多囊卵巢綜合征患者的卵母細胞質量與胚胎發育潛能關系的研究

蔡嬌嬌 楊歡利 陸文昊 沈秀珍 諸溢揚

多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）是一種常見的內分泌疾病，我國育齡期女性患病率為5.16%[1]。PCOS患者的甾體激素合成異常，糖、脂代謝機制受損，對患者進行促排卵治療后，卵母細胞的質量和發育潛能可能受到影響。既往研究顯示PCOS患者卵母細胞成熟度和受精率降低，胚胎著床率也降低[2-3]，也有研究表明PCOS患者的囊胚形成率和累積活產率并沒有受到影響[4]。因此，對于PCOS患者卵母細胞質量與胚胎發育潛能的關系，臨床并沒有定論。本文通過回顧性分析PCOS患者的各項數值，探討輔助生殖技術中PCOS對患者卵母細胞和胚胎發育潛能的影響，現報道如下。

1 對象和方法

1.1 對象 選取2019年1月至2021年12月在浙江省臺州醫院生殖醫學中心接受體外受精（in vitro fertilization,IVF）助孕的患者242例作為研究對象。納入標準：（1）女方年齡＜35歲；（2）長方案或拮抗劑方案促排卵治療；（3）受精方式為常規IVF。排除女方卵巢早衰患者、男方精液嚴重質量異常患者以及處于卵胞漿內單精子注射（intracytoplasmic sperm injection,ICSI）受精周期者。其中PCOS患者95例（PCOS組），單純輸卵管因素不孕患者147例（對照組）。PCOS診斷標準[5]：（1）稀發排卵或無排卵；（2）高雄激素的臨床表現和（或）高雄激素血癥；（3）卵巢多囊樣改變：B超檢查一側卵巢或雙側卵巢直徑2～9 mm的竇卵泡數≥12個，和（或）卵巢體積≥10 ml。上述條件符合其中2條，并排除其他高雄激素血癥疾病（如先天性腎上腺皮質增生、庫欣綜合征等）。本研究經醫院醫學倫理委員會批準，患者對治療方案知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法 兩組患者均采用長方案或拮抗劑方案進行促排卵。當優勢卵泡直徑≥18 mm，同時至少有3個卵泡的直徑≥17 mm時，給予5 000～10 000 U人絨毛膜促性腺激素（human chorionic gonadotropin,hCG）肌肉注射，35～36 h后陰道超聲引導下取卵，卵母細胞在體外培養4～5 h后行常規IVF。

男方于女方取卵日留取精液，密度梯度離心法優化精液，按1萬精子/卵加入受精微滴，精卵共同孵育，置于37℃，6%CO2培養箱中培養。18～20 h后觀察受精情況。受精后第2天（D2）和D3觀察胚胎卵裂情況，D5、D6觀察囊胚發育情況。

1.3 觀察指標 觀察并比較（1）兩組患者一般資料，包括女方年齡、不孕年限、BMI、基礎卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone,FSH）、基礎促黃體生成素（luteinizing hormone,LH）、基礎雌二醇（estradiol,E2）、基礎睪酮（testosterone,T）、促性腺激素（gonadotropin,Gn）總量、Gn總天數；（2）兩組患者獲卵數及卵母細胞質量，包括成熟卵母細胞數、卵母細胞成熟率、受精數、受精率、正常受精數、正常受精率；（3）兩組患者胚胎發育情況，包括卵裂數、卵裂率、D3優胚數、D3優胚率、可利用胚胎數、可利用胚胎率、囊胚形成數、囊胚形成率。

1.4 統計學處理 采用SPSS 25.0統計軟件。正態分布的計量資料以表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗；非正態分布的計量資料以M（P25，P75）表示，組間比較采用Mann-Whitney U檢驗。計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者一般資料比較 兩組患者女方年齡、女方不孕年限、基礎FSH、基礎E2、Gn總量比較差異均無統計學意義（均 P＞0.05）。PCOS組患者 BMI、基礎LH、基礎T、Gn總天數均高于對照組，差異均有統計學意義（均P＜0.05），見表1。

2.2 兩組患者獲卵數及卵母細胞質量比較 兩組患者受精率比較差異無統計學意義（P＞0.05）。PCOS組患者獲卵數、成熟卵母細胞數、受精數、正常受精數均多于對照組，差異均有統計學意義（均P＜0.05），但成熟卵母細胞率、正常受精率均低于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表2 兩組患者獲卵數及卵母細胞質量比較

2.3 兩組患者胚胎發育情況比較 兩組患者D3優胚數比較差異無統計學意義（P＞0.05）。PCOS組患者由于獲卵多，其卵裂數、可利用胚胎數、囊胚形成數均多于對照組，差異均有統計學意義（均P＜0.05），但卵裂率、D3優胚率、可利用胚胎率、囊胚形成率均低于對照組，差異均有統計學意義（均P＜0.05）。見表3。

表3 兩組患者胚胎發育情況比較

3 討論

PCOS是一種復雜的異質性疾病，其特征是高雄激素、慢性無排卵，明顯的家族聚集性表明PCOS具有遺傳性[6]。來源于PCOS患者的卵泡膜細胞培養顯示睪酮分泌明顯增加，這種高雄激素環境改變了卵泡周圍的微環境，導致卵泡發生異常[7]。另有研究發現PCOS患者的卵母細胞中與減數分裂和細胞骨架組織相關的一些基因TUBB8和TUBA1C表達異常[8]，TUBB8基因的突變會導致減數分裂紡錘體組裝受阻，卵母細胞成熟阻滯，胚胎早期發育阻滯等[9-10]。

本研究結果顯示，PCOS組與對照組相比獲卵數明顯較多，其成熟卵母細胞數、受精卵數、正常受精數等都顯著增多，說明由于PCOS患者基礎竇卵泡較多，經促排后能募集更多的卵母細胞。但是本研究也發現其卵母細胞成熟率、正常受精率、卵裂率則剛好相反，說明卵母細胞質量明顯受到影響。另外，D3優胚率、可利用胚胎率、囊胚形成率也明顯低于對照組，說明PCOS對胚胎發育潛能也有影響。有文獻報道，PCOS患者卵泡液中同型半胱氨酸會對細胞產生毒性反應，而且卵母細胞暴露于高LH和高雄激素環境，顆粒細胞分裂和凋亡功能發生改變，導致卵母細胞質量也相應下降[11-12]。既往研究發現，PCOS患者雖然胚胎質量比其他患者降低，但是臨床妊娠率無統計學差異[3]，也有持相反觀點認為PCOS患者胚胎質量優于普通排卵正常患者[13]。本研究發現，PCOS患者D3胚胎質量比對照組顯著下降，囊胚形成率也比對照組低，與黃劍磊等[3]的研究結果一致。

綜上所述，PCOS患者雖然獲卵較多，但卵母細胞成熟度及正常受精率、優胚率、可利用胚胎率、囊胚形成率都明顯下降，說明其卵母細胞質量明顯受到影響。臨床上目前可采用雙扳機來改善卵母細胞成熟度，實驗室也有通過IVM技術獲得更多成熟卵母細胞，其目的都是為了患者獲得更多優質胚胎及提高妊娠率，當然，目前對改善卵母細胞質量的方法需要更多的深入研究，以期給患者帶來更好的臨床結局。