HPVE6/E7mRNA和HPV-DNA檢測(cè)在宮頸癌篩查中的價(jià)值

武振宇

(張家口市婦幼保健院微生物科，河北 張家口 075000)

宮頸癌是全世界高發(fā)的嚴(yán)重危害女性身心健康的惡性腫瘤。在全球范圍內(nèi)，每年新發(fā)病例和死亡病例分別約為53萬(wàn)和27.5萬(wàn)[1]，且全球數(shù)據(jù)表明，宮頸癌的新發(fā)病例呈現(xiàn)越來(lái)越年輕化趨勢(shì)[2]。有研究[3]表明，高危型人乳頭瘤病毒(HPV)的持續(xù)性或反復(fù)性感染是宮頸癌的主要致病原因。宮頸癌可防可治，從宮頸癌癌前病變到宮頸癌確診需要5～12年，因此，早篩查早治療對(duì)宮頸癌的防治具有重要意義[4]。組織細(xì)胞學(xué)聯(lián)合HPV-DNA檢測(cè)是目前我國(guó)篩查宮頸癌的主要方案[5]，HPV-DNA檢測(cè)的敏感性較高，但其特異性和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值較低[6-7]。研究[8]表明，HPV E6/E7 mRNA 基因在癌基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)中發(fā)揮作用，可作為宮頸癌病變發(fā)展的早期標(biāo)志物，其與HPV-DNA檢測(cè)相比，具有更高的特異性和相似的敏感性，能彌補(bǔ)HPV-DNA檢測(cè)的不足，具有較高的宮頸癌篩查價(jià)值。本研究通過(guò)分析不同組織病理學(xué)級(jí)別中HPV E6/E7 mRNA 和 HPV DNA檢測(cè)結(jié)果的差異，探討 HPV E6/E7mRNA和HPV-DNA檢測(cè)對(duì)宮頸癌的篩查價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2021年1月至2021年7月在張家口市婦幼保健院975例進(jìn)行宮頸癌篩查并獲得病理結(jié)果者為研究對(duì)象，其中年齡20～70歲，平均(41.50±2.00)歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理會(huì)員會(huì)審核并批準(zhǔn)，研究對(duì)象均自愿接受宮頸癌各項(xiàng)篩查方法并簽署知情同意書。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)檢查前3 d無(wú)陰道用藥治療史、無(wú)性生活；(2)月經(jīng)結(jié)束后 3～7 d；(3)未進(jìn)行宮頸錐切術(shù)或子宮切除術(shù)。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)已經(jīng)確診為宮頸癌前病變或?qū)m頸癌者；(2)子宮切除術(shù)后或其他宮頸手術(shù)者；(3)盆腔放射治療史者；(4)合并妊娠者；(5)合并其他惡性腫瘤者；(6)有自身免疫性疾病或正在接受免疫抑制治療者。

1.2 方法

1.2.1 HPVE6/E7mRNA檢測(cè) 使用鄭州Kodia 生物技術(shù)公司生產(chǎn)的宮頸穩(wěn)態(tài)檢測(cè)試劑盒，采用支鏈DNA雜交捕獲技術(shù)(操作嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行)定量檢測(cè)14 種高危型 HPV，分別為HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66 和 68型。其檢測(cè)探針是針對(duì)這14種高危型HPV病毒的E6/E7mRNA，只要任何一種存在即陽(yáng)性。檢測(cè)結(jié)果由計(jì)算機(jī)軟件根據(jù)E6/E7mRNA的拷貝數(shù)、產(chǎn)品臨床實(shí)驗(yàn)閾值等自動(dòng)計(jì)算，結(jié)果<1為陰性，≥1為陽(yáng)性。

1.2.2 HPV-DNA檢測(cè) 采用杭州德同生物技術(shù)有限公司提供的 HPV 核酸檢測(cè)試劑盒，在 HPV 取樣管中加入變性試劑，65 ℃水浴 45 min 后室溫保存，將樣本吸取至已經(jīng)加入探針試劑的雜交板孔內(nèi)，65 ℃孵育 60 min。降至室溫后將上述樣本轉(zhuǎn)移至對(duì)應(yīng)捕獲板中振蕩 60 min，然后移除捕獲板中液體并拍干，加入檢測(cè)試劑25 ℃孵育45 min。接著移除液體、使用清洗液洗板并拍干，加入底物試劑，室溫避光15 min后于化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上讀數(shù)。通過(guò)雜交捕獲-化學(xué)發(fā)光方法對(duì)14種HPV型[2種極度高危型(HPV16、HPV18)、12 種高危型(HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68)]進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)到其中≥1種 HPV型者為陽(yáng)性，未檢測(cè)到者為陰性。

