植物內生真菌Talaromyces sp.的次級代謝產物研究

李思瑤 張楊 車永勝

(1 天津中醫藥大學，天津 300193；2 軍事科學院軍事醫學研究院毒物藥物研究所，抗毒藥物與毒理學國家重點實驗室，北京 100850；3 中國醫學科學院北京協和醫學院藥物生物技術研究所，北京 100050)

植物內生真菌(endophytic fungi)是指一類在寄主植物的健康器官或組織內度過全部或部分生命周期，而通常不使寄主表現出明顯感染癥狀的真菌，該類真菌可能存在于植物的各種組織器官如根、莖、葉、花、果實或種子中[1-2]。植物內生真菌既是植物微生態系統的重要組成部分，也是一類非常重要的微生物資源。目前，從植物內生真菌發酵物中分離得到的次級代謝產物的結構類型包括聚酮、萜類、肽類和生物堿等，部分化合物具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤和抗氧化等生物活性[3-4]。植物內生真菌既能夠獨立產生各種結構類型的次級代謝產物，又能夠參與宿主植物次級代謝產物的生物合成，或對其進行生物轉化，是活性天然產物的重要來源之一[5-6]。來源于植物內生真菌的活性天然產物在生物制藥[3-4,7]、農業生產和工業發酵等方面均具有廣闊的應用前景[8]。

籃狀菌(Talaromycessp.)廣泛分布于植物、土壤和海洋生物如海綿中[9]，籃狀菌屬的次級代謝產物種類豐富，部分化合物具有較好的生物活性。從該屬真菌中分離得到蒽醌[10]、吲哚生物堿[11]和萜類[12-14]等不同結構類型的化合物。本研究選取一株采集自南京市郊青檀葉片上的內生真菌進行研究，通過形態觀察和ITS序列分析，該菌株被鑒定為Talaromycessp.。采用稻米培養基發酵，乙酸乙酯提取獲得提取物，采用多種色譜分離方法，從發酵提取物中分離得到11個化合物(化合物1～11)，通過對比核磁、質譜等數據，化合物1～11的結構鑒定為：1-deoxyrubralactone(1)[15]、alternariol(2)[16]、alternariol 4-methyl(3)[17]、altenuisol(4)[18]、3-hydroxyalternariol-5-O-methyl ether(5)[19]、(2'R,4'R,5'R)-altenuene(6)[20]、(2'S,4'R,5'R)-isoaltenuene(7)[20]、(2'R,4'R,5'R)-altenuene-2-acetoxyester(8)[21]、7-hydroxy-3,5-dimethyl-isochromen-1-one(9)[22]、騰毒素(10)[23]和二氫騰毒素(11)[23]，結構式見圖1。

圖1 化合物1～11的化學結構Fig.1 The structures of compounds 1～11

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

儀器：EYELAN-1100旋轉蒸發儀(東京理化)；LX-200小型離心機(北京佳航博創科技有限公司)；AL-204萬分之一電子分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)；600 MHz核磁共振波譜儀(美國Varian Mercury公司)；Agilent 6500高分辨質譜(美國Agilent公司)；Agilent 1260高效液相色譜儀(美國Agilent公司)；LC-6AD島津高效液相色譜儀(日本Shimadzu公司)；JASCO-J-815圓二色光譜儀(日本Jasco公司)；RP-C18色譜柱4.6 mm×150 mm(美國Agilent公司)；Agilent Zorbax SB-C18column半制備色譜柱10.0 mm× 250 mm(美國Agilent公司)；Kromasil 100-5-C18column 色譜柱10.0 mm×250 mm(瑞典Akzo Nobel公司)；Combi Flash?Rf+中壓制備色譜儀(美國Teledyne ISCO公司)；超低溫冰箱(日本Sanyo公司)。

