CV-A16型手足口病患兒血清TNF-α、內毒素水平與高熱驚厥發生的相關性分析*

李亞鵬，李 琴，李 莉，楊 拳

四川省遂寧市中心醫院兒科，四川遂寧 629000

手足口病好發于5歲以下兒童，是一種由腸道病毒感染引起的急性傳染性疾病，主要臨床表現為手、足、口咽部發生皰疹，有些情況下可能出現發熱等癥狀，一般情況患兒預后良好，少數患兒進展為重癥病例，可能會發生驚厥、腦炎、神經源性肺水腫等，嚴重者可危及生命[1-2]。柯薩奇病毒A組16(CV-A16)型是引起手足口病的主要病原體之一，患兒感染此病毒后臨床癥狀較輕，但具有較高的發病率[3]。高熱驚厥是兒科常見的一種急性代謝性疾病，通常指小兒中樞神經系統以外的感染導致體溫超過38 ℃發生的驚厥[4]，是手足口病患兒常見的并發癥。手足口病患兒可能會出現長時間驚厥和驚厥持續狀態，嚴重者可能導致驚厥性腦損傷，影響患兒健康。內毒素是革蘭陰性菌菌體裂解后釋放出的毒素，又被稱為“熱原”。有研究表明，手足口病患兒內毒素水平明顯高于健康者[5]。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是一種多功能細胞因子，能夠參與包括細胞增殖、分化和死亡多個生物學過程[6]。有研究表明，重癥組手足口病患兒血清TNF-α水平高于輕癥組與健康對照組[7]。內毒素能夠作用于體內的巨噬細胞、中性粒細胞等產生TNF-α等細胞因子，細胞因子作用于下丘腦的體溫調節中樞，導致人體體溫升高而致發熱。目前，對手足口病患兒驚厥發生的機制尚不清楚，TNF-α與內毒素是影響手足口病發生的生物學因子。本研究通過檢測CV-A16型手足口病患兒血清TNF-α與內毒素水平，分析二者與CV-A16型手足口病患兒發生高熱驚厥的相關性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2018年12月至2021年10月本院收治的100例CV-A16型手足口病患兒作為研究對象，其中男56例，女44例；年齡0.5～5.0歲，平均(2.36±0.58)歲。根據是否發生高熱驚厥[8]分為高熱驚厥組(39例)和非高熱驚厥組(61例)。高熱驚厥組男21例，女18例，年齡0.5～5.0歲，平均(2.28±0.50)歲；非高熱驚厥組男35例，女26例，年齡0.5～5.0歲，平均(2.41±0.63)歲。納入標準：(1)患兒均符合《手足口病診療指南(2018年版)》[9]中的手足口病診斷標準；(2)經病原菌檢測為CV-A16型手足口病。排除標準：(1)以往發生過驚厥或癲癇的患兒；(2)父母曾有過驚厥或癲癇史的患兒；(3)合并其他病原感染的患兒；(4)合并有腦炎等嚴重神經系統癥狀的患兒。另選取同期在本院健康體檢的52例兒童作為對照組，其中男30例，女22例；年齡0.5～6.0歲，平均(2.45±0.67)歲。3組受試者性別、年齡比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。所有受試者及其監護人均知情同意并簽署知情同意書，本研究經本院倫理委員會批準實施。

1.2試劑與儀器 TNF-α酶聯免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(型號：ab181421)、顯色基質法鱟試劑盒(型號：AT7571-10T)均購自艾博抗(上海)貿易有限公司；酶標儀(型號：JC-MB68)、紫外可見分光光度計(型號：Alpha-1860Plus)、全自動生化分析儀(型號：URIT-8401)均購自濟南澤凱醫療器械有限公司。

1.3方法

1.3.1標本采集 CV-A16型手足口病患兒于入院第2天清晨、對照組兒童于體檢當天清晨抽取空腹靜脈血4 mL，其中2 mL用于檢測實驗室指標，剩余2 mL在4 ℃下以3 000 r/min離心15 min，轉移上清液至新離心管中，置于-20 ℃冰箱備用。

