瑤藥白九牛生藥學研究

廣西中醫藥大學藥學院，廣西 南寧 530200

瑤族在廣西是僅次于壯族人口的第二大少數民族，瑤族先民在生產生活實踐中發展壯大了瑤醫藥，因此在廣西研究瑤藥具有一定的地理優勢。在傳統瑤藥中，最具特色的是瑤醫老班藥“五虎、九牛、十八鉆、七十二風”，白九牛屬于“九牛”之一，其名稱“白九牛”始載于《中國瑤藥學》[1]。瑤藥白九牛，瑤語名“別坐翁”，別名七葉蓮、那藤、牛藤、七葉那、五葉風、七姐妹、野木瓜等，為木通科野木瓜屬植物五指那藤StauntoniaobovatifoliolaSubsp.intermedia(Y.C.Wu) T.Chen的干燥藤莖，分布于廣東、廣西、湖南等地，具有祛風止痛、舒筋活絡、消腫散毒、清熱利尿的功效，主要用于治療風濕骨痛、三叉神經痛、坐骨神經痛、胃痛、手術后疼痛、跌打損傷、水腫、急性腎炎、尿血、乳腺增生等癥，屬于瑤醫理論中的“風打相兼”藥[2]。研究[3]證實，五指那藤含白樺脂酸、木通種酸等多種活性成分，能夠有效抑制HIV蛋白酶[4]，但在藥材鑒別研究方面未見報道。為進一步研究五指那藤植物，實驗收集11批次廣西、湖南、湖北、福建4的白九牛藥材，對其進行生藥學研究，以期為白九牛藥用資源的開發利用，建立質量標準提供參考依據。

1 儀器與材料

1.1 儀器 RM2145半自動輪轉切片機(德國徠卡儀器公司)；DM2500光學生物顯微鏡(德國徠卡儀器公司)；DFC500圖像分析系統(德國徠卡儀器公司)；ZF-20C暗箱三用紫外分析儀(上海精密儀器儀表有限公司)。

1.2 材料 薄層色譜硅膠G板(批號：20200428，青島海洋化工有限公司)。白九牛藥材采自廣西賀州市步頭鎮甘洞，經廣西中醫藥大學壯醫藥學院韋松基教授鑒定為木通科野木瓜屬植物五指那藤StauntoniaSubsp.intermedia(Y.C.Wu) T.Chen的藤莖，標本存于廣西中醫藥大學壯瑤藥重點實驗室。其余產地藥材見表1。

表1 白九牛樣品信息

2 方法與結果

2.1 性狀鑒別 本品呈長圓柱形，直徑3 ～ 5 cm；表面灰黃色至灰褐色，粗糙，具不規則縱溝紋；皮部易剝離，質地堅韌，不易折斷；橫切面具放射狀紋理和密集小孔，皮部棕褐色，木部灰黃色；髓部呈黃白色，圓形；氣微，味略苦。主要鑒別點為表面具有不規則縱溝紋；橫切面具放射狀紋理和密集小孔；髓部黃白色，圓形。原植物如圖1所示，藥材如圖2所示。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 莖橫切面切片特征 木栓層為多列類長方形細胞，細胞排列緊密而整齊，含多數散在石細胞；靠近皮層處石細胞群列成環狀，皮層窄小，細胞排列疏松；韌皮部較寬，形成層不明顯，木質部寬廣；射線寬廣，有石細胞散在；髓部細胞類圓形，可以觀察到薄壁組織中含有淀粉粒和草酸鈣方晶。如圖3所示。

圖1 白九牛藥材原植物圖

圖2 白九牛藥材圖

注：1.木栓層；2.石細胞群；3.皮層；4.韌皮部；5.木質部；6.射線；7.髓部圖3 白九牛橫切面的顯微圖

2.2.2 粉末特征 粉末為淺黃色。具緣紋孔導管碎片較多，偶見螺紋導管；石細胞較多，呈類圓形、方形、類長方形，壁厚，散在或成群分布；木纖維呈長梭形，晶鞘纖維易察見；草酸鈣方晶易察見。如圖4所示。

1.石細胞群；2.石細胞；3.纖維；4.草酸鈣方晶；5.淀粉粒；6.導管圖4 白九牛的顯微粉末圖

2.3 薄層色譜鑒別

2.3.1 供試品溶液的制備 采用單因素試驗法，以白九牛對照藥材為對照，對石油醚、乙酸乙酯、乙醇、水四種不同提取溶劑，對水浴回流30 min、超聲30 min及冷浸12 h三種不同提取方式進行比較。結果表明用乙酸乙酯作為溶劑、采用回流法提取供試品溶液展開效果為佳。