試劑：甲醇(色譜純)、乙腈(色譜純)、石油醚(AR)、乙酸乙酯(AR)、無水甲醇(AR)和甲酸(AR)為研究院試劑庫領取；氘代試劑購自北京百靈威公司；丙酮(色譜純)購自美國Thermo Fisher Scientific公司；薄層層析硅膠購自新諾有限公司；酵母提取物購自Sigma-Aldrich公司；麥芽糖購自Sigma-Aldrich公司；蛋白胨購自英國Oxoid公司；瓊脂購自北京微生物培養基制品廠。

1.2 菌株發酵

1.2.1 菌株

植物內生真菌T.sp.(組內編號RCN134)由南京師范大學陳雙林教授提供，于2006年10月采集自江蘇省南京市郊的青檀葉片，菌株保存于中國科學院微生物所普通微生物保存中心，ITS基因序列已提交NCBI基因庫(Genbank Accession No.ON261385)。

1.2.2 菌株發酵

種子液配制：將菌種涂布于PDA平板上，在平板上生長5～7 d。待平板上長滿一定量的菌落后，將連同培養基在內的4個1 cm2大小的菌塊接種到500 mL 的錐形瓶中(內含200 mL麥芽汁液體培養基)。種子液的配方為葡萄糖4.0 g、麥芽汁10.0 g、酵母提取物 4.0 g、蒸餾水1 L，按配方混合并攪拌均勻，將培養液pH值調至6.5，封口，在121℃滅菌30 min后冷卻備用。將接種完成的錐形瓶置于搖床上培養5 d后(培養溫度：25℃；轉速：200 r/min)，用無菌水將種子培養液稀釋至濃度約1×106個/mL的菌懸液。

固體培養基配制：將80 g大米和120 mL蒸餾水加入到500 mL錐形瓶中，封口膜封口，待大米被蒸餾水浸泡24 h后，在121℃的高壓滅菌鍋中滅菌25 min。待固體培養基冷卻后，量取5 mL菌懸液接種到固體發酵培養基上，接種40瓶，室溫培養40 d。

1.3 提取與分離

稻米培養基發酵40 d后，加入乙酸乙酯(350 mL× 40瓶)浸泡24 h并攪拌均勻，重復4次，合并提取液，減壓蒸干溶劑得到粗提取物20.8 g，粗提物以1:1的比例拌100～200目硅膠拌樣，石油醚/乙酸乙酯/甲醇體系梯度洗脫(每個梯度800 mL)。

組分3(石油醚:乙酸乙酯=4:1洗脫，1400 mg)經中壓反相柱色譜分離(25%～100%甲醇-水，梯度洗脫)。其中組分3.1(25%甲醇-水洗脫，500 mg)經半制備高效液相色譜(48%乙腈-水50 min；2 mL/min)制備得到化合物9(2.1 mg；tR49.0 min)。組分3.2(30%甲醇-水洗脫，500 mg)經半制備高效液相色譜(51%乙腈-水75 min；2 mL/min)制備得到化合物1(1.8 mg；tR40.0 min)和化合物2(7.3 mg；tR59.0 min)；組分3.3(40%甲醇-水，70 mg)經半制備高效液相色譜(29%乙腈-水100 min；2 mL/min)制備得到化合物5(3.5 mg;tR95.0 min)；組分3.4(55%甲醇-水，50 mg)經半制備高效液相色譜(72%甲醇-水37.5 min；2 mL/min)制備得到化合物3(7.1 mg，tR34.5 min)。

組分4(石油醚:乙酸乙酯=5:2洗脫，1000 mg)經中壓反相柱色譜分離(30%-100%甲醇-水，梯度洗脫)。其中組分4.2(40%甲醇-水，130 mg)經半制備高效液相色譜(32%乙腈-水90 min；2 mL/min)制備得到化合物8(2.1 mg，tR84.0 min)和化合物4(1.1 mg，tR74.0 min)。