1.3.2實驗室指標檢測 采用全自動生化分析儀檢測血液中性粒細胞比例及血清鉀(血鉀)、血清鈉(血鈉)、血漿鈣(血鈣)、血清鎂(血鎂)水平。

1.3.3血清TNF-α、內毒素水平檢測 采用ELISA試劑盒對血清TNF-α水平進行檢測，使用酶標儀檢測450 nm波長處的A值，根據標準品濃度繪制標準曲線，并利用回歸方程計算血清TNF-α水平。采用改良基質偶氮顯色法對血清內毒素水平進行檢測，使用紫外可見分光光度計測定545 nm波長處的A值，并通過標準曲線計算血清內毒素水平。

2 結 果

2.1對照組、非高熱驚厥組和高熱驚厥組實驗室指標水平比較 對照組、非高熱驚厥組和高熱驚厥組中性粒細胞比例依次升高，血鈣和血鎂水平依次降低，差異均有統計學意義(P<0.05)；3組血鉀和血鈉水平比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 對照組、非高熱驚厥組和高熱驚厥組實驗室指標水平比較

2.2對照組、非高熱驚厥組和高熱驚厥組血清TNF-α、內毒素水平比較 對照組、非高熱驚厥組和高熱驚厥組血清TNF-α、內毒素水平均依次升高，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 對照組、非高熱驚厥組和高熱驚厥組血清TNF-α、內毒素水平比較

2.3CV-A16型手足口病患兒血清TNF-α與內毒素水平的相關性分析 CV-A16型手足口病患兒血清TNF-α水平與內毒素水平呈正相關(r=0.486，P<0.001)，見圖1。

圖1 CV-A16型手足口病患兒血清TNF-α水平與內毒素水平的相關性分析

2.4多因素Logistic回歸分析CV-A16型手足口病患兒發生高熱驚厥的影響因素 多因素Logistic回歸分析結果顯示，血清TNF-α、內毒素水平升高是CV-A16型手足口病患兒發生高熱驚厥的獨立危險因素(P<0.05);而血鈣、血鎂水平升高是CV-A16型手足口病患兒發生高熱驚厥的獨立保護因素(P<0.05)。見表3。

表3 多因素Logistic回歸分析CV-A16型手足口病患兒發生高熱驚厥的影響因素

2.5血清TNF-α、內毒素水平對CV-A16型手足口病患兒發生高熱驚厥的診斷價值 ROC曲線分析結果顯示，血清TNF-α、內毒素單項和二者聯合檢測診斷CV-A16型手足口病患兒發生高熱驚厥的AUC分別為0.810、0.765、0.930，二者聯合檢測優于單項檢測(P<0.05)。見表4、圖2。

表4 血清TNF-α、內毒素水平對CV-A16型手足口病患兒發生高熱驚厥的診斷價值

3 討 論

CV-A16型是引起手足口病的主要腸道病毒，其感染人體后，能夠與咽部和腸道上皮細胞表面相應的病毒受體結合，經細胞內吞作用進入細胞，在患兒體內進行復制和擴散后作用于相應的細胞和組織，從而引起患兒組織和器官發生一系列炎癥反應[10]。中性粒細胞是機體抵御感染入侵的一種特殊白細胞，中性粒細胞增多與急性感染和炎癥非反應有關，并且增加程度與感染程度也有一定關系[11]。中性粒細胞比例是炎癥反應的一項可靠指標，有研究表明其與兒童多種感染性疾病有關[12-13]。本研究結果顯示，對照組、非高熱驚厥組和高熱驚厥組中性粒細胞比例依次升高，提示CV-A16型手足口病患兒存在炎癥反應，且CV-A16型高熱驚厥手足口病患兒炎癥反應更嚴重。有研究表明，血鈣、血鎂水平降低與小兒熱性驚厥的發作有一定關系[14-15]。本研究結果顯示，對照組、非高熱驚厥組和高熱驚厥組血鈣和血鎂水平依次降低，多因素Logistic回歸分析結果顯示，血鈣、血鎂水平升高是CV-A16型手足口病患兒發生高熱驚厥的獨立保護因素，提示低血鈣、低血鎂可能是CV-A16型手足口病患兒發生高熱驚厥的因素之一，患兒發生高熱驚厥時，需要進一步檢查血液電解質水平，維持機體內環境穩定，從而盡可能避免驚厥發生[16]。

