胃泌素釋放肽前體、神經元特異性烯醇化酶、細胞角蛋白19片段、癌胚抗原及胃泌素釋放肽前體及神經元特異性烯醇化酶聯合檢測對小細胞肺癌的診斷效能

黃建成，郭建峰，吳水清，鄭錦利

(福建醫科大學附屬閩東醫院檢驗科，福建 寧德 355000)

2020年全球最新癌癥負擔數據提示，肺癌是全球癌癥新發病率第二，病死率第一的惡性腫瘤[1]。小細胞肺癌(Small cell lung cancer，SCLC)作為肺癌的主要類型之一，具有惡性度高、早期轉移率和復發率高的特點，約占肺癌總數的13%～17%[2]。研究顯示肺癌5年生存率僅為19%[3],腫瘤的早期診斷可以降低病死率，SCLC是一種對放化療敏感性高，早期發現并及時治療，有可能達到治愈可能。因血清腫瘤標志物具有簡單方便、安全無創、費用低等優點，有助于SCLC診斷。本研究將探討血清Pro-GRP、NSE、CYFRA21-1、CEA、Pro-GRP+NSE對在SCLC診斷的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年4月至2020年4月就診于寧德市閩東醫院經病理學檢查確診為SCLC的53例患者作為SCLC組，男45例、女8例，年齡30～73 歲，平均(61.06±5.41)歲。按美國退伍軍人管理局系統醫院SCLC分期方法，分為局限期(LD-SCLC)22例，廣泛期(ED-SCLC)31例。70例NSCLC(肺鱗癌30例；肺腺癌40例)，男52例、女 18例，年齡35～72 歲，平均(59.99±5.96)歲，此外再選擇同期HC體檢60例作為HC組，男40 例、女20例，年齡32～78歲，平均(59.16±9.98)歲。病例納入標準為：三組均無嚴重肝腎功能障礙，無精神疾病史，并排除其他類型惡性腫瘤或其他復雜性疾病。經比較三組受試者性別、年齡差異均無統計學意義(均P>0.05)，具有可比性。

1.2 檢測方法 抽取三組受試者清晨空腹靜脈血各5 ml，按照 3500 r/min 的速度行 5 min 離心處理，獲取上清液，保存在-80 ℃的環境中待檢，采用電化學發光法對CYFRA21-1、NSE、Pro-GRP進行測定，測定儀器選擇羅氏E601。采用化學發光法對CEA進行測定，測定儀器選擇全自動化學發光儀MAGLUMI2000，各項血清值參考區間為Pro-GRP≤69.2 pg/ml，NSE≤16.3 ng/ml,CYFRA21-1≤3.3 ng/ml,CEA≤5 ng/ml。若測定值高出以上各項指標參考范圍，則可以將其判定為陽性。

1.3 觀察指標 比較SCLC組、NSCLC組、HC組三組患者Pro-GRP、NSE、CYFRA21-1、CEA表達水平，同時分析四項腫瘤標志物診斷及鑒別SCLC(ED-SCLC、LD-SCLC)、NSCLC、HC人群的價值。

1.4 統計學方法 采用 SPSS 17.0統計學軟件進行統計學分析。用Shapiro-Wilk檢驗(W檢驗)數據是否服從正態分布，腫瘤標志物數據符合偏態分布，因此計量資料采用中位數(M)和四分位數(P25-P75)表示，多個獨立樣本間的比較用Kruskall-WalliH檢驗，兩個獨立樣本間的比較用Mann-WhitneyU檢驗；對各項腫瘤標志物聯合檢測，通過Logistic擬合回歸構建回歸模型，受試者工作特征曲線(ROC)確定臨界值(cut-off值)并分析檢測效能，并應用Medalc軟件做Z檢驗，比較ROC曲線下面積(AUC)；率的比較用卡方χ2檢驗；P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組血清中Pro-GRP、NSE、CYFRA21-1、CEA 水平的比較 見表1。用Kruskall-WalliH檢驗進行多組比較，其中SCLC組血清中Pro-GRP、NSE明顯高于NSCLC組及健康組，差異有統計學意義(P<0.01)。NSCLC在CYFRA21-1、CEA 表達水平高于SCLC、健康組，差異有統計學意義(P<0.01)。用Mann-WhitneyU檢驗進行兩兩比較，SCLC組Pro-GRP、NSE高于NSCLC組及健康組，U值分別為344、176.5及533.5、1276，差異有統計學意義(均P<0.01)。

2.2 血清Pro-GRP、NSE、CYFRA21-1、CEA在SCLC不同臨床分期之間水平比較 見表2。ED-SCLC組Pro-GRP、NSE均高于LD-SCLC(均P<0.05)。而CYFRA21-1、CEA在LD-SCLC和ED-SCLC之間比較無統計學差異(均P>0.05)。

表2 血清Pro-GRP、NSE、CYFRA21-1、CEA在SCLC不同臨床分期之間水平比較[M(P25-P75]

2.3 血清Pro-GRP、NSE、CYFRA21-1、CEA 在各組中陽性率比較 見表3。SCLC組Pro-GRP、NSE陽性率明顯高于NSCLC/HC組，差異有統計學意義(均P<0.05)。NSCLC組CYFRA21-1、CEA陽性率明顯高于SCLC/HC組，差異有統計學意義(均P<0.05)。

表3 血清Pro-GRP、NSE、CYFRA21-1、CEA 在各組中陽性率比較[例(%)]