組分6(石油醚:乙酸乙酯=3:7洗脫，700 mg)經中壓反相柱色譜分離(30%-100%甲醇-水，梯度洗脫)。其中組分6.1(30%甲醇-水，250 mg)用半制備高效液相色譜(25%乙腈-水40 min；2 mL/min)制備得到化合物6(2.0 mg，tR35.0 min)和化合物7(3.3 mg，tR33.5 min)。

組分7(石油醚:乙酸乙酯=0:1洗脫，500 mg)經中壓反相柱色譜分離(40%～100%甲醇-水，梯度洗脫)。其中組分7.2(50%甲醇-水，50 mg)用半制備高效液相色譜(28%乙腈-水110.0 min；2 mL/min)制備得到化合物10(17.6 mg，tR90.0 min)和化合物11(5.3 mg，tR100.0 min)。

1.4 活性測試

1.4.1 供試品的配置

配制樣品初始濃度為10 mg/mL二甲基亞砜溶液作為母液，用時將母液用PBS緩沖液稀釋不同倍數。

1.4.2 MTT法

96孔板中接入細胞密度約為104/孔，培養24 h后并除去培養液，然后加入樣品溶液(溶液為含有0.2%二甲基亞砜的50 μL培養基溶液或合適濃度的化合物樣品溶液(0.1～100 μmol/L)。37℃下連續孵育4 h，避光條件下將原培養基更換為DMEM培養基，繼續孵育48 h。以無血清培養基或PBS培養基溶解MTT，調整MTT濃度為0.5 mg/mL，96孔板中加入50 μL MTT溶液，繼續孵育3 h。去除MTT培養基后，每孔加入100 μL二甲基亞砜溶液，設定轉速為60 r/min，震蕩 5 min使沉淀溶解并除去氣泡。采用酶標儀測定 540 nm下的吸光度值，重復3次。按下式計算細胞抑制率：細胞抑制率(%)=(1-試驗組吸收值A/對照組吸收值A)×100%。

2 結果

2.1 結構鑒定

化合物1：淡黃色粉末；E S I-M Sm/z：261.1[M+H]+；1H NMR(600 MHz，acetone-d6)δH:11.32(1H，s，6-OH)，6.93(1H，d，J=2.3 Hz，H-9)，6.77(1H，d，J=2.3 Hz，H-7)，4.02(3H，s，8-OCH3)，3.60(1H，pd，J=6.9，1.3 Hz，H-1)，2.95(1H，dd，J=18.8，6.5 Hz，H-2)，2.26(1H，dd，J=18.8，1.3 Hz，H-2)，1.47(3H，d，J=7.0 Hz，H-10)；13C NMR(150 MHz，acetone-d6)δC:195.7(C-3)，168.0(C-8)，166.1(C-6)，165.7(C-5)，149.1(C-3a)，145.3(C-10a)，136.1(C-9a)，104.0(C-7)，103.6(C-9)，102.7(C-5a)，56.7(8-OCH3)，43.3(C-2)，25.7(C-1)，21.0(C-10)。以上波譜數據與文獻[15]對照基本一致，因此鑒定為1-deoxyrubralactone。

化合物2：淡黃色粉末；E S I-M Sm/z:259.1[M+H]+；1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δH：11.76(1H，s，3-OH)，7.23(1H，d，J=2.0 Hz，H-6)，6.71(1H，d，J=2.5 Hz，H-5')，6.63(1H，d，J=2.5 Hz，H-3')，6.35(1H，d，J=2.0 Hz，H-4)，2.70(3H，s，H-8)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δC：165.9(C-7)，164.7(C-5)，164.0(C-3)，158.4(C-4')，152.6(C-2')，138.3(C-6')，138.1(C-1)，117.5(C-5')，109.0(C-1')，104.5(C-6)，101.6(C-3')，100.9(C-4)，97.1(C-2)，25.2(C-8)。以上波譜數據與文獻[16]對照基本一致，因此鑒定為alternariol。

