納西東巴醫學中的因“穢”致病理論與“除穢”防病機理的數據整理研究

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1.山西中醫藥大學基礎醫學院，山西 晉中 030619； 2.云南省麗江市民族醫藥協會，云南 麗江 674100；3.中央民族大學藥學院，北京 100081； 4.云南省麗江市農業科學研究所，云南 麗江 674100；5.云南省玉龍縣非遺中心，云南 玉龍 674100； 6.云南省中藥新資源開發研究協同創新中心，云南 昆明 650051;7.中國中醫科學院中藥研究所，北京 100700

納西族起源于我國西北河(黃河)湟(湟河)地帶的古羌人，是云南特有的少數民族之一，主要聚居在云南麗江[1]。納西族使用著世界上僅存的象形文字，人們稱之為“東巴象形文字”。“東巴”是納西族東巴文化的主要傳承人，掌握一些醫藥知識和常見疾病的診治。千百年來，納西族先民用古老的象形文字書寫了大量的東巴經，這些經卷記錄了哲學、歷史、醫學等方面的內容，被譽為納西族的“百科全書”。其中，有大量東巴經反映了遠古時期與醫藥文化相關的內容，是納西族先民對生命、健康、醫藥的樸素認識，對于研究納西醫藥具有重要意義[2-3]。

納西先民在與疾病斗爭的過程中形成了豐富的醫藥理論、治病經驗和防病知識。在納西先民的病因理論中，“穢”在生命活動中是一個產生和傳播疾病的根源，是對不吉利、不干凈等東西的泛指[4]。他們認為“穢”的產生原因不僅是自然氣候的反常變化和環境衛生不良，也有動物異常死亡等。根據納西族東巴經古籍文獻有關除穢的記載，納西族先民將小葉杜鵑、大葉杜鵑、云杉、松、蒿草等5種植物作為除穢的主要材料，點燃這些植物熏消居住環境，通過除穢以祛除外邪，減少疾病的發生，這種理念和實踐一直延續至今。

CTD數據庫(Comparative Toxicogenomics Database，http://ctdbase.org)是由外部化學物質、基因、疾病和通路等資源組成的多功能數據庫，收錄了許多化學物質與蛋白質或基因的相互作用關系、化學物質與疾病關系以及基因與疾病關系的數據，其旨在促進環境化學品對人類健康影響的理解[5]。通過該數據庫可以獲得環境中化學物質的潛在作用靶點，所以文章在梳理納西東巴古籍有關“穢”及“除穢”方法的原始記載的基礎上，借助該數據庫并結合網絡藥理學的分析方法探討納西族除穢所使用的主要植物發揮作用的分子機制。

1 東巴經中對“穢”及“除穢”的記載

總之，納西東巴認為“穢”的產生歸因于自然氣候的反常變化(干凈的霧氣和不干凈的霧氣相交產生)、環境衛生不良(干凈的雨水、空氣和污穢的雨水、空氣相交產生，人畜死亡導致的致病微生物)、社會因素(如戰亂)等。習煜華[7]將其歸納為四個方面：一是污染環境的臟物，如垃圾、死尸、污濁的空氣等；二是危害人體健康的感染性疾病，如爛瘡等；三是生活中出現的反常現象，如動物感染病毒死亡等；四是違反倫理道德和風俗習慣的行為而引起的后果，如近親結婚的害處。

除穢是納西族古老的傳統，在東巴經中占據很大份量，東巴在所有的祭祀儀式開始之前要先進行除穢活動[8]。《納西東巴古籍譯注全集第22卷·禳剁鬼大儀式·給盧神沈神除穢經》較為詳細地講述了納西先民用小葉杜鵑、大葉杜鵑、云杉、松、蒿草等5種植物(或添加其他除穢植物)制成除穢火把熏除祭祀物件、人類的居住環境和人身上的穢氣，使穢氣消散，環境得以凈化[9]。“除穢”不僅僅存在于東巴的儀式中，也滲透在人們的日常生活中，納西族人平時也會焚燒一些除穢植物，保持環境衛生的清潔，以預防疾病的發生。

圖1 東巴經《大解穢經·穢氣的出處來歷》封面圖

2 網絡藥理學預測除穢植物預防疾病的潛在靶點及作用機制

2.1 材料與方法

2.1.1 植物成分的獲取和靶點的預測 經第四次全國中藥資源普查納西普查隊相關專業人員的鑒定，確定了東巴經中5種除穢植物的基源。根據除穢植物的使用特點，在中國知網(CNKI，https://www.cnki.net/)檢索小葉杜鵑(RhododendronfastigiatumFranch.)、大葉杜鵑(RhododendronwardiiW.W.Smith)、云杉(Picealikiangensis(Franch) Pritz.)、松(PinusmassonianaLams.)、蒿草(ArtemisiaannuaLinn.)5種植物的揮發性成分；將CNKI檢索獲得的揮發性成分依次輸入CTD數據庫獲得上述揮發性成分作用的靶點。