2.4 血清Pro-GRP、NSE對SCLC診斷效能分析 Pro-GRP、NSE在SCLC組顯著高表達且陽性率高，分別以NSCLC組、健康組、混合組(NSCLC組+健康組)為對照，繪制ROC曲線，取得最佳臨界值，進一步評估Pro-GRP、NSE對SCLC的診斷效能。Pro-GRP在敏感度、特異性、約登指數、AUC均高于NSE。以健康組、混合組(NSCLC組+健康組)為對照，Pro-GRP+NSE敏感度、約登指數、AUC(95%CI)高于Pro-GRP、NSE組，差異有統計學意義(均P<0.05)；Pro-GRP與NSE比較差異無統計學意義(P>0.05)。以NSCLC組為對照，Pro-GRP+NSE特異性、約登指數、AUC(95%CI)高于Pro-GRP、NSE組，與NSE比較差異有統計學意義(均P<0.05)；Pro-GRP與NSE比較差異有統計學意義(P<0.05)；Pro-GRP與Pro-GRP+NSE比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見表4(圖1～3)。

表4 血液Pro-GRP、NSE對SCLC的診斷效能分析

圖1 以HC組為對照 圖2 以NSCLC組為對照 圖3 以混合組為對照

3 討 論

我國肺癌發病率及病死率均位居第一，發病人數和死亡人數分別占全球肺癌37.0%、39.8%[1]。SCLC是一種惡性度高，易出現早期轉移，病死率高的惡性腫瘤。若早發現，早期放化療、手術治療，有可能達到很好治療效果，甚至治愈可能。腫瘤標志物是由腫瘤細胞釋放，可以用于反應腫瘤發生及增殖的生物活性物質。因無創、費用較低、患者接受度較高等優點，廣泛運用于臨床。2021版的中華醫學會肺癌臨床診療指南[4]推薦Pro-GRP、NSE、CYFAR21-1、CEA等作為檢測肺癌的血清標記物。

本研究發現Pro-GRP、NSE在SCLC組均處于高水平表達，分析與SCLC胞質中具有神經內分泌顆粒，能分泌5-羥色胺、激肽、組胺等物質有關。GRP最初在豬胃中發現，后經過研究發現廣泛存在哺乳動物的胃腸道、肺、腦組織中，通過細胞相互作用及自分泌，參與SCLC的生長、遠處轉移等[5-6]。因無法穩定存在于血漿中，而Pro-GRP更穩定及易檢測的特點，用于SCLC的篩查。NSE是一種酸性蛋白酶，常存在于神經內分泌組織、神經元、神經內分泌腫瘤中，在SCLC等高表達，而健康人中低表達，被認為SCLC的特異性腫瘤標志物[7]。

CYFRA21-1是由細胞角蛋白19的可溶性片段，當肺泡上皮細胞凋亡后，從胞漿中釋放出來，導致血液中該指標升高，廣泛應用于肺癌的診斷、療效監測等[8]。CEA 是從胚胎組織、大腸癌中提取的酸性糖蛋白，作為結直腸癌的特異性標志，但后來研究發現還可以在胃癌、肺癌、乳腺癌等腫瘤中高表達[9-11]。本研究發現CYFRA21-1、CEA在SCLC、NSCLC組中亦有升高，但在NSCLC組表達更明顯，且與SCLC對比有統計學差異(均P<0.01)。本研究不足之處在于健康組存在5例CEA升高，可能存在其他胃腸道疾病引起升高而未排除。

本研究發現，各項腫瘤標志物在ED-SCLC中表達水平均高于LD-SCLC，其中Pro-GRP、NSE呈高水平表達(均P<0.05)。有研究顯示Pro-GRP參與腫瘤快速生長，在廣泛期中表達遠高于局限期[12]。通過對比陽性率，也發現SCLC組Pro-GRP、NSE陽性率均明顯高于NSCLC及HC組，與沈迪、李德經等[13-14]報道一致。將SCLC分期后，發現Pro-GRP、NSE陽性率在廣泛期高于局限期，與李會萍、王玲、周建平等[15-17]研究結果一致，有助于診斷SCLC及臨床分期[18-21]。CYFRA21-1、CEA在NSCLC組呈高水平表達(均P<0.05)。而在SCLC、HC組無明顯統計學差異，在LD-SCLC及ED-SCLC組表達無統計學差異，說明CYFRA21-1、CEA可用于NSCLC診斷，不適用于SCLC診斷及嚴重程度評估。

以NSCLC、HC組、混合組(NSCLC+HC組)為對照，通過繪制ROC曲線，以進一步分析Pro-GRP、NSE對SCLC的診斷效能。結果表明，Pro-GRP在敏感度、特異性、約登指數、AUC均優于NSE，符合Dong等[13]回顧性研究結果，AUC值均大于0.85，說明Pro-GRP更有助于SCLC診斷。Pro-GRP+NSE聯合檢測，在約登指數、AUC均高于Pro-GRP、NSE單獨檢測，AUC值均大于0.9，與HC組、混合組對比均具有統計學意義，聯合檢測由于單項檢測符合國內外研究結果[20-21]。本研究還發現，在與NSCLC組對比，Pro-GRP+NSE聯合檢測、單項檢測Pro-GRP效能大致相同，差異無統計學意義，可能與Pro-GRP更有利于鑒別SCLC相關。臨床工作中，應根據患者情況進行檢測腫瘤標志物，早期發現疾病及治療。

綜上所述，Pro-GRP、NSE可作為SCLC的診斷腫瘤標志物，CYFRA21-1、CEA可協助NSCLC的診斷。其中Pro-GRP較NSE更助于SCLC診斷、鑒別診斷以及臨床分期，Pro-GRP+NSE聯合檢測診斷SCLC價值更優于Pro-GRP、NSE。