血液分析儀RBC-O和R-MFV參數在糾正冷凝集標本MCHC中的作用

李 敏， 李建英， 羅國菊， 郭 野

（1.濰坊市人民醫院檢驗科，山東 濰坊 261041；2.中國醫學科學院北京協和醫院檢驗科，北京 100730）

冷凝集是指在低溫條件下紅細胞（red blood cell，RBC）發生可逆性凝集，標本發生冷凝集會導致RBC計數假性減少和體積假性增高的結果。目前，臨床實驗室在進行血細胞分析時，如遇到冷凝集標本，較普遍的處理方式有37 ℃水浴30 min或進行血漿置換，基本能達到將平均紅細胞血紅蛋白濃度（mean corpuscular hemoglobin concentration，MCHC）糾正到＜380 g/L的預期效果，但這些處理方式均需要一定的時間，操作步驟相對繁瑣，且人工干預的步驟均會造成檢測結果產生一定程度的誤差。如何利用好血液分析儀的參數，在短時間內有效地解決問題，是對檢驗人員提出的挑戰。有研究發現，冷凝集標本41 ℃加熱1 min后檢測，或利用血液分析儀的網織紅細胞（reticulocyte，RET）通道檢測的糾正效果比37 ℃水浴2 h的效果更好[1]。R-MFV、RBC-O是血液分析儀的研究參數，可通過計算糾正MCHC，無需額外的孵育或置換時間。目前尚未見有關聯合應用RET通道RBC-O參數和電阻抗通道R-MFV參數計算MCHC來糾正冷凝集標本檢測結果的報道。本研究在評估無冷凝集標本R-MFV、RBC-O的可應用性后，探討R-MFV、RBC-O聯合應用在糾正冷凝集標本MCHC中的價值。

1 材料和方法

1.1 樣本收集

隨機取2021年8月中國醫學科學院北京協和醫院臨床送檢血常規的20例無冷凝集標本血液分析儀檢測結果。另收集2021年6—8月中國醫學科學院北京協和醫院住院患者臨床送檢血常規的15例冷凝集標本。冷凝集判斷標準：MCHC≥380 g/L，RBC、血細胞比容（hematocrit，HCT）、血紅蛋白（hemoglobin，Hb）之間不符合“3規則”[2]，放入4 ℃冰箱5 min有肉眼可見的冷凝集現象[3]。

1.2 儀器與試劑

XN-9100全自動血液分析儀（日本Sysmex公司）及配套試劑、質控品，該儀器電阻抗通道以鞘流電阻抗法檢測RBC，RBC-I和R-MFV為該通道研究參數；RET通道采用半導體激光流式細胞術（flow cytometry，FCM）+核酸熒光染色法檢測RBC，RBC-O為該通道的研究參數。

1.3 標本處理與質量控制

每日測定3個水平配套質控品，確保結果均在控。無冷凝集標本常規上機檢測。冷凝集標本分別用3種方法處理。（1）37 ℃水浴法：將冷凝集標本與含2.0 mL 0.9%NaCl溶液的稀釋液一同置于37 ℃水浴箱內孵育30 min，吸取10 μL迅速加入2.0 mL溫0.9%NaCl溶液中混勻，滴到計數板上，待RBC在計數板中分布均勻后，采用顯微鏡法[4]計數RBC。（2）血漿置換法：將標本1 500×g離心3 min，棄去血漿，加入等量0.9% NaCl溶液混勻，重復血漿置換步驟2遍，上機檢測。（3）RET通道MCHC檢測：采用XN-9100全自動血液分析儀RET通道檢測MCHC（記為MCHC-O）。（4）通過RBC-O和R-MFV計算MCHC：用RBC-O替換RBC-I，R-MFV替換紅細胞平均體積（mean corpuscular volume，MCV），通過公式MCHC=Hb/（RBC-O×RMFV）計算MCHC（記為MCHC計算）。

1.4 結果判定

（1）采用Bland-Altman法比較20例無冷凝集標本RBC-I與RBC-O、MCV與R-MFV的一致性。以測量結果的差值為縱坐標，均值為橫坐標，繪制散點圖，并標注出95%一致性界限（±1.96s）。如果2個測量結果的差值均位于95%一致性界限內，則判定為2種方法結果具有較好的一致性[5]。

（2）以37 ℃水浴法為參考方法，分別計算15例冷凝集標本RET通道、血漿置換法RBC計數結果與參考方法的差值，以差值為90%～110%為可接受范圍。

（3）以MCHC＜380 g/L，RBC、HCT、Hb之間符合“3規則”為糾正合格。統計RET通道、血漿置換法和通過RBC-O、R-MFV計算MCHC達到糾正標準的標本數。