化合物3：淡黃色粉末;E S I-M Sm/z：273.1[M+H]+；1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δH：7.23(1H，d，J=2.6 Hz，H-6)，6.73(1H，d，J=2.2 Hz，H-5')，6.65(1H，d，J=2.2 Hz，H-3')，6.63(1H，d，J=2.6 Hz，H-4)，3.91(3H，s，5-OCH3)，2.74(3H，s，H-8)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δC：166.2(C-7)，164.7(C-5)，164.1(C-3)，158.6(C-4')，152.6(C-2')，138.5(C-6')，137.8(C-1)，117.6(C-5')，108.8(C-1')，103.4(C-6)，101.6(C-3')，99.2(C-4)，98.5(C-2)，55.8(5-OCH3)，25.0(C-8)。以上波譜數據與文獻[17]對照基本一致，因此鑒定為alternariol 5-methyl ether。

化合物4：褐色無定型粉末；ESI-MSm/z：275.1[M+H]+；1H NMR(600 MHz，acetone-d6)δH：11.67(1H，s，3-OH)，7.56(1H，s，H-6')，7.05(1H，brs，H-4)，6.83(1H，s，H-3')，6.49(1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，3.99(3H，s，5-OCH3)；13C NMR(150 MHz，acetone-d6)δC：168.0(C-7)，166.7(C-5)，165.4(C-3)，149.6(C-2')，145.9(C-4')，144.3(C-5')，138.6(C-1)，110.8(C-6')，109.4(C-1')，104.3(C-3')，100.7(C-4)，99.8(C-2)，98.8(C-6)，56.3(5-OCH3)。以上波譜數據與文獻[18]對照基本一致，因此鑒定為altenuisol。

化合物5：黃色無定型粉末；ESI-MSm/z：289.1[M+H]+；1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δH：11.91(1H，s，3-OH)，7.24(1H，d，J=2.2 Hz，H-6)，6.73(1H，s，H-5')，6.63(1H，d，J=2.2 Hz，H-4)，3.91(3H，s，5-OCH3)，2.66(3H，s，H-8)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δC：166.1(C-7)，164.6(C-5)，164.1(C-3)，147.0(C-4')，141.5(C-2')，138.4(C-1)，131.2(C-3')，126.4(C-6')，116.9(C-5')，109.1(C-1')，103.4(C-6)，99.2(C-4)，98.3(C-2)，55.8(5-OCH3)，24.5(C-8)。以上波譜數據與文獻[19]對照基本一致，因此鑒定為3-hydroxyalternariol 5-O-methyl ether。

化合物6：白色無定型粉末；ESI-MSm/z：293.1[M+H]+；[α]25D-3.0(c1.0，MeOH)；CD(c1×10-3mol/L，MeOH)λmaxnm(Δε)：237(+2.7)，280(-1.0)，325(-0.1)。1H NMR(600 MHz，acetone-d6)δH：11.44(1H，s，3-OH)，6.71(1H，d，J=2.3 Hz，H-6)，6.46(1H，d，J=2.4 Hz，H-4)，6.31(1H，d，J=2.9 Hz，H-6')，4.12(1H，dd，J=5.5，2.9 Hz，H-5')，3.92(3H，s，5-OCH3)，3.85(1H，ddd，J=8.9，5.5，3.8 Hz，H-4')，2.40(1H，dd，J=14.3，3.7 Hz，He-3')，2.01(1H，dd，J=14.3，8.9 Hz，Ha-3')，1.53(3H，s，H-8)；13C NMR(150 MHz，acetone-d6)δC:169.6(C-7)，167.2(C-5)，164.8(C-3)，140.4(C-1)，133.7(C-1')，131.6(C-6')，103.1(C-6)，101.5(C-4)，101.4(C-2)，82.0(C-2')，71.9(C-5')，70.5(C-4')，56.2(5-OCH3)，40.3(C-3')，28.0(C-8)。以上波譜數據與文獻[20]對照基本一致，通過與文獻的CD數據［(c1.7 mmol/L，MeOH)λmaxnm(Δε):231(+25.2)，278(-17.2)，321(-2.0)］比對，數據基本一致，因此鑒定其為(2'R,4'R,5'R)-altenuene。

