蜂蜜中氯霉素殘留檢測研究進展

王 巖

（寶雞市食品藥品檢驗檢測中心，陜西寶雞 721000）

蜂蜜作為一種天然的營養(yǎng)佳品，含有糖類、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素等多種營養(yǎng)成分，不僅能夠補充日常所需營養(yǎng)，還能起到潤肺止咳、消積通便等作用，是一款老少咸宜的滋補品，越來越受到人們的青睞。

氯霉素是首次用化學合成法生產(chǎn)的廣譜抗生素，對于革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌具有很好的抑制作用，由于其效高價廉，曾經(jīng)在獸醫(yī)臨床上被廣泛使用，用于治療和控制蜜蜂、家畜家禽、水產(chǎn)品養(yǎng)殖過程中的傳染性疾病[1]。近年來的研究表明，氯霉素在動物體內(nèi)代謝緩慢，有抑制骨髓造血功能等危害[2]，毒副作用嚴重，因此各國已禁止氯霉素在動物源性食品中使用。

1 蜂蜜中氯霉素殘留現(xiàn)狀及限量要求

近年來，隨著人們生活水平的提高，蜂蜜的需求量逐年增加，蜜蜂養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展已成規(guī)模，蜂蜜的品質(zhì)安全是該產(chǎn)業(yè)能否持續(xù)健康發(fā)展的決定性因素，而蜂蜜中氯霉素的殘留超標情況已經(jīng)成為人們關(guān)注的焦點[3]。

1994年，聯(lián)合國糧農(nóng)組織就禁止在食用性動物養(yǎng)殖中使用氯霉素[4]，我國食品安全國家標準要求蜂蜜中不得檢出農(nóng)獸藥殘留，中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第250號要求禁止在食品動物中使用氯霉素。盡管如此，在蜂蜜中檢出氯霉素殘留超標的現(xiàn)象仍然存在。2016—2019年，陜西省蜂蜜中氯霉素檢出陽性率為2.44%[5]。2016—2017年，云南省蜂蜜中氯霉素檢出陽性率為30.3%[6]。由此可見，蜂蜜中氯霉素殘留超標情況不容忽視。

2 蜂蜜中氯霉素殘留檢測常見方法

目前，蜂蜜中氯霉素殘留檢測常見的方法有微生物法、免疫分析法、色譜法和其他新技術(shù)等。

2.1 微生物法

微生物法是利用氯霉素對特定菌株的抑菌作用來篩查食品中是否含有氯霉素的方法，常見的檢驗方法有杯碟法、棉簽法、紙片法、瓊脂擴散法等[7]。其中，棉簽法在實踐中應用最為廣泛，方法是用棉簽蘸取動物源食品樣本的組織液，將其放在涂滿枯草桿菌的培養(yǎng)基中保溫過夜，觀察四周是否出現(xiàn)抑菌圈，若出現(xiàn)則表明樣本中含有氯霉素殘留。該方法簡便易行，耗時較短，但特異性和靈敏度較差，對所有的抗生素均有此反應。杯碟法與棉簽法相比，能排除一些抗生素的干擾，如青霉素、土霉素等，特異性更強，靈敏度更高，檢出限可達0.25 mg·kg-1[8]。

2.2 免疫分析法

免疫分析法是一種利用抗原抗體特異性結(jié)合，且具有可逆性的氯霉素檢測方法，常見的檢測方法有酶聯(lián)免疫法、膠體金免疫層析技術(shù)、放射免疫分析法等。

酶聯(lián)免疫法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是檢測蜂蜜中氯霉素的主要分析方法，其原理是將氯霉素與大分子載體蛋白結(jié)合制成人工抗原，與抗體進行特異性反應，形成酶標記的抗原抗體復合物，在酶的催化作用下，使底物水解產(chǎn)生一種有色物質(zhì)，根據(jù)特定波長下有色物質(zhì)吸光度和氯霉素濃度制成標準曲線來測定其含量的一種方法。劉桃[9]等以抗氯霉素單克隆抗體為抗原，氯霉素-辣根過氧化物為標記物建立了直接競爭酶聯(lián)免疫吸附法測定蜂蜜樣品中氯霉素，檢出限為0.15 ng·g-1，回收率在97.58%～100.94%，批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于11%，表明方法穩(wěn)定且準確度高。

楊娟等[10]利用膠體金免疫快速檢測試紙條檢測蜂蜜中氯霉素殘留，整個過程只需25 min，準確率高達99.5%。許勝男[11]等建立了磁固相萃取前處理和膠體金免疫層析試紙條聯(lián)用技術(shù)，檢測蜂蜜中氯霉素殘留，檢出限為0.2 ng·g-1，不但降低了檢測成本，還具有操作簡便、快捷等特點，具有良好的應用前景。

陳小雪等[12]用放射免疫分析法檢測食品中氯霉素殘留量，最低檢測限為0.15 μg·kg-1，方法準確、選擇性高。但因其具有明顯的放射性污染源，會對周圍的人員和環(huán)境造成危害，使用較為局限。