2.1.2 PPI網絡構建及篩選核心PPI 將5種除穢植物的潛在作用靶點導入STRING(https://string-db.org/)數據庫構建植物靶點PPI(protein-protein interaction)網絡，應用Cytoscape 3.6.0軟件NetworkAnalyzer功能和CytoNCA插件分析拓撲特征，依次以度值(degree)大于2倍中位數，介度(betweenness)、緊密度(closeness)、度值(degree)均大于中位數為卡值提取核心PPI網絡及關鍵靶點[10]。

2.1.3 靶點富集分析 利用DAVID 6.8數據庫(https://david.ncifcrf.gov/)對關鍵靶點進行GO注釋分析、KEGG通路富集分析和蛋白相互作用富集分析。根據P值取前20的通路,利用Omicshare(https://www.omicshare.com/)在線分析平臺繪制氣泡圖。

2.2 結果

2.2.1 除穢主要植物的揮發性成分及靶點 在CNKI僅獲得蒿(ArtemisiaannuaLinn.)和松(PinusmassonianaLams.)兩種植物的揮發性成分，其中蒿的揮發性成分15個[11]、松的揮發性成分13個[12]，祛除重復項得25個。在CTD數據庫依次檢索25個揮發性成分作用的靶點，僅獲得8個揮發性成分的1550個靶點，見表1所示。

表1 除穢主要植物的揮發性成分、靶點

2.2.2 網絡構建與分析 將植物靶點導入String數據庫構建植物靶點PPI網絡，應用Cytoscape 軟件Network Analyzer功能和Cyto NCA插件分析拓撲特征，依次以度值(degree)大于38、介度(betweenness)大于160.44、緊密度(closeness)大于0.510、度值(degree)大于60為卡值提取核心網絡及關鍵靶點，獲得關鍵靶點164個。

2.2.3 關鍵靶點的富集分析結果 將164個關鍵靶點導入DAVID進行KEGG通路富集分析，其結果(P<0.05)涉及乙型肝炎(Hepatitis B)、FoxO信號通路(FoxO signaling pathway)、HIF-1信號通路(HIF-1 signaling pathway)、人T細胞白血病病毒1感染(HTLV-I infection)、美國錐蟲病 (American trypanosomiasis)、TNF信號通路(TNF signaling pathway)、胰島素抵抗(Insulin resistance) 、甲型流感(Influenza A)、p53信號通路(p53 signaling pathway)、病毒致癌(Viral carcinogenesis)、弓形蟲病(toxoplasmosis)、甲狀腺激素信號通路(thyroid hormone signaling pathway)等111條信號通路。

通過 DAVID 中作蛋白相互作用富集分析，在protein interactions選項中選擇HIV_INTERACTION為背景數據，設定統計指標為P<0.05，發現有138個靶標與12個HIV病毒蛋白之間具有顯著密集的相互作用。

根據P值選取排名前20的通路，利用Omicshare在線平臺繪制氣泡圖，如圖2所示。

圖2 除穢主要植物的關鍵靶點富集的KEGG通路圖

3 討論

有研究[13-14]表明，煙熏消毒是非口服中藥預防控制傳染病通過空氣傳播的主要手段之一，是中國傳統的預防疫病的方法；中藥燃香可有效減少空氣中菌落數，達到空氣消毒的效果。由于地域和自然資源的差異，各個民族均有自己的使用經驗，只是焚燒的材料不同。如漢族使用蒼術、甘松、川芎、乳香、降香及北細辛等[13]；彝族使用桉樹葉、側柏葉、艾葉、青蒿、野巴子、透骨草、野艾蒿等；蒙古族使用十一味云香散；壯族使用蒼術、艾葉、大葉桉等；傣族使用艾蒿、香茅草等；土家族使用艾條、大黃、茵陳、瓜蔞殼、檳榔殼等；羌族焚燒茹瑪等[15]。此外，多項臨床研究表明，用草藥燃燒的煙氣熏蒸皮膚病患病部位，具有祛風除濕、殺蟲止癢、軟堅潤膚、回陽生肌、通經活絡的功效，可用于紅斑鱗屑性皮膚病、變態反應性皮膚病、神經障礙性皮膚病、病毒性皮膚病等多種慢性、頑固性皮膚病的治療[16]。煙熏療法治療鼻炎、咽痛、喉炎、急慢性咳嗽、各型支氣管炎和各期慢阻肺等呼吸系統疾病，可有效緩解癥狀[17]。