化合物7：白色無定型粉末；ESI-MSm/z：293.1[M+H]+；[α]25D+14.00(c1.0，MeOH)；CD(c1× 10-3M，MeOH)λmaxnm(Δε):237(-1.1)，280(+1.7)，325(+0.2)。1H NMR(600 MHz，acetone-d6)δH：11.47(1H，s，3-OH)，6.70(1H，d，J=2.3 Hz，H-6)，6.47(1H，d，J=2.3 Hz，H-4)，6.25(1H，d，J=2.4 Hz，H-6')，4.26(1H，dd，J=7.9，2.4 Hz，H-5')，3.92(3H，s，5-OCH3)，3.78(1H，ddd，J=12.7，7.9，3.7 Hz，H-4')，2.27(1H，m，He-3')，2.09(1H，brs，Ha-3')，1.56(3H，s，H-8)；13C NMR(150 MHz，acetone-d6)δC:169.0(C-7)，167.2(C-5)，165.0(C-3)，138.9(C-1)，133.0(C-1')，131.1(C-6')，103.0(C-6)，101.8(C-4)，101.1(C-2)，83.1(C-2')，74.2(C-5')，71.9(C-4')，56.3(5-OCH3)，44.3(C-3')，26.8(C-8)。以上波譜數據與文獻[20]對照基本一致，通過與文獻的CD數據［(c3.4 mmol/L，MeOH)λmaxnm(Δε)：231(-4.9)，278(+3.2)，321(+0.5)］比對，數據基本一致，因此鑒定為(2'S,4'R,5'R)-isoaltenuene。

化合物8：白色無定型粉末；ESI-MSm/z：335.1[M+H]+；[α]25D-25.0(c1.0，MeOH)；CD(c1× 10-3M，MeOH)λmaxnm(Δε):237(+2.7)，280(-1.0)，325(-0.1)。1H NMR(600 MHz，DMSO-d6)δH：11.29(1H，s，3-OH)，6.53(1H，d，J=2.3 Hz，H-6)，6.46(1H，d，J=2.3 Hz，H-4)，6.04(1H，d，J=2.7 Hz，H-6')，5.24(1H，dd，J=5.9，2.7 Hz，H-5')，4.10(1H，m，H-4')，3.86(3H，s，5-OCH3)，2.56(1H，dd，J=14.6，4.1 Hz，Ha-3')，2.14(3H，s，H-10)，2.08(1H，dd，J=14.6，8.9 Hz，He-3')，1.56(3H，s，H-8)；13C NMR(150 MHz，DMSO-d6)δC：171.0(C-9)，168.5(C-7)，166.2(C-5)，164.2(C-3)，138.3(C-1)，136.1(C-1')，124.6(C-6')，103.1(C-6)，101.2(C-4)，100.5(C-2)，80.5(C-2')，73.8(C-5')，67.4(C-4')，55.8(5-OCH3)，39.6(C-3')，27.9(C-8)，21.1(C-10)。以上波譜數據與文獻[21]對照，比對化合物8與化合物6的CD數據，二者基本一致，因此化合物8鑒定為(2'R,4'R,5'R)-altenuene-5'-acetoxyester。

