齦溝液中MMP-8的水平及MMP-8/TIMP-1比值在牙周炎癥水平判斷中的臨床價值

安 琪,王新剛

(1.長春市口腔醫院 牙體牙髓科，吉林 長春130051;2.吉林大學中日聯誼醫院,吉林 長春130033)

慢性牙周炎主要發病原因為牙齦長期炎癥向深部牙組織進展[1-2]。相關研究顯示牙齦炎可逐漸轉化為牙周炎，加強對該病進行早期診斷，這對逆轉治療結局有十分重要的意義[3]。齦溝液(GCF)檢測可以對牙周組織的病理、生理學狀態進行評估[4]。基質金屬蛋白酶(MMP)可將胞外基質進行降解，是一種可對牙周組織產生破壞的蛋白溶解酶，多由炎性滲出細胞(如中性多核白細胞、炎性狀態下的成纖細胞等)分泌[5]。臨床實驗學研究表明MMP-8約為GCF中膠原酶蛋白總量的80%，且牙周疾病活動性越強，牙周疾病點位MMP-8濃度顯著升高[6]。MMP抑制劑(TIMP)可對患者機體MMP水平及其活性具有調節作用，其中TIMP-1的調節作用最強，可與大多數MMP之間相結合[7]。本研究主要探討齦溝液中MMP-8水平及MMP-8/TIMP-1比值在牙周炎癥中的臨床價值，現報道如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料根據美國牙周病分類研討會(1999年)提出的慢性牙周炎的相關診斷標準，對牙周相關指數進行記錄，并將2018年7月至2019年7月長春市口腔醫院的75例受試者分為牙周健康組(n=29)、慢性齦緣炎組(n=24)及慢性牙周炎組(n=22)。每名受試者均選取一顆第一或者第二磨牙作為受試牙，其中慢性牙周炎患者每牙選擇牙槽骨吸收量最大點作為受試牙位。3組受試者在性別、年齡方面的差異均無統計學意義(P均>0.05)。

1.2 納入及排除標準納入標準：(1)均符合慢性牙周炎的相關診斷標準；(2)均為首次確診以及住院之前未接受過自主治療者；(3)治療依從性較好，對本研究方案知情；(4)均經醫院倫理委員會批準。排除標準：(1)排除慢性咽喉炎等口腔局部炎性疾病者；(2)住院前3個月之內既往接受過免疫抑制劑或抗生素治療者；(3)孕產婦；(4)不愿接受本研究方案者。

1.3 GCF的采集本研究應用濾紙條法對GCF進行收集，使用電子天平對事先裁剪好的規格為0.2 cm×1 cm的Whatman 3號濾紙條進行稱重。選擇合適的牙位，將上述規格的濾紙條插入到被選牙位的近中頰側齦溝之中，過0.5 min將濾紙條取出，將其置入Eppendorf管之中。1 min之后重復上述操作，將兩次取樣的濾紙條置入同一Eppendorf管之中，進行稱重，然后將其置于-20℃的冰箱中進行保存，待測。

1.4 GCF中MMP-8及TIMP-1檢測方法采用雙抗體夾心ABC-Elisa法對GCF中MMP-8及TIMP-1水平進行檢測，實驗中所使用的試劑盒及試劑均購自于上海鈺博生物科技有限公司。

1.5 觀察指標包括：(1)比較3組GCF體積；(2)比較3組GCF中MMP-8、TIMP-1水平及MMP-8/TIMP-1比值；(3)分析GCF中MMP-8水平與表征牙周相關指標[菌斑指數(PI)、出血指數(BI)、探診深度(PD)及附著喪失(AL)]之間的相關性。

2 結果

2.1 3組GCF體積對比隨著被采牙位炎癥程度增加，GCF體積隨之而增加，P<0.05。見表1。

表1 3組GCF體積比較

2.2 3組GCF中MMP-8、TIMP-1水平及MMP-8/TIMP-1比值對比隨著被采牙位炎癥程度增加，3組受試者GCF中的MMP-8水平隨之而顯著升高(P<0.05)，3組受試者GCF中的TIMP-1水平差異無統計學意義(P>0.05)，3組MMP-8/TIMP-1比值隨之而增大(P<0.05)，見表2。