2 結果

2.1 RBC-I與RBC-O、MCV與R-MFV的一致性

RBC-I與RBC-O、MCV與R-MFV的差值均在95%一致性界限內，一致性好。見圖1、圖2。

圖1 無冷凝集標本RBC-I與RBC-O一致性分析

圖2 無冷凝集標本MVC與R-MFV一致性分析

2.2 冷凝集標本處理前后RBC計數結果

除1例冷凝集標本血漿置換法與參考方法差值為60.5%外，其他14例標本與參考方法差值均為90%～110%。冷凝集標本直接上機檢測、37 ℃水浴法、RET通道檢測、血漿置換法RBC計數結果見表1。

表1 15例冷凝集標本不同方法RBC計數結果

2.3 采用不同方法糾正冷凝集標本MCHC的效果比較

RET通道、血漿置換法和通過RBC-O、R-MFV計算MCHC，分別有5、13、14例達到糾正要求。見表2、圖3。

表2 15例冷凝集標本不同方法紅系參數糾正結果

圖3 3種方法MCHC結果比較

3 討論

XN-9100全自動血液分析儀檢測RBC的原理為電阻抗法，RBC通過小孔時，形成相應大小的脈沖，脈沖的數目代表RBC的數量，脈沖的高度代表單個細胞的體積，脈沖高度疊加，經換算即可得出HCT的值。Hb測定原理為在稀釋的血液中加入溶血劑，將RBC溶解，釋放出Hb，后者與溶血劑中相關成分結合形成Hb衍生物，進入Hb測試系統進行比色，吸光度的變化與液體中Hb含量成正比[6]。在冷凝集標本中，RBC凝集成團，體積增大，聚集后體積超過250 fL時RBC計數會假性減少；多個RBC聚集后形成的RBC團在通過計數孔時引起脈沖增大，會導致MCV假性升高，凝集的RBC使MCV增高，同時RBC計數減少，但以RBC計數減少為主，因此HCT也隨之降低，并造成了由RBC、Hb、HCT計算得到的MCHC結果異常升高[7]。Hb檢測為比色法，不受影響，對于冷凝集標本而言，Hb是電阻抗通道提供的不受影響的相對“真值”，可以直接應用。

血液分析儀RET通道的分析原理為半導體激光FCM+核酸熒光染色，且配置41 ℃液體加熱設備，故理論上通過RET通道可排除冷凝集干擾，得到可靠的RBC-O[6]。RBC體積服從正態分布，R-MFV與MCV在理論上是一致的[8]。因MCV是所有進入檢測范圍（25～250 fL）內單個、聚集的RBC體積的平均值，而當RBC體積按大小排序時，聚集的RBC因體積大會排在后邊，因此R-MFV未納入或僅納入一部分聚集的RBC，其R-MFV也較MCV可靠，理論上更接近于RBC平均體積的“真值”。本研究結果顯示，無冷凝集的標本RBC-I與RBC-O、MCV與R-MFV檢測結果具有較好的一致性，與相關研究結果[6]一致。

本研究結果顯示，RET通道檢測與37 ℃水浴法（參考方法）RBC計數的差值均為90%～110%，而血漿置換法5號樣本與參考方法RBC計數的差值（60.5%）超出界限，未達到糾正效果，但通過RBC-O和R-MFV計算，則達到了糾正效果；本研究15例冷凝集標本糾正結果顯示，僅7號標本未能通過研究參數計算的方法糾正（血漿置換法可以糾正）；2號和5號標本血漿置換法未達到糾正標準，但通過RBC-O和R-MFV計算可以糾正；8號標本的MCHC＜380 g/L，但RBC、HCT與Hb之間不符合“3規則”，放置于冰箱5 min后，管壁上可看到凝集顆粒，因此在遇到RBC、HCT與Hb含量不成比例時，建議先確認是否存在冷凝集；13號標本因標本凝集成塊，初次檢測無結果，因此將標本37 ℃水浴30 min后上機檢測，結果幾乎無偏差。對RET通道、血漿置換法、通過RBC-O和R-MFV計算MCHC均可達到糾正要求（＜380 g/L）的標本（4、8、11、13號），MCHC和MCV結果有一定的偏差，但因為尚無可參考的金標準，無法判斷哪種方法糾正后的結果更接近真值，建議在報告中進行相應的描述，僅供臨床參考。

冷凝集標本雖然可以通過水浴后稀釋、血漿置換、水浴后灌板計數、溫浴后稀釋等方法進行處理，但這些方法都需要一定的時間，并且人工干預造成的誤差也不可控制[1]。本研究15例冷凝集標本通過研究參數換算的方法有14例達到了糾正效果，糾正率＞90%，為冷凝集標本的處理提供了一種快速的解決方法。然而，RET通道的RBC直方圖顯示明顯不呈正態分布時，R-MFV不適用，此時可采用水浴或水浴后稀釋、血漿置換等方法糾正冷凝集標本。

本研究基于工作中冷凝集標本的處理經驗，發現血漿置換優于37 ℃ 30 min水浴的糾正效果，因此將血漿置換法與通過RBC-O、R-MFV計算的MCHC結果進行了比較，發現計算的糾正效果較優，但本研究標本例數較少，未來在實際工作中會不斷驗證RBC-O與R-MFV的應用價值。