；pBD2基因表達量極顯著高于毛蕊異黃酮單獨處理組(P<0.01)，但與丁酸鈉單獨處理組差異不顯著(P>0.05)；PG1-5和pEP2C基因的表達與丁酸鈉或毛蕊異黃酮單獨處理組差異不顯著(P>0.05)。

2.3 不同中藥單體和丁酸鈉共同處理對IPEC-J2細胞因子表達的影響

由圖3可知，黃腐酚、異丹葉大黃素、去氧紫草素和毛蕊異黃酮與丁酸鈉共同處理組IPEC-J2細胞IL-6基因表達量與對應的中藥單體及丁酸鈉單獨處理組差異均不顯著(P>0.05)。黃腐酚、毛蕊異黃酮與丁酸鈉共同處理組IPEC-J2細胞IL-1β基因表達量較對應中藥單體單獨處理組顯著升高(P<0.05)，但與丁酸鈉單獨處理組差異不顯著(P>0.05)。

2.4 不同中藥單體和丁酸鈉共同處理對3D4/31細胞因子表達的影響

由圖4可知，黃腐酚和丁酸鈉共同處理組3D4/31細胞IL-6基因表達量顯著高于丁酸鈉單獨處理組(P<0.05)，但與黃腐酚單獨處理差異不顯著(P>0.05)；異丹葉大黃素、毛蕊異黃酮和丁酸鈉共同處理后3D4/31細胞IL-6基因含量顯著低于各自單獨處理組(P<0.05)，但與丁酸鈉單獨處理組差異不顯著(P>0.05)。黃腐酚、異丹葉大黃素、去氧紫草素、毛蕊異黃酮和丁酸鈉共同處理組3D4/31細胞IL-1β基因表達量與各自單獨處理組差異均不顯著(P>0.05)。

①C，空白組；NaB，丁酸鈉；XN，黃腐酚；ISO，異丹葉大黃素；DEO，去氧紫草素；CAL，毛蕊異黃酮。圖2～4同。②共同處理組與丁酸鈉組相比，*，差異顯著(P<0.05)；**，差異極顯著(P<0.01)；無*，差異不顯著(P>0.05)。共同處理組與對應的中藥單體組相比，#，差異顯著(P<0.05)；##，差異極顯著(P<0.01)；無#，差異不顯著(P>0.05)。圖2～4及表3同 ①C,Control group;NaB,Sodium butyrate;XN,Xanthohumol;ISO,Isorhapontigenin;DEO,Deoxyshikonin;CAL,Calycosin.The same as fig.2-fig.4.②Compared with the sodium butyrate group,*,Significant difference (P<0.05);**,Extremely significant difference (P<0.01);No *，No significant difference (P>0.05).Compared with the corresponding Chinese herbal monomers group,#,Significant difference (P<0.05);##,Extremely significant difference (P<0.01);No #，No significant difference (P>0.05).The same as fig.2-fig.4,and table 3圖1 中藥單體與丁酸鈉處理對IPEC-J2細胞HDPs表達的影響Fig.1 Effects of Chinese herbal monomers and sodium butyrate on expression of HDPs in IPEC-J2 cells

圖2 中藥單體與丁酸鈉處理對3D4/31細胞HDPs表達的影響Fig.2 Effects of Chinese herbal monomers and sodium butyrate treatment on expression of HDPs in 3D4/31 cells

圖3 中藥單體與丁酸鈉處理對IPEC-J2細胞因子表達的影響Fig.3 Effects of Chinese herbal monomers and sodium butyrate treatment on cytokines expression in IPEC-J2 cells

圖4 中藥單體與丁酸鈉處理對3D4/31細胞因子表達的影響Fig.4 Effects of Chinese herbal monomers and sodium butyrate treatment on cytokine expression in 3D4/31 cells

2.5 不同中藥單體和丁酸鈉共同處理對3D4/31細胞抑制ETEC活性的影響

不同中藥單體和丁酸鈉共同處理對3D4/31細胞抑制ETEC活性的影響見表3。處理3 h時，去氧紫草素、毛蕊異黃酮和丁酸鈉共同處理組與丁酸鈉及對應中藥單體單獨處理組相比，ETEC存活率顯著降低(P<0.05)。處理6 h時，異丹葉大黃素與丁酸鈉共同處理組ETEC存活率顯著低于丁酸鈉單獨處理組(P<0.05)，但與異丹葉大黃素單獨處理組差異不顯著(P>0.05)；毛蕊異黃酮與丁酸鈉共同處理組較毛蕊異黃酮和丁酸鈉單獨處理組ETEC存活率分別顯著和極顯著下降(P<0.05；P<0.01)。處理9 h時，異丹葉大黃素、去氧紫草素、毛蕊異黃酮與丁酸鈉共同處理組ETEC存活率均顯著或極顯著低于丁酸鈉單獨處理組(P<0.05；P<0.01)，但與對應中藥單體單獨處理組沒有顯著差異(P>0.05)。處理24 h時，毛蕊異黃酮與丁酸鈉共同處理組ETEC存活率分別顯著和極顯著低于毛蕊異黃酮和丁酸鈉單獨處理組(P<0.05；P<0.01)；異丹葉大黃素、去氧紫草素與丁酸鈉共同處理組ETEC存活率極顯著低于丁酸鈉單獨處理組(P<0.01)，但與對應中藥單體單獨處理組無顯著差異(P>0.05)。