化合物9：白色粉末；E S I-M Sm/z：191.1[M+H]+；1H NMR(600 MHz，methanol-d4)δH:6.64(1H，d，J=2.5 Hz，H-8)，6.63(1H，d，J=2.5 Hz，H-6)，6.00(1H，s，H-4)，2.71(3H，s，H-10)，2.32(3H，s，H-9)；13C NMR(150 MHz，methanol-d4)δC：182.0(C-1)，166.6(C-3)，163.2(C-8a)，161.5(C-7)，143.6(C-5)，118.0(C-6)，115.6(C-4a)，111.4(C-4)，101.7(C-8)，23.1(C-10)，19.8(C-9)。以上波譜數據與文獻[22]對照基本一致，因此鑒定為7-hydroxy-3,5-dimethyl-isochromen-1-one。

化合物10：白色無定型粉末；ESI-MSm/z：415.2[M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δH:7.74(1H，s，H-20)，7.41(5H，brs，H-2'，H-3'，H-4'，H-5'，H-6')，5.19(1H，d，J=12.8 Hz，H-9)，4.36(1H，s，H-6)，4.20(1H，brs，H-3)，3.58(1H，d，J=12.8 Hz，H-9)，3.19(3H，s，H-13)，2.81(3H，s，H-19)，1.66(1H，m，H-14)，1.53(3H，d，J=7.1 Hz，H-18)，1.30(1H，m，H-15)，1.25(1H-s-H-14)-0.63(3H，d，J=6.4 Hz，H-16)，0.52(3H，s，H-17)。13C NMR(150 MHz，CDCl3)δC：171.5(C-2)，171.5(C-8)，170.1(C-5)，164.6(C-11)，136.9(C-20)，133.0(C-1')，131.9(C-12)，130.8(C-4')，129.7(C-2'，C-6')，129.4(C-3'，C-5')，56.9(C-6)，49.9(C-3)，44.5(C-9)，40.7(C-14)，35.4(C-13)，30.2(C-19)，24.6(C-15)，22.3(C-16)，22.1(C-17)，15.6(C-18)。以上波譜數據與文獻[23]對照基本一致，因此鑒定為騰毒素。

化合物11：白色無定型粉末；ESI-MSm/z：417.2[M+H]+；1H NMR(600 MHz，CDCl3)δH:7.73(1H，s，10-NH)，7.29(2H，d，J=7.5 Hz，H-3'，H-5')，7.22(2H，m，H-2'，H-6')，7.20(1H，m，H-4')，4.92(1H，t，J=14.7 Hz，H-9)，4.61(1H，dd，J=11.3，3.5 Hz，H-3)，4.26(1H，d，J=8.3 Hz，H-6)，3.68(1H，d，J=14.8 Hz，H-20)，3.50(1H，d，J=14.7 Hz，H-9)，2.87(1H，m，H-20)，2.83(3H，s，H-13)，2.77(3H，s，H-19)，1.67(1H，dt，J=13.8，6.7 Hz，H-14)，1.54(3H，d，J=6.5 Hz，H-18)，1.38(1H，m，H-15)，1.24(1H，m，H-14)，0.82(3H，d，J=6.5 Hz，H-16)，0.76(3H，d，J=6.5 Hz，H-17)。13C NMR(150 MHz，CDCl3)δC：172.2(C-2)，171.6(C-8)，170.6(C-5)，170.1(C-11)，137.0(C-1')，129.0(C-3'，C-5')，128.2(C-2'，C-6')，127.1(C-4')，62.9(C-12)，57.3(C-6)，48.4(C-3)，44.5(C-9)，41.0(C-14)，34.3(C-20)，30.6(C-13)，30.1(C-19)，24.5(C-15)，22.6(C-16)，22.3(C-17)，15.6(C-18)。以上波譜數據與文獻[23]對照基本一致，因此鑒定為二氫騰毒素。

