結直腸癌組織多配體蛋白聚糖-4(SDC4)蛋白表達與臨床病理參數及短期預后的關聯

張 玲,蘭家秀,王智敏,王 偉,方金滿,3

(1.中國科學院合肥腫瘤醫院,合肥 安徽230032;2.中國科學院合肥物質科學研究院 健康與醫學技術研究所,合肥 安徽230032;3.中國科學技術大學，合肥 安徽230026)

結直腸癌(CRC)是最常見和最具侵襲性的惡性腫瘤之一，是全球癌癥相關死亡的第四大原因[1-2]。CRC是一種異質性疾病，盡管在腫瘤的遺傳和分子特征方面取得了進展，但 CRC患者的預后不良和長期生存率非常低[3-4]。SDC4是一種細胞表面的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖，SDC4與生長因子、細胞外基質(ECM)分子和細胞骨架信號蛋白存在相互作用[5-6]。SDC4在多種腫瘤的分化和預后中發揮著關鍵作用[7]。SDC4通常作為抗腫瘤分子，其在結直腸癌中表達顯著降低，因此，SDC4作為結直腸癌腫瘤發生發展的候選標志物，也是治療和診斷的重要靶點[8]。因此本研究分析SDC4與結直腸癌患者的臨床病理參數及短期預后的關系，探討SDC4在結直腸癌發生發展及預后的關系。

1 資料與方法

1.1 研究對象選取2016年1月至2020年1月收治的結直腸癌患者70例，年齡18～69歲，平均(57.32±7.64)歲。納入標準：①符合《中國結直腸癌診療規范(2015年版)》[9]中關于結直腸癌的診斷標準，患者經病理檢查確診為結直腸癌；② 接受規范性的結直腸癌根治手術，且術前未進行任何抗腫瘤治療；③預計生存時間>6個月；④臨床病理信息和隨訪資料完整。排除標準：①合并認知障礙者或精神病患者；②合并其他惡性腫瘤患者；③合并已接受腫瘤治療、胃腸道手術史患者。

1.2 免疫組化分析檢測組織SDC4表達結直腸癌組織微陣列(TMA)使用福爾馬林固定石蠟包埋組織切片，從固定石蠟包埋的組織塊中取出。在5 μm處切取陣列切片并置于載玻片上。本研究采用傳統的免疫組織化學染色方法。用10 %山羊血清封閉30 min后，用兔抗人SDC4抗體(賽默飛世爾科技有限公司)在4℃孵育過夜，然后用過氧化物酶標記的二抗(賽默飛世爾科技有限公司)孵育。由兩位病理醫師通過盲法閱片確定染色的染色強度和陽性比例。染色百分比分為0(0-1%)、1(2-25%)、2(26-50%)、3(51-75%)、4(>75%)，染色強度分為0分(陰性)、1分(弱陽性)、2分(中等陽性)、3分(強陽性)。采用視覺免疫反應評分(IRS)，范圍從0到12，由染色強度評分乘以陽性細胞程度評分生成。因此，SDC4表達被分為2類：高水平(IRS 5-12)和低水平(IRS 0-4)。

1.3 臨床資料收集及隨訪通過查閱患者病歷檔案，收集患者臨床資料，包括性別、年齡、腫瘤直徑、淋巴結轉移、Dykes 分期等。采用電話或門診復診等隨訪方式，截止時間為2022年1月。

2 結果

2.1 結直腸癌患者組織SDC4的表達與臨床病理特征關系

在結直腸癌組織中SDC4與年齡、性別、腫瘤直徑、淋巴結轉移、Dykes 分期等病理特征無關(P>0.05)，在分化程度低、浸潤程度深(漿膜外)的結腸癌患者中SDC4 的表達顯著降低(P<0.05)，見表1。

表1 結直腸癌患者組織SDC4 的表達與臨床病理參數的關系

2.2 SDC4在結直腸癌組織中的表達與短期預后的關系

經過2年隨訪后，70例結直腸癌患者生存率為72.86%(51/70)。SDC4低或無表達組的生存率為 67.27%(37/55)，SDC4高表達組的生存率為93.33%(14/15)，兩組比較差異有統計學意義(χ2=4.048，P=0.044)，見圖1。

圖1 SDC4表達與結直腸癌患者生存的關系

2.3 影響結直腸癌患者預后的單因素和多因素分析

單因素分析發現SDC4表達、分化程度、Dukes分期與結直腸癌的不良預后有關，將上述單因素引入多因素Cox回歸模型分析發現SDC4表達、分化程度、Dukes分期是結直腸癌患者獨立預后的指標，見表2。

表2 SDC4與預后的單因素和多因素分析

3 討論

CRC是最常見的惡性腫瘤之一和全球癌癥相關死亡的主要原因，近年來CRC的發病率不斷上升，這可能與生活方式和營養習慣的改變有關[10]。早期 CRC 大多無癥狀，多數患者在晚期才被診斷出來[11]。腫瘤淋巴結轉移階段仍然是臨床決策過程中最有效的預后因素[12]。目前醫生用來預測結直腸癌患者預后和治療反應的生物標志物，如癌胚抗原(CEA)和糖抗原19-9(CA19-9)等，敏感性和特異性都相對較低[13]。因此在這種情況下，需要更有效的生物標志物。

syndecan 家族由主要存在于細胞表面的4種跨膜硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(HSPG) 組成[14]。這些不同的多聚體的結構在脊椎動物和無脊椎動物中表現出高度的同源性[15]。所有4種多聚糖均由不同數量的糖胺聚糖(GAG)側鏈的核心蛋白構成[16]。Syndecans 主要通過這些 GAG 鏈發揮其功能，但核心蛋白的不同結構域也具有不同的作用[17]。Syndecan-1 和 syndecan-3 攜帶硫酸乙酰肝素(HS)和硫酸軟骨素(CS)鏈，而 syndecan-2 和 syndecan-4 僅攜帶 HS 鏈[18]。Syndecans 參與廣泛的生物過程，包括生長和分化、細胞擴散、細胞黏附、細胞遷移、細胞骨架組織、浸潤和血管生成[19-20]。缺氧是調節人類結腸癌細胞中SDC4表達的因素之一[21]。在正常上皮細胞和組織中，SDC4的顯著高表達，但在高轉移性結腸癌細胞(KM1214) 中，SDC4的表達水平顯著降低[22]。

本研究中發現在分化程度低、浸潤程度深(漿膜外)的結腸癌患者中SDC4 的表達顯著降低(P<0.05)，說明SDC4與結直腸癌侵襲轉移有關。經過2年隨訪后，70例結直腸癌患者生存率為72.86%(51/70)。SDC4低或無表達組的生存率為 67.27%(37/55)，SDC4高表達組的生存率為93.33%(14/15)，兩組比較差異有統計學意義(χ2=4.048，P=0.044)。單因素分析發現SDC4表達、分化程度、Dukes分期與結直腸癌的不良預后有關，將上述單因素引入多因素Cox回歸模型分析發現SDC4表達、分化程度、Dukes分期是結直腸癌患者獨立預后的指標，表明SDC4在結直腸癌中起著腫瘤抑制作用，SDC4表達的喪失與預后不良顯著相關。

綜上所述，結直腸癌組織中SDC4的表達與臨床病理特征及預后密切相關，有成為預測結直腸癌患者預后生物標志物的潛力，亦有望成為腫瘤生物治療的新靶點。盡管如此，本研究仍然存在一些局限性，本研究的樣本量相對較小，且研究結果來自單一中心。因此需要在更大樣本、多中心的研究中證實，SDC4在CRC中的作用機制也需要進一步探討。