2.3 色譜法和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

色譜法和色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法是利用不同的色譜柱，對樣品中的氯霉素殘留先分離后檢測的一種檢測方法，常見的有高效液相色譜法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法。

高效液相色譜法是以液體為流動相，利用高壓輸液系統(tǒng)，使樣品在色譜柱中進行分離后檢測的一種分析方法，具有靈敏度高、分離速度快、可靠性高等特點。徐麗艷[13]等用Oasis HLB固相萃取柱凈化，乙酸乙酯提取的方法，采用高效液相色譜法檢測蜂蜜中氯霉素殘留，檢測限為0.1 mg·kg-1。肖婉娜[14]等建立了高效液相色譜法檢測蜂蜜中氯霉素的方法，檢出限為0.625 μg·kg-1，在0.10～10.00 μg·mL-1線性關(guān)系良好。

氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法是以氣相色譜作為進樣和分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)的一種分析方法，既具有氣相色譜法快速高效的特點，又能利用質(zhì)譜檢測器進行定性鑒定和結(jié)構(gòu)分析，是一種比較成熟的分析方法。主要采用EI源（電子轟擊源）和NCI源（負離子化學源），其中NCI源氣相色譜質(zhì)譜法的檢出限可以達到0.1 μg·kg-1[15]。有研究表明，采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法檢測蜂蜜中氯霉素，回收率可達83%～104%，檢出限為0.05 μg·kg-1，定量限為0.2 μg·kg-1[16]。

液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法是以液相色譜為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)的蜂蜜中氯霉素殘留常見的檢測方法，也是食品安全國家標準GB/T 18932.19—2003、GB 31658.2—2021等規(guī)定的蜂蜜、動物性食品中氯霉素殘留法定的檢測方法，具有準確度高、靈敏度高、選擇性強等特點，常與固相萃取、分子印跡、QuEChERS等凈化方法聯(lián)用，以去除蜂蜜中的基質(zhì)干擾，提高檢測效率。于浩洋等[17]采用MCX固相萃取柱凈化，建立超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定蜂蜜中氯霉素殘留，檢出限為0.08 μg·L-1，回收率可達102.7%～105.6%。趙軍溪等[18]采用全自動固相萃取超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法測定蜂蜜中氯霉素殘留，檢出限可達0.05 μg·kg-1。李正元等[19]建立了QuEChERS提取與高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定蜂蜜中氯霉素殘留，解決了固相萃取法前處理過程中固相萃取柱堵塞的問題，在0.5～200.0 μg·L-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率可達81%～120%，簡便快捷，靈敏度高。

2.4 其他新技術(shù)

表面增強拉曼散射法是一種新型的氯霉素檢測方法，其原理是利用吸附在粗糙金屬表面分子的拉曼散射信號可被放大這一特性，以金、銀、銅納米粒子等作為基底，檢測食品中的氯霉素殘留。孫文等[20]利用自聚合法合成的金納米粒子，將氯霉素分子通過氫鍵吸附在其基底上，優(yōu)化激發(fā)光波長，實現(xiàn)了對蜂蜜中氯霉素分子的高靈敏度檢測，檢測限可達10-10mol·L-1，回收率在88.00%～101.12%，方法快速簡便，準確率高。

生物傳感器法又稱生物芯片法，是利用生物分子之間的相互反應將其轉(zhuǎn)化為光信號、電信號等進行檢測的一種方法。FERGUSON等[21]采用表面等離子共振生物傳感器法檢測蜂蜜中氯霉素殘留，檢出限為0.02 g·kg-1。

毛細管電泳法是利用帶電組分在高壓電場中遷移效率不同而進行分離的檢測方法。分離速度快，分析成本低，但測定低限較高，陳天豹等[22]采用毛細管電泳法結(jié)合紫外檢測器檢測蜂蜜中氯霉素殘留，回收率大于89.6%，但檢測限僅為10 μg·L-1，靈敏度較差，無法滿足低濃度氯霉素殘留的檢測。

3 結(jié)語

從近幾年對蜂蜜中氯霉素殘留檢測情況來看，盡管我國早已禁止在食用性動物中使用氯霉素，但是仍在陜西、云南、深圳[23]等地蜂蜜中檢出氯霉素超標，說明蜜蜂養(yǎng)殖業(yè)依然存在非法使用氯霉素的現(xiàn)象。目前隨著科技的進步和檢測水平的提高，在蜂蜜和其他食品中氯霉素的檢測方法有很多，其中酶聯(lián)免疫法、氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法是比較常見的幾種分析方法，也是食品安全國家標準規(guī)定的法定檢測方法，具有靈敏度高，準確度好和回收率高等特點。但同時也存在一些不足，如酶聯(lián)免疫法容易出現(xiàn)假陽性，色譜質(zhì)譜聯(lián)用法前處理較為煩瑣，所需儀器成本較高。因此，在今后的研究中，應重點克服和解決酶聯(lián)免疫法和色譜質(zhì)譜聯(lián)用法中存在的問題，以期建立一種簡便高效、靈敏度高、使用成本較低的蜂蜜中氯霉素檢測方法。