“瘟癘”“疫癘”“瘟疫”“穢”“惡”等為古代疫病的范疇，包括了西醫學的傳染病以及一些西醫學未命名的具有傳染性和流行性的疾病[13，18]。納西醫藥中穢邪因自然氣候反常變化等氣候因素，環境衛生不良等環境因素產生，且具有致病性和傳染性，可以歸屬于“疫病”范疇。與傳染病的斗爭經驗使得中醫形成了獨具特色和優勢的疫病防治理論。疫邪與六淫共同構成了中醫的外感病因。盡管疫邪也有風、寒、熱、濕等性質之不同，但疫邪顯著區別于六淫的地方在于其基本不受體質強弱影響的傳染性和發病后的高度相似性[19]。林明欣等[13]基于文獻和數據挖掘的方法對古代非口服中藥防控經空氣傳播的疫病方藥進行統計分析，發現古代醫家認為疫病的病機是感染風邪、毒邪和蟲邪，防控疫病主要使用辛溫藥、芳香藥、殺蟲藥、苦寒藥。中國古代煙熏避疫方藥的功效配伍以祛風、燥濕、殺蟲、解毒為主[20]。

根據納西族東巴古籍的記載和第四次全國中藥資源普查納西醫藥普查隊對民間醫生的采訪，除穢主要植物中小葉杜鵑具有祛風除濕、殺蟲、止咳祛痰、暖胃止痛、消炎的功效，可以治療咳嗽、牛皮癬；大葉杜鵑具有祛風除濕、殺蟲、止血、止帶、消炎、殺菌的功效，可以用來治療胃痛、外傷出血、白帶異常；蒿具有清熱解毒、祛瘀止痛、殺蟲、涼血退熱、退黃、清虛熱、除骨蒸、清熱解暑、截瘧等功效，可以治療中暑、痔瘡、感冒、瘧疾、皮膚瘙癢等；松具有祛風除濕、殺蟲、舒筋活絡、活血止痛、止癢、消炎生肌、醒腦安神的功效，可以用來治療支氣管炎、肺結核、眩暈、預防流行性腦脊髓膜炎等；云杉具有寧心安神的功效，可以治療癲癇、胸腹冷痛、發痧、高血壓、關節酸痛、頭痛、疝氣等。5種除穢植物基本兼具祛風、除濕、殺蟲、解毒的功效，契合疫病的病機，與煙熏避疫方用藥規律的研究結果一致，理論上可以用來預防疫病。

根據網絡藥理學分析結果，KEGG通路主要包括乙型肝炎、FoxO信號通路、HIF-1信號通路、人T細胞白血病病毒1感染、美國錐蟲病、TNF信號通路、胰島素抵抗、甲型流感、p53信號通路、病毒致癌、弓形蟲病、甲狀腺激素信號通路等。其中一部分疾病類通路與病毒感染相關，如乙型肝炎、病毒致癌、甲型流感、HTLV-I感染，有138個靶標與HIV病毒的12個蛋白具有相互作用，說明納西族除穢植物可能有一定的抗病毒作用；一部分通路和炎癥反應相關，如FoxO信號通路[21]、HIF-1信號通路[22]、TNF信號通路，說明納西族除穢植物可能對抗炎有一定作用。東巴經文中記載的“穢”是對不吉利和不干凈的總稱，自然包括細菌、病毒等不利于身體健康的有害物質。古代納西族先民認為，穢邪是生命活動中疾病產生和傳播的源頭，因此“除穢”是東巴祭祀活動的主要儀式，也是納西族人民的生活習俗[6]。除了進行除穢儀式外，人們通常直接使用一些芳香類植物制作成香燃燒，或將其懸掛在窗邊或門口，或將其制成香囊隨身攜帶，通過這些植物散發出來的芳香氣味來消除細菌、病毒，避免蛇蟲等咬傷，或愉悅心情。除穢雖然是原始宗教性質的活動，但實質上是消除細菌病毒、保持環境衛生的活動。

綜上，納西族除穢植物可能通過多種揮發性成分作用于多靶點抑制病毒、調節炎癥反應，發揮消毒殺菌、預防疫病的作用。文章僅基于網絡藥理學初步探討了納西族除穢預防疾病的合理性，但由于可納入分析的數據不充分以及研究方法的局限性，難以準確評估其預防效果和作用機制，今后還需要利用現代科學技術和方法開展深入的研究，以明確納西族除穢植物防病治病的效果和作用機理，以利于更廣泛地推廣和應用。