1.2.3 組織病理學(xué)檢查 醫(yī)師借助深圳市金科威公司生產(chǎn)的光電一體電子陰道鏡進(jìn)行組織活檢。對(duì)無(wú)異常者進(jìn)行3、6、9、12點(diǎn)取材，對(duì)于有異常者進(jìn)行區(qū)域多點(diǎn)取材。病理標(biāo)本由兩名資深的病理醫(yī)師進(jìn)行閱片并作出病理診斷。按照病理學(xué)診斷標(biāo)準(zhǔn)[9]進(jìn)行宮頸病變分型：(1)正常或炎癥；(2)宮頸上皮細(xì)胞內(nèi)瘤變Ⅰ級(jí)(CINⅠ)；(3)CINⅡ；(4)CINⅢ或原位癌；(5)宮頸浸潤(rùn)癌。將正常或炎癥判定為陰性，其他診斷結(jié)果判定為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 不同組織病理學(xué)結(jié)果分級(jí)中HPV-DNA和HPV E6/E7mRNA檢測(cè)結(jié)果比較

975名研究對(duì)象中，HPVE6/E7mRNA檢測(cè)陽(yáng)性405例，陽(yáng)性率41.83%；HPV-DNA檢測(cè)陽(yáng)性564例，陽(yáng)性率57.84%；陰道鏡組織病理學(xué)檢查結(jié)果為正常或炎癥515例、CINⅠ200例、CINⅡ129例、CINⅢ或原位癌123例、宮頸浸潤(rùn)癌8例。兩種檢測(cè)方法的陽(yáng)性率隨著宮頸組織病理學(xué)級(jí)別的增高呈逐漸上升的趨勢(shì)(P<0.05)；在正常或炎癥中HPV-DNA檢測(cè)的陽(yáng)性率高于HPVE6/E7mRNA檢測(cè)(P<0.05)；在CINⅠ級(jí)中，HPV-DNA檢測(cè)的陽(yáng)性率高于HPVE6/E7mRNA檢測(cè)(P<0.05)；在CINⅡ、CINⅢ或原位癌、宮頸浸潤(rùn)癌中，兩種檢測(cè)方法比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 不同組織病理學(xué)分級(jí)中HPV-DNA檢測(cè)和HPVE6/E7mRNA檢測(cè)結(jié)果比較[n(%)]

2.2 HPV-DNA、HPV E6/E7mRNA檢測(cè)及兩者聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果比較

病理學(xué)檢查結(jié)果中，將正常或炎癥判定為陰性，其他診斷結(jié)果判定為陽(yáng)性。兩者聯(lián)合檢測(cè)時(shí)任一種檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性即判定結(jié)果為陽(yáng)性，兩種檢測(cè)結(jié)果均為陰性則判定結(jié)果為陰性。見表2。

表2 HPV-DNA、HPV E6/E7mRNA檢測(cè)及兩者聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果比較(例)

2.3 HPV-DNA、HPV E6/E7mRNA檢測(cè)及兩者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)宮頸癌的篩查價(jià)值

HPV-DNA檢測(cè)的敏感性高于HPVE6/E7mRNA檢測(cè)(P<0.05)；特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及準(zhǔn)確性均低于HPVE6/E7mRNA檢測(cè)(P<0.05)；兩種檢測(cè)方法的陰性預(yù)測(cè)值比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。兩者聯(lián)合檢測(cè)的敏感性及陰性預(yù)測(cè)值高于兩者單獨(dú)檢測(cè)(P<0.05)；特異性低于兩者單獨(dú)檢測(cè)(P<0.05)；兩者聯(lián)合檢測(cè)的陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及準(zhǔn)確性有所降低，但與HPV-DNA檢測(cè)比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，與HPVE6/E7mRNA檢測(cè)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 HPV-DNA、HPV E6/E7mRNA檢測(cè)及兩者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)宮頸癌的篩查價(jià)值(%)

3 討論

宮頸癌是嚴(yán)重危害女性健康的惡性腫瘤之一，通過(guò)早期發(fā)現(xiàn)CIN并采取合適的治療措施，可使宮頸癌的發(fā)病率和死亡率明顯降低，且患者預(yù)后良好[10]。有研究表明，高危型HPV持續(xù)或反復(fù)感染是宮頸癌前病變及宮頸癌發(fā)生發(fā)展的必要條件，因此檢測(cè)HPV-DNA有助于宮頸癌的篩查和診斷，但HPV感染往往是一過(guò)性且無(wú)害的，HPV-DNA檢測(cè)僅能診斷是否出現(xiàn)HPV感染，對(duì)病毒的活躍狀態(tài)及宮頸病變的嚴(yán)重程度并不明確[11]。PVE6/E7mRNA是HPV致癌基因表達(dá)的直接標(biāo)志物，是致癌蛋白合成的模板，是宮頸病變開始和進(jìn)展的必經(jīng)之路。有研究[12]指出，HPVE6/E7mRNA是HPV病毒活躍的指標(biāo)，其表達(dá)水平提升提示HPV病毒與機(jī)體DNA發(fā)生整合，細(xì)胞惡化啟動(dòng)。

