豬偽狂犬病防控技術研究進展

余春明，鄧柏林 ，鄭雪瑩，谷傳慧，趙景義

（北京市動物疫病預防控制中心，北京 大興 102629）

豬 偽 狂 犬 病（Pseudorabies，PR）是豬的一種急性傳染病，其病原為偽狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV），該病呈地區性的暴發性流行，其臨診癥狀因豬只周齡而異，成年豬只一般呈隱性感染，妊娠母豬則出現流產、死胎，公豬不育，育肥豬呼吸困難、生長停滯等綜合癥候群，而2周齡內的仔豬發病死亡率可達 100%，而斷奶仔豬發病率可達40%，死亡率達20%左右，是危害全球養豬業的重大傳染病之一。

1 PR病毒學特征和流行病學特點

PR病毒粒子呈二十面體立體對稱橢圓形或圓形，其基因組為線性dsDNA分子，偽狂犬病病毒迄今只發現一個血清型，根據基因分析可分為 I、II、III、IV 四個基因型，我國僅發現 IV型病毒，且不同毒株在毒力和生物學特征等方面存在差異。PRV通過鼻腔黏膜進入宿主，沿神經干傳播，并且在扁桃體等部位增殖形成原發感染灶，然后進入嗅神經和舌咽神經進行病毒的復制后以核衣殼的形式存在，最終感染大腦并在宿主動物形成終生潛伏感染。

豬偽狂犬病呈世界分布，多發生在寒冷的季節，但其他季節也有發生。1813年偽狂犬病最早發現于美國，1902年匈牙利學者首次報道該病病原是一種不同于狂犬病病毒的新病毒。該病毒1931年由美國科學家從牛體內分離證實該病病原屬于皰疹病毒。該牛目前已知為該病的唯一天然宿主，病豬、帶毒豬以及帶毒鼠類為本病重要傳染源，該病傳播方式包括口鼻接觸，帶毒豬排毒和胎盤垂直傳播等方式，此外被偽狂犬病毒污染的人員和器具也能傳播該病。現有疫苗保護效果不佳，PR的暴發主要發生在許多傳統疫苗免疫接種的豬場，給全世界養豬行業帶來嚴重的經濟損失。

我國于20世紀50年代首次報道豬偽狂犬病的暴發，20世紀80年代以來我國從匈牙利引進的Barth-K61疫苗，有效地控制了我國豬偽狂犬病暴發流行。然而，隨著國內養殖環境的變化，近幾年我國PR的發病率呈上升趨勢，并出現流行范圍廣、發病率和病死率顯著升高的流行特點。

2 診斷技術研究發展

該病除通過觀察臨床癥狀與病理變化進行診斷外，可通過病原學、血清學及分子生物學對該病進行準確的診斷。病毒分離接種是經典的方法，也是最權威的病原診斷方法，但是對于實驗室條件、人員要求較高、操作復雜、成本較高，多用于科研診斷和特殊情況下診斷，現階段生產中應用較少。血清學診斷方法是用已知抗原和血清樣本進行反應，通過檢測血清中是否存在該病毒的特異性抗體，來診斷是否存在病毒感染的方法。中和試驗需要時間長，技術條件要求高，現階段在實際生產中尚未普及，檢測PRV抗體水平的ELISA法具有操作簡單、能夠大批量檢測樣品、檢測快速等特點，適合廣泛應用于臨床診斷。目前主要的診斷方法是對偽狂犬病毒抗體或PRV-gE抗體的ELISA血清診斷方法，在實際中通過檢測gE和gB 抗體，分別評估野毒感染壓力和疫苗免疫效果。使用gE基因缺失疫苗，商品化gE抗體試劑盒可準確用于陰性豬場和抗體背景清晰豬場的準確、快速診斷。將疫苗抗體與野毒抗體區分開來。

分子診斷方法是近年來發展最快及應用最廣泛的診斷方法。其現階段較為常用的診斷方法，常見的包括 PCR 和熒光定量 PCR技術。PCR 技術是通過體外酶擴增 DNA來進行檢測，而熒光定量技術則是通過 Rotor-gene檢測系統建立起定量檢測。接種豬偽狂犬疫苗為基因缺失苗的豬場，利用分子生物學檢測方法，可以鑒別出疫苗株和野毒株感染。

3 疫苗免疫的研究現狀

商品化豬偽狂犬病疫苗主要有豬偽狂犬病滅活疫苗、豬偽狂犬病活疫苗、豬偽狂犬病基因缺失活疫苗等，而豬偽狂犬病核酸疫苗及豬偽狂犬病基因工程活載體疫苗現仍處于實驗室研制階段。當前主要分為弱毒苗、基因工程缺失疫苗、亞單位疫苗、重組偽狂犬病毒載體疫苗。