2.2 化合物生物活性測試

采用MTT法評價化合物對SKBR3(人乳腺癌細胞株)、A549(人非小細胞肺癌細胞株)，J82(人膀胱癌細胞株)和Huh7(人肝癌細胞株)4種腫瘤細胞株的細胞毒活性。化合物1～11及陽性對照順鉑在100 μmol/L和10 μmol/L濃度下對4種細胞的抑制率見表1，在100 μmol/L的濃度下，化合物2和3對J82細胞具有一定抑制活性，抑制率分別為56.9%和59.7%；其中化合物3對SKBR3及J82細胞的IC50值分別為62.0和83.1 μmol/L； 陽性對照順鉑對四株細胞的IC50值分別為3.7、6.6、0.6和5.1 μmol/L。評價結果表明，化合物1～11對所選4種細胞的細胞毒活性較弱。

表1 化合物1～11在100和10 μmol/L濃度下對四種細胞株的抑制率Table 1 Inhibition rates of compounds 1～11 against four cell lines at 100 and 10 μmol/L

3 結論

青檀Pterocelti tatarinowii為我國特有的單種屬第三紀孑遺植物，作為一種古老的植物，在長期進化過程中，與其內生菌群形成了穩定的適應關系，文獻報道對來自不同采集地的青檀枝條、葉片內生真菌菌群的多樣性研究結果表明，擬莖點霉屬Phomopsis和交鏈孢屬Alternaria真菌為青檀內生真菌的優勢菌群[24-25]。

本研究對青檀葉片內生真菌T.sp.的次級代謝產物開展研究，分離得到11個化合物，通過核磁、質譜以及CD數據對比，確定了11個化合物的結構。

化合物1為聚酮類化合物，文獻報道該化合物為DNA聚合酶抑制劑，對大鼠DNA聚合酶β和人DNA聚合酶κ的IC50值分別為11.9和59.8 μmol/L[15]。

化合物2～8屬于交鏈孢酚類化合物，結構上的區別主要在于6H-benzo[c]chromen-6-one母核上取代基種類、位置和芳環部分氫化程度不同。文獻報道，化合物2在10 μg/mL濃度下對小鼠淋巴瘤細胞株L5178Y的抑制率為11.8%[16]；化合物3由紅樹林內生真菌No.2240中分離得到，對人口腔上皮癌細胞株KB及其多藥耐藥細胞株KBv200的IC50值分別為4.82 和4.94 μg/mL[17]；化合物4從植物病原菌Alternariasp.中分離得到，為一種植物毒素[18]；化合物5由蓼屬藥用植物Polygonum senegalense的內生真菌Alternariasp.中分離得到，對小鼠淋巴瘤細胞L5178Y的IC50值為7.8 μg/mL，并且對ARK5等多種腫瘤相關蛋白激酶具有抑制作用[19]；化合物6和7為立體異構體，由地衣內生真菌Nigrosporasp.中分離得到[20]；化合物8由植物內生真菌Alternaria alternata中分離得到，為化合物7的5'羥基乙酰化衍生物，對葡萄球菌(Staphylococcus aureusATCC 25923)和白色念珠菌(Candida albicansATCC 24433)的MIC80值分別為15.4和48.8 μg/mL[21]；化合物9由植物內生真菌Ulocladiumsp.中分離得到，對白念珠菌(Candida albicansSC 5314)的IC50值為97.93 μmol/L[22]。

化合物10和11屬于環肽類化合物，由L-亮氨酸，L-苯丙氨酸，甘氨酸和L-丙氨酸縮合形成，文獻報道騰毒素(10)是由鏈格孢霉產生的一種霉菌毒素，能夠通過降低植物細胞內ATP酶活性抑制光合磷酸化[26]。

目前已從Talaromyces屬真菌中分離得到200余種次級代謝產物，包括萜類、甾體、聚酮、異香豆素、醌類、生物堿和肽類等多種結構類型[9]。文獻調研結果表明，未見化合物1、化合物3～11從Talaromyces屬菌株中分離的報道。本研究初步闡明了青檀葉片內生真菌T.sp.的化學成分，為進一步研究青檀葉片內生真菌與宿主植物的相互作用及其生態學意義奠定了基礎。

致謝：感謝南京師范大學陳雙林教授為本研究提供菌株。