本研究中，隨著宮頸癌組織病理學(xué)級(jí)別的升高，兩種檢測(cè)方法的檢出陽(yáng)性率隨之增加(P<0.05)，在宮頸浸潤(rùn)癌，兩種檢測(cè)方法的陽(yáng)性率均達(dá)到100%，說(shuō)明HPV-DNA及HPVE6/E7mRNA表達(dá)水平與病變程度呈正相關(guān)，隨著宮頸癌級(jí)別加重呈上升趨勢(shì)。有研究[13]證實(shí)，絕大多數(shù)宮頸癌患者早期均有HPV感染，且多有反復(fù)或長(zhǎng)期感染。HPV在機(jī)體定植后會(huì)與體內(nèi)特異的基因組合并高度表達(dá)，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞的增殖，宮頸癌組織病理學(xué)級(jí)別越高，機(jī)體HPV-DNA表達(dá)水平越高。在宮頸炎組、CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組及宮頸癌組中隨著病理學(xué)級(jí)別的升高，HPV-DNA的檢出陽(yáng)性率隨著升高，與諶瓊?cè)A[14]的研究結(jié)果一致。HPVE6/E7是HPV的基因編碼的致癌蛋白，是導(dǎo)致宮頸細(xì)胞癌變的重要因子，其可使宮頸被感染的細(xì)胞無(wú)限增殖并惡化[15]。HPVE6/E7mRNA的表達(dá)水平是細(xì)胞高級(jí)別惡變的一個(gè)生物學(xué)標(biāo)志，在各級(jí)別組織病理學(xué)檢查結(jié)果中，級(jí)別越高，HPVE6/E7病毒載量隨之升高[16]。也有研究[17]表明，隨著宮頸組織病理學(xué)級(jí)別升高，HPVE6/E7 mRNA檢出陽(yáng)性率隨之升高。在正常或炎癥及CINⅠ中，HPV-DNA的陽(yáng)性檢出率高于HPVE6/E7 mRNA檢測(cè)，這是因?yàn)樵谡；蜓装Y及CINⅠ中，大部分HPV病毒呈游離態(tài)，尚未與機(jī)體DNA發(fā)生整合，即大多數(shù)HPV感染者可能是一過(guò)性的并未出現(xiàn)持續(xù)感染，部分HPV-DNA的陽(yáng)性者可能出現(xiàn)HPVE6/E7 mRNA檢測(cè)陰性[18]。因此，HPVE6/E7 mRNA檢測(cè)的假陽(yáng)性率相對(duì)較低，能減少一過(guò)性感染的檢出率。在CINⅡ及以上級(jí)別中，兩種檢測(cè)方法的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，可能是因?yàn)殡S著HPV的持續(xù)感染，病毒與機(jī)體DNA發(fā)生整合，癌基因表達(dá)活躍，大量癌蛋白E6E7產(chǎn)生，宮頸癌風(fēng)險(xiǎn)增加。

本研究中，HPV-DNA檢測(cè)的敏感性高于HPVE6/E7mRNA檢測(cè)(P<0.05)，說(shuō)明HPV-DNA檢測(cè)具有較高的敏感性，在宮頸癌篩查中不易發(fā)生漏診，與既往研究[19]相符。HPVE6/E7mRNA檢測(cè)的特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值及準(zhǔn)確性高于HPV-DNA檢測(cè)(P<0.05)，與雷冬梅等[20]的研究結(jié)果一致。HPV-DNA檢測(cè)僅說(shuō)明感染了HPV，有些患者的HPV感染是一過(guò)性的，可自行消退，僅有小部分高危型HPV持續(xù)或反復(fù)感染者才發(fā)展為宮頸惡性腫瘤。因此，相對(duì)來(lái)說(shuō)，HPV-DNA檢測(cè)對(duì)宮頸癌的特異性不高，風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)過(guò)早，易造成某些僅感染HPV但未發(fā)展為宮頸癌者的誤診，而HPVE6/E7mRNA檢測(cè)有較高的特異性，可降低一過(guò)性感染者的過(guò)度醫(yī)療行為[21]。HPVE6/E7mRNA檢測(cè)能彌補(bǔ)傳統(tǒng)HPV-DNA檢測(cè)特異度和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值不高的問(wèn)題，能更精確反映癌變風(fēng)險(xiǎn)。兩種檢測(cè)方法的陰性預(yù)測(cè)值比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，可能與本研究樣本量小有關(guān)。趙涌等[1]也指出，HPVE6/E7mRNA檢測(cè)有較高的敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值。因此，HPVE6/E7mRNA和HPV-DNA檢測(cè)均對(duì)宮頸癌篩查具有較高的指導(dǎo)價(jià)值，當(dāng)兩種檢測(cè)均為陽(yáng)性時(shí)，應(yīng)行宮頸癌組織病理學(xué)檢查及早明確診斷，早期進(jìn)行干預(yù)[22]。本研究結(jié)果還顯示，兩種檢測(cè)方法聯(lián)合使用，能提高檢測(cè)的敏感性及陰性預(yù)測(cè)值，具有較好的診斷效能(P<0.05)。

綜上，HPV-DNA檢測(cè)用于宮頸癌一線篩查中，可提高篩查的敏感性和陽(yáng)性檢測(cè)率。對(duì)一線篩查陽(yáng)性者進(jìn)行HPVE6/E7mRNA二線篩查，能將一過(guò)性感染者及低風(fēng)險(xiǎn)者重新納入常規(guī)篩查管理中，以減少不必要的檢查和治療，兩者聯(lián)合具有良好的篩查價(jià)值。