TNF-α主要由活化的單核細胞和巨噬細胞產生，是能夠促進細胞增殖和分化的一種重要炎癥因子，與多種炎癥性疾病的發生有關[17]。張榮等[18]研究表明，TNF-α參與手足口病的發病，手足口病患兒血清TNF-α水平明顯高于健康者，隨著病情加重，TNF-α水平逐漸升高。本研究結果顯示，CV-A16型手足口病患兒血清TNF-α水平明顯高于健康兒童，與以上研究結果一致[17]，原因可能是因為TNF-α的過量表達形成過度炎癥反應，從而導致機體免疫失衡，進而參與手足口病發生的某一機制。陳豪等[19]研究表明，高熱驚厥患兒血清TNF-α水平高于健康者，血清TNF-α水平升高與高熱驚厥的發生有關。本研究結果顯示，高熱驚厥組血清TNF-α水平明顯高于非高熱驚厥組，多因素Logistic回歸分析結果顯示，血清TNF-α水平升高是CV-A16型手足口病患兒發生高熱驚厥的獨立危險因素，提示TNF-α可能與患兒高熱驚厥的發生有關，原因可能是因為TNF-α對炎癥反應的促進作用，具體機制有待進一步研究。

徐鵬飛等[20]研究發現，腸黏膜屏障功能損傷與手足口病的發生有一定關系，手足口病患兒腸屏障功能受損導致腸道通透性增加，從而使腸道病毒有機會入侵機體并大量繁殖，使手足口病病情加重。本研究結果顯示，CV-A16型手足口病患兒血清內毒素水平明顯高于健康兒童，與權亞利[5]的研究結果一致，原因可能是因為CV-A16型感染致患兒腸道屏障功能受損，導致內毒素水平升高。內毒素是革蘭陰性菌細胞壁中的一種成分，也被稱之為脂多糖。有研究表明，Toll樣受體4可以活化核因子-κB信號通路，導致TNF-α等炎癥細胞因子合成與釋放，促進炎癥反應發生[21]。本研究結果顯示，CV-A16型手足口病患兒血清TNF-α水平與內毒素水平呈正相關，可能是因為內毒素作用于體內的巨噬細胞產生TNF-α等細胞因子。本研究還發現，CV-A16型高熱驚厥手足口病患兒血清內毒素水平明顯高于CV-A16型非高熱驚厥患兒，內毒素水平升高是CV-A16型手足口病患兒發生高熱驚厥的獨立危險因素，提示內毒素可能通過影響TNF-α的表達水平，導致患兒炎癥因子水平升高，從而引起體溫升高，患兒出現高熱時可能引起血漿鈣離子濃度下降，進而可能會導致高熱驚厥發生。此外，本研究的ROC曲線分析結果顯示，血清TNF-α、內毒素均可作為診斷CV-A16型手足口病患兒發生高熱驚厥的有效指標，且二者聯合檢測診斷價值更高。當血清TNF-α水平≥142.38 pg/mL和血清內毒素水平≥1.05 EU/mL時，CV-A16型手足口病患兒更易發生高熱驚厥，臨床應密切關注血清TNF-α、內毒素水平異常升高的患兒，以便早期防治高熱驚厥。

綜上所述，CV-A16型手足口病患兒血清TNF-α和內毒素水平均呈高表達，二者與患兒高熱驚厥的發生有一定關系，可能為研究CV-A16型手足口病患兒高熱驚厥的發生機制提供一定參考。但本研究納入CV-A16型手足口病患兒數相對較少，且患兒血清TNF-α和內毒素水平的相關性較低，今后將收集更多的患兒以驗證血清TNF-α和內毒素水平的相關性，并分析二者在CV-A16型手足口病發病過程中的具體機制。