2011 年出現偽狂犬病病毒變異株大流行后，國內外學者針對偽狂犬病病毒變異株開展了偽狂犬病活疫苗的研制工作。童武等利用同源重組技術構建了gE和gI雙基因缺失毒株（JS-2012-gE/gI 株），并用該缺失株進行了豬偽狂犬病滅活疫苗的研制，該疫苗免疫仔豬和妊娠母豬，均能產生高水平的中和抗體，且免疫仔豬及免疫母豬所生仔豬均能有效地抵抗偽狂犬病毒變異毒株（JS-2012 株）的攻擊。王琴、郭萬柱等人利用基因工程手段構建了Fa株TK基因缺失和TK/gE/gI基因缺失的基因缺失株。方六榮等利用基因工程手段成功構建了TK、g G、TK/gG、TK/gE/gp63等一系列單/雙/三基因缺失的鄂A株。現今應用較多的 Bartha-K61株疫苗為gE基因缺失苗，基于gE基因研發的檢測試劑可鑒別野毒感染還是免疫帶毒，已經應用于豬場凈化過程的鑒定。有學者以偽狂犬病基因缺失弱毒活疫苗為載體，利用同源重組的方法，將豬瘟病毒的E2 基因插入到載體病毒中，成功構建出含豬瘟病毒 E2 蛋白基因序列的重組偽狂犬病病毒基因缺失疫苗株rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2，動物實驗結果表明，具有很好的免疫保護效果。

4 主要的防控技術措施

4.1 遵守科學的引種制度

由于該病可潛伏感染存在隱性帶毒豬，因此，豬場應實行自繁自養，培育屬于自己的健康種群，若無特殊情況不要從外面引種（精液），嚴禁從疫區引種。引進種豬、后備豬時，需隔離飼養45 d，期間采血送檢，并進行驅蟲，免疫豬瘟、豬偽狂犬病、口蹄疫、豬藍耳病等疫苗工作，最后經過血清學檢測確認為健康者方可混群飼養。

4.2 加強抗體檢測，優化疫苗免疫程序

分別在母豬開產前15~20 d采血和采集初乳檢測 PRVgE抗體，監測公豬的抗體水平變化，判斷能否阻斷病毒感染公豬，分別于30日齡、60日齡、90日齡、120日齡采集商品豬血清來檢測偽狂犬gE抗體，以此推斷偽狂犬病毒的感染情況。對種豬場豬只檢測偽狂犬病病毒 g E 抗體（野毒感染抗體），并根據gE抗體的檢測結果來調整、完成免疫方案。

4.3 加強疫苗免疫

豬偽狂犬病的疫苗主要有滅活疫苗、弱毒疫苗和基因缺失疫苗。滅活疫苗安全性良好，但免疫效率低，免疫劑量大，易造成豬只發生應激反應；弱毒疫苗雖然效果較好，但其毒力可能會返強，導致疾病流行和潛伏感染；基因缺失弱毒疫苗緊急預防接種育肥豬，其效果顯著，但應注意同一豬場只能使用一種缺失苗，防止毒株間重組形成超強毒株。

4.4 防治與凈化措施

由于豬偽狂犬病存在的潛伏感染，早在20世紀80年代一些養豬發達國家就已經開始啟動凈化工程。我國開展凈化工作也取得很大的成果，基于gE及其他毒力相關基因的缺失而構建的PRV基因缺失疫苗，在偽狂犬病病毒根除過程中非常重要，采用進口豬偽狂犬病gE基因缺失苗，對豬群進行免疫為豬偽狂犬病凈化提供了可實施的客觀條件，通過對陽性豬只淘汰，達到逐漸凈化的目的。

5 討論與小結

豬偽狂犬病防控是國家豬病疫情防控的重點，關系到我國養豬業的健康持續發展，針對豬偽狂犬病的控制需要注意其潛伏感染的重要特點，當其他疾病發生后，豬只抵抗力下降時，病毒在潛伏處增殖，引起發病。一旦發現豬場中存在偽狂犬病病毒傳播，接種疫苗應當慎重，否則可能因免疫壓力而促進毒株變異進化，增大防控壓力。鑒于國外的成熟經驗，落實凈化措施，首先，防控的關鍵點應放在做好感染帶毒種豬的凈化工作上，通過對PRVgE抗體陽性種豬群中野毒帶毒排毒情況的重點監測，及時淘汰排毒的 PRVgE 抗體陽性豬只。其次，要輔以生物安全等綜合防控措施，監測初生仔豬垂直感染情況，利用免疫程序優化試驗結果，安排確定豬場采取逐步凈化的策略。