2.3.2 薄層色譜條件 優選分別對薄層硅膠G板、薄層硅膠H板、薄層硅膠HF254三種不同吸附劑進行展開效果的比較試驗，結果以薄層硅膠G板為吸附劑展開效果較好；分別以石油醚-乙酸乙酯-甲酸(9∶3∶0.2)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(9∶5∶0.2)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(10∶2∶0.2)為不同展開系統，進行展開效果的比較，結果將石油醚-乙酸乙酯-甲酸(9∶3∶0.2)作為展開劑時，展開效果較好，Rf值適中；分別以10%磷鉬酸乙醇溶液、10%硫酸乙醇溶液、10%硫酸香草醛等三種不同顯色劑顯色，對顯色結果進行比較，結果以10%磷鉬酸乙醇為顯色劑顯色效果更好。

2.3.4 白九牛的薄層色譜鑒別 按供試品溶液的制備及薄層色譜條件優化結果，取白九牛粉末1 g，加入乙酸乙酯20 mL，以水浴回流法提取30 min后過濾，濾液蒸干，并定容至1 mL容量瓶中，作為供試品溶液。另取白九牛對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。按薄層色譜法試驗，在同一硅膠G薄層板上，取供試品溶液和對照藥材溶液點樣量各10 μL，以石油醚-乙酸乙酯-甲酸(9∶3∶0.2)展開，取出，晾干，在紫外燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，出現相同顏色的斑點。如圖5所示。

注：1、12為白九牛對照藥材；2-11白九牛藥材樣品圖5 白九牛TLC圖

2.4 水分測定 照《中國藥典》2020版“水分測定法(烘干法)”進行測定，測定11批白九牛樣品的水分含量為6.7%～10.4%，結果見表2。考慮到不同產地和不同季節樣品對藥材質量的影響因素，故建議控制本品水分不得過12.4%。

表2 水分、總灰分、浸出物測定結果

2.5 總灰分測定 照《中國藥典》2020版“灰分測定法”項下總灰分測定法進行測定，測定樣品總灰分在2.8% ～ 5.4%。結果見表2。故建議本品總灰分不得過6.5%。

2.6 浸出物測定 照《中國藥典》2020版“浸出物測定法”項下的熱浸法進行測定，實驗通過考察水和乙醇兩種不同提取溶劑，考察冷浸和熱浸兩種不同提取方法，浸出率以30%乙醇熱浸得率最高，故選擇30%乙醇作為溶劑。測定樣品浸出物含量為8.9%～14.9%。結果見表2。故建議本品浸出物不得低于7.1%。

3 討論

課題組在查閱文獻中發現，白九牛基原主要涉及到木通科野木瓜屬4種植物：五指那藤[5-7]、尾葉那藤[8-10]、牛藤[11]和瑤山野木瓜[9]，基原種類繁多。在深入瑤族聚居地區如金秀瑤族自治縣、恭城瑤族自治縣等采集白九牛藥材和調研過程中發現，當地白九牛的藥用品種主要是兩種：五指那藤和尾葉那藤。《廣西壯族自治區瑤藥材質量標準》[12]已將尾葉那藤作為白九牛基原品種收錄其中。基于對中藥資源的充分利用考慮，實驗對五指那藤開展生藥學研究，為擴大白九牛藥用資源提供科學依據。另外，五指那藤作為藥材“野木瓜藤”和同屬植物短藥野木瓜、鈍藥野木瓜被收載入《貴州省中藥材、民族藥材質量標準》[13]中，但是標準僅收錄了野木瓜藤的性狀鑒別，因此開展五指那藤的生藥學鑒別研究仍具有一定的科學意義。

實驗建立了白九牛的生藥學鑒別方法，從結果中可知，其顯微鑒別特征明顯，切面射線呈放射狀排列；粉末中石細胞常數個成群，具緣紋孔導管較多。

研究根據文獻篩選不同的對照品如白樺脂酸、木通苯乙醇苷B等，擬作為白九牛薄層色譜鑒別的對照物質，但經過試驗，未取得良好效果，推測原因是白樺脂酸、木通苯乙醇苷B與乙酸乙酯的極性差異較大，以乙酸乙酯提取出的薄層色譜鑒別供試液不含此類成分或含量較低，故本研究僅確定以白九牛對照藥材作為薄層色譜鑒別的參照物。實驗中對建立的白九牛薄層色譜鑒別方法的耐用性進行了考察，對不同展開溫度(25 ℃和40 ℃)、不同展開濕度(26%和56%)以及不同點樣方式(點狀和條帶點樣)等進行薄層層析行為的考察，結果均表明本研究建立的薄層色譜方法對上述不同展開溫度、不同濕度和不同點樣方式均顯示較好的薄層層析效果，說明該法耐用性良好。研究中考察了不同顯色劑，出于對經濟和環保的考慮，因此選擇直接在紫外光(365 nm)下觀察。

綜上，實驗確定了白九牛的主要鑒別特征，其性狀和顯微特征明顯，對藥材的鑒定工作具有實際的指導意義。研究還建立了白九牛的薄層鑒別方法，該法重復性好、耐用性佳，簡便易行。測定采集的11批白九牛的水分、總灰分、浸出物的測定結果，可參考這些項目的檢查結果，擬定相關檢查項的限度。在對白九牛生藥學鑒別研究的基礎上，下一步可對其藥效學、藥理學及臨床應用方面進行研究，為合理開發利用白九牛提供參考依據。