表3 不同中藥單體和丁酸鈉處理對3D4/31細胞抑制ETEC活性的影響Table 3 Effects of different Chinese herbal monomers and sodium butyrate treatment on the antibacterial activity of porcine 3D4/31 cells to ETEC

3 討 論

3～8個碳的短鏈脂肪酸鹽中，丁酸鈉對IPEC-J2細胞HDPs調控作用最強，對pBD2、pBD3和pEP2C基因表達有明顯誘導作用，長鏈脂肪酸鹽的調控作用較弱[13]。低濃度丁酸鈉(0.2～0.4 mmol/L)會促進IPEC-J2細胞的分化，而高濃度(0.5 mmol/L或更高)時則可能通過p38絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路降低細胞活性并引發細胞凋亡[14]。竇秀靜等[15]研究發現，丁酸鈉對IPEC-J2細胞和PK-15細胞pBD3和pEP2C基因表達呈濃度和時間依賴效應，IPEC-J2細胞最佳濃度為4 mmol/L，最佳時間為24 h。實驗室前期預試驗結果表明，丁酸鈉濃度為8 mmol/L時，誘導HDPs表達效果最優，因此后續試驗中采用該濃度。此外，研究發現一些中草藥活性成分與丁酸鈉在人和雞的相關研究中對HDPs表達有協同誘導作用[16-17]，然而在豬上的協同表達效果鮮見文獻報道。

本試驗所用黃腐酚是一種從啤酒花中提取的戊基化類黃酮[18]，具有抗病毒[19]、抗炎和抗氧化[20]等作用。研究發現，黃腐酚可與人乳腺癌細胞(MCF-7/6)中組蛋白H2A、H28和H4等靶點結合進而發揮抗癌作用，并推測黃腐酚可調節組蛋白的翻譯后修飾，然而具體機制尚不清楚[21]。丁酸鹽主要通過促進組蛋白H3乙酰化激活MAPK、JNK和Erk1/2信號通路，表達促炎細胞因子、趨化因子和β防御素[22]。本研究中，黃腐酚與丁酸鈉單獨處理可誘導豬IPEC-J2細胞HDPs表達，但并不表現協同效應，這是否和它們作用于不同的組蛋白位點有關還需進一步研究。

異丹葉大黃素是一類二苯乙烯類化合物，是白蘆藜醇的甲氧基化類似物[23]，具有抗炎和抗氧化的功能[24-26]。本試驗結果表明，異丹葉大黃素與丁酸鈉共同處理細胞對pBD2、pBD3和pEP2C基因的表達具有明顯的協同效應。研究發現，丁酸鹽和白蘆藜醇均具有抑制癌細胞增殖和誘導癌細胞分化作用，兩者同時作用可協同增強結腸腺癌細胞(Caco2)的分化，但沒有協同抑制增殖的能力[27]。此外，研究人員還發現白蘆藜醇4-羥基上修飾丁酸酯可更好地增強其抗癌活性[28]。另外，通過包被的方法，丁酸鹽-白蘆藜醇酯表現更穩定且有著更強的過氧化氫清除能力[29]。因此，推測異丹葉大黃素和丁酸鹽也存在類似的協同作用，其中也包括對豬HDPs的誘導。此外，研究發現白蘆藜醇可通過SIRT1(一種NF-κB的抑制劑)誘導人原發髓細胞HDPs基因的表達[30]，王鑫[31]研究發現，丁酸鈉通過NF-κB途徑促進牛乳腺上皮細胞(MAC-T)宿主防御肽BMAP-34和DEFB1基因的表達。因此推測異丹葉大黃素與丁酸鈉的協同表達作用也可能是通過調節NF-κB信號通路實現的，但這一推測還有待進一步證實。

去氧紫草素是一類天然萘醌類化合物，有較強抑制腫瘤細胞增殖和促進腫瘤細胞凋亡的功能[32]。本研究結果表明，去氧紫草素和丁酸鈉共同處理IPEC-J2細胞可協同誘導PG1-5基因表達，共同處理3D4/31細胞時pEP2C基因的表達呈現協同效應。Yang等[33]發現去氧紫草素可增加組蛋白乙酰化水平，而熊海濤[34]也發現丁酸鈉可通過抑制組蛋白去乙酰化酶活性以增加組蛋白乙酰化程度，進而誘導豬HDPs表達。因此，推測去氧紫草素和丁酸鈉共同促進組蛋白乙酰化程度進而誘導細胞HDPs表達，并呈現協同效應。