表2 3組GCF中MMP-8、TIMP-1水平及MMP-8/TIMP-1比值比較

2.3 3組PI、BI、PD、AL比較3組患者PI、BI、PD和AL比較，慢性牙周炎組>齦緣炎組>對照組，差異有統計學意義(P<0.05),見表3。

表3 3組PLI、BI、PD、AL比較

2.4 3組GCF中MMP-8水平與表征牙周相關指標的相關性分析經Pearson秩相關性檢驗分析，GCF中MMP-8水平與表征牙周相關指標(PI、BI、PD及AL)存在顯著的正相關性。見表4。

表4 3組GCF中MMP-8水平與表征牙周相關指標的相關性

3 討論

研究表明宿主炎性介質可對牙周炎引起的牙周組織破壞具有介導作用，即牙周炎可使得破壞牙周組織的炎性細胞因子水平顯著上升[8]。MMPs作為一種有效降解胞外基質的蛋白溶解酶，在牙周組織破壞過程中扮演著十分重要的作用，主要是對牙周支持組織產生降解破壞作用，并參與牙周組織附著喪失及牙槽骨吸收過程。多種MMPs均參與到牙周炎癥進展過程[9]。Rathnayake等[10]指出，隨著牙周炎發病程度增大，GCF中的MMP-8水平也隨之升高，且顯著高于正常牙周組織GCF中濃度(P<0.05)。Marcaccini 等[11]研究結果顯示：慢性牙周炎患者GCF中的MMP-8水平要顯著高于牙周正常患者(P<0.05)。本研究結果也顯示隨著被采牙位炎癥程度增加，3組受試者GCF中的MMP-8水平隨之升高(P<0.05)，此結果提示當牙周出現炎癥時，會促使GCF中的MMP-8水平顯著升高，且隨著炎癥程度增大，MMP-8水平也增加。

從表2可看出，3組受試者GCF中的TIMP-1水平差異無統計學意義(P>0.05)。TIMP-1作為MMP-8的抑制劑，其對MMP-8有抑制作用，近年來在牙周疾病發病機理的研究中也成為一個熱點。TIMPs與MMPs之間的平衡，能夠對胞外基質的重塑起到調節效果，若二者失衡，則會引起組織的吸收。相關文獻報道[12]，在健康牙周組織中，TIMP-1水平較高，但在牙周組織早期炎性病變時，TIMP-1水平則較低。然而，也有與之相反的結論，即在牙周組織發生炎癥時，TIMP-1則處于較高水平，從而有效抑制MMPs對牙周組織的破壞作用[13-15]。Marcaccini等[11]通過研究發現慢性牙周炎患者GCF中的TIMP-1與牙周正常者差異無統計學意義，然而慢性牙周炎與牙周正常者MMP-8/TIMP-1比值存在顯著的統計學意義，并推論MMP-8水平上升為引起上述比值失衡的主要原因。本研究中3組受試者GCF中的TIMP-1水平差異無統計學意義(P>0.05)，隨著牙周病變程度的加大，3組MMP-8/TIMP-1比值隨之增大(P<0.05)。

關于GCF中MMP-8水平與主要牙周指標間的相關性，有研究結果顯示[16]，慢性牙周炎患者在經相關治療后，GCF中的MMP-8水平顯著降低，且同PI、BI、PD及AL等牙周相關指標之間存在一定的關聯性。臨床上，一般將PI、BI、PD及AL等指標作為評價牙周狀況的重要指標，隨著牙齦炎癥癥狀的加重，牙周指數明顯增大。有研究證實[17]，在通過有效的牙周治療之后牙周炎患者的齦溝液中 MMP-8、水平會明顯降低，而本研究結果顯示，隨著牙周炎癥程度增大，牙周臨床指數也會增大，患者GCF中的MMP-8水平也會隨之而升高，經Pearson相關性分析結果顯示，GCF中MMP-8水平與上述牙周指標之間存在正相關性。提示GCF中的MMP-8水平與牙周嚴重程度有很大關系，可作為評估牙周組織破壞程度的指標。

綜上所述，隨著牙周炎嚴重程度的增加，GCF中的MMP-8/TIMP-1比值隨之而增加，因此，該比值對牙周炎的臨床診斷具有重要的指導價值。