毛蕊異黃酮是黃芪的主要藥效成份，具有抗炎、抗氧化和抗腫瘤等作用[35-36]。Deng等[37]發現毛蕊異黃酮可通過調控IGF1R/PI3K/Akt、NF-κB和MAPK等信號通路，促進成骨細胞分化或抑制成骨細胞凋亡。而Dai等[22]發現丁酸鹽可通過上調MAPK信號通路促進牛乳腺上皮細胞β防御素的表達。本試驗結果表明，毛蕊異黃酮與丁酸鈉可協同誘導IPEC-J2細胞pEP2C、pBD2、pBD3和PG1-5基因表達和3D4/31細胞pBD3和pEP2C基因的表達，但毛蕊異黃酮和丁酸鈉是否通過同時作用于MAPK信號通路促進了HDPs的表達還需進一步驗證。

丁酸鈉和20 μmol/L維生素D3共同使用時可使IPEC-J2細胞pBD3 基因表達提高30倍[38]，而丁酸鈉和1,25二羥基VD3可使雞AvBD9基因的表達量提高4 900倍[16]，因此，不同物種可能影響HDPs的協同表達效果。本研究所涉及的4種化合物與丁酸鈉的協同效果是否能在其他物種體現還需進行更多的研究。此外，化合物在誘導相同物種不同類型細胞HDPs的表達中也表現顯著差異[39-40]。Zeng等[13]發現8 mmol/L丁酸處理后IPEC-J2細胞pBD2基因表達量提高了84倍，而在3D4/31細胞中僅為6.6倍。本試驗前期研究也發現，本研究所涉及的4種化合物在不同細胞之間的表達量也存在差異。

丁酸不僅可給細胞提供能量，還對機體免疫反應具有調節作用。丁酸鹽可調控新生仔豬回腸炎癥因子IL-8、干擾素-γ(IFN-γ)和IL-1β基因的表達，對腸道健康有潛在的保護作用[41]。前期試驗結果表明，本研究所用4種中藥單體在誘導HDPs表達時，不會引起細胞明顯的炎癥反應[12]。本試驗結果顯示，丁酸鈉與中藥單體共同處理IPEC-J2細胞時與中藥單體處理相比未引起IL-6基因表達的明顯變化，但IL-1β基因表達量的變化可能由于丁酸鈉的誘導效應發生相應的變化。IL-1β是細胞因子IL-1超家族成員，與IL-18結構相似[42]。研究發現，丁酸鹽可激活IPEC-J2細胞中GPR109A(一種結腸中丁酸鹽的受體)使得NOD樣受體熱蛋白結構域相關蛋白3(NLRP3)活化，進而誘導IL-1β基因表達[43-44]，而NLRP3基因的表達產物正是IL-1β和IL-18的激活劑[45]。本研究中，中藥單體與丁酸鈉共同處理后IL-1β基因表達量與丁酸鈉單獨處理相近，因此,推測丁酸鈉和中藥單體共同處理IPEC-J2細胞時可能主要通過丁酸鈉激活NLRP3誘導細胞因子表達。此外，研究結果顯示，異丹葉大黃素、毛蕊異黃酮與丁酸鈉共同處理3D4/31細胞，IL-6基因表達量顯著低于異丹葉大黃素、毛蕊異黃酮單獨處理；IL-1β基因的表達量也呈現類似趨勢，但差異不顯著。因此,推測異丹葉大黃素、毛蕊異黃酮和丁酸鈉共同處理可一定程度緩解3D4/31細胞的炎性反應，但其作用效果和機制還需進一步探索。

由于缺乏豬HDPs的有效抗體，無法直接驗證丁酸鈉與中藥單體是否在蛋白水平上對豬細胞有協同誘導HDPs的能力,本研究通過細胞抑菌能力的提升，間接證實丁酸鈉與中藥單體誘導細胞產生HDPs從而發揮抑菌作用的能力。ETEC是導致仔豬黃痢、白痢、水腫甚至死亡的主要原因，國內約有35%的仔豬因感染ETEC而導致腹瀉,給養殖業帶來了重大經濟損失[46]。研究表明，丁酸鈉可通過抑制組蛋白乙酰化酶活性，上調內源HDPs的表達，增強巨噬細胞3D4/2清除ETEC的能力[34]，這表明丁酸鈉可誘導細胞產生HDPs以抑制細菌生長。4種中藥單體促進3D4/31細胞抑菌能力提升也已被前期研究結果證明[12]。本研究結果表明，除黃腐酚外，其他中藥單體和丁酸鈉單獨或共同處理均可抑制ETEC的活性，其中毛蕊異黃酮與丁酸鈉具有最佳協同效果，這與HDPs基因表達的結果趨勢相同，說明中藥單體與丁酸鈉可通過協同誘導細胞產生HDPs以提高機體抗菌能力。

4 結 論

本研究結果表明，中藥單體與丁酸鈉可在一定程度上協同促進機體細胞產生HDPs以抑制ETEC等致病菌的生長，可為抗生素替代品的研究提供新的思路，并可為動物生產實踐提供參考。需要注意的是，不同細胞系、不同物種對中藥單體與丁酸鈉的敏感程度有所不同，實際應用中需綜合考慮并進行進一步的驗證，此外，中藥單體與丁酸鈉發揮協同作用的內在機制也需進一步研究。