不同蛋黃油組分促進(jìn)小鼠消化性胃潰瘍愈合作用

田 笑，仝其根

（1.北京農(nóng)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院，北京 102206；2.蛋品安全生產(chǎn)與加工北京市工程研究中心，北京 100094）

近年來促進(jìn)消化性胃潰瘍愈合作用的研究主要集中在使用中藥及食物提取物或使用微生物發(fā)酵蛋白產(chǎn)物等，如張明昊等[1]研究發(fā)現(xiàn)大蒜素對乙醇致小鼠急性胃潰瘍具有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抑制Wnt/β-catenin信號通路有關(guān)；趙澄等[2]使用龜甲膠治療食用醋酸導(dǎo)致的潰瘍模型小鼠，結(jié)果發(fā)現(xiàn)龜甲膠可通過降低胃液酸度，減少白細(xì)胞介素-1β、白細(xì)胞介素-8和胃泌素的分泌，降低潰瘍指數(shù)，從而發(fā)揮對胃潰瘍的治療作用；趙欣等[3]使用牦牛酸奶分離純化的特殊菌株發(fā)酵的豆?jié){品質(zhì)優(yōu)于標(biāo)準(zhǔn)嗜熱鏈球菌發(fā)酵豆?jié){，且其對胃潰瘍有很好的預(yù)防效果；還有學(xué)者使用白芨多糖[4]、山茶油[5]與姜油[6]等進(jìn)行對消化性胃潰瘍進(jìn)行治療。

蛋黃油是部分禽類動物的卵黃中脂溶性提取物的總稱，其中的脂質(zhì)是最具營養(yǎng)價值的一部分，脂質(zhì)成分磷脂類占比32.8%（其中含有卵磷脂73.0%、腦磷脂15.0%以及其他磷脂12.0%）、脂肪酸類占比62.3%和固醇類占比（4.9%）[7]。使其既有豐富的食用價值，還有良好的抗氧化、降血脂活性[8-10]，可應(yīng)用于化妝品與保健品等[11-12]。

在臨床上的蛋黃油主要用于促進(jìn)術(shù)后燙傷創(chuàng)口愈合[13]，嬰幼兒濕疹[14]，慢性皮膚潰瘍[15]等。華苗爽等[16]研究表明醇提蛋黃油具有良好的促進(jìn)小鼠消化性胃潰瘍愈合的作用，但由于給藥量太大，將其有效給藥量轉(zhuǎn)換為人體需要時，會使人體攝入脂質(zhì)過剩，導(dǎo)致其他健康問題，且蛋黃油作用機(jī)制仍不明確。因此，本實(shí)驗(yàn)采用不同萃取劑將蛋黃油進(jìn)行提取與組分分離，研究不同組分的性質(zhì)與脂肪酸組成，并將其用于動物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行有效組分篩選，為蛋黃油作用機(jī)制探究和促進(jìn)蛋黃油臨床治療人體的消化性胃潰瘍開辟新思路。

1 材料與方法

1.1 動物、材料與試劑

SPF級6 周齡CD-1?（ICR）小鼠（雌雄各半、體質(zhì)量（30±3）g）由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，生產(chǎn)許可證號：SCXK（京）2021-0006，使用許可證號：SYXK（京）2021-0001。

蛋黃粉 亳州海川蛋制品有限公司；玉米胚芽油（以下簡稱玉米油） 益海嘉里金龍魚糧油食品股份有限公司；食用淀粉、西咪替丁膠囊（0.2 g/粒） 成都錦華藥業(yè)有限責(zé)任公司；小鼠飼養(yǎng)墊料、飼料 北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司。

甲醛（分析純） 天津致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；冰乙酸（分析純） 天津光復(fù)科技有限發(fā)展公司；無菌雙蒸水 北京雷根生物技術(shù)有限公司；羧甲基纖維素鈉（carboxymethylcellulose sodium，CMC-Na） 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；小鼠內(nèi)皮素（endothelin 1，ET-1）、小鼠谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）、小鼠超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒 上海博湖生物科技有限公司；一氧化氮（nitric oxide，NO）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒 南京建成生物工程研究所；Bradford蛋白濃度測定試劑盒 福州飛凈生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生物儀器廠；真空恒溫烘箱 上海博迅實(shí)業(yè)有限公司；循環(huán)水真空泵上海恒科億豐有限公司；ME204E分析電子天平 南京貝登醫(yī)療股份有限公司；SH-3C恒溫磁力攪拌器 天津泰斯特儀器有限公司；YC-200超低溫冰箱（-86 ℃）青島澳柯瑪集團(tuán)；TH-Mini手持均質(zhì)儀 北京蘭杰柯科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 3 種蛋黃油及磷脂的制備

取一定量蛋黃粉以料液比1∶5（m/V）加入無水乙醇，55 ℃磁力攪拌1.5 h后進(jìn)行抽濾，收集濾渣備用，所得濾液在60 ℃減壓旋蒸至無溶劑，50 ℃真空干燥后得醇提蛋黃油。取上述無水乙醇提取后所得濾渣60 ℃真空干燥后再以料液比1∶5（m/V）加入石油醚，常溫磁力攪拌1 h后低溫抽濾。濾液60 ℃旋蒸得到石油醚提取的蛋黃油，真空干燥后-18 ℃貯藏備用。取醇提蛋黃油以料液比1∶10（m/V）加入丙酮，攪拌10 min至磷脂析出，抽濾后得到磷脂，真空干燥后-18 ℃貯藏備用，所得濾液65 ℃旋蒸至無溶劑，40 ℃真空干燥后得到去磷脂醇提蛋黃油備用。

取去磷脂醇提蛋黃油以料液比1∶10（m/V）加入乙醇-乙腈溶液（體積比1∶1），混勻后倒入分液漏斗靜置分層，分別收集上層油與下層油，65 ℃旋蒸至無溶劑，然后真空干燥后-18 ℃貯藏備用。將上層油、下層油和石油醚油分別命名為蛋黃油1、蛋黃油2及蛋黃油3。

由蛋黃油提取蛋黃油1、蛋黃油2及蛋黃油3和磷脂4 個脂質(zhì)成分。其中磷脂組分大多由卵磷脂構(gòu)成，為固體；上層油下層油和石油醚油為液態(tài)油，性質(zhì)和脂肪酸組成未知。依據(jù)GB/T 5532—2008《動植物油脂 碘值的測定》和GB/T 5534—2008《動植物油脂 皂化值的測定》測定3 種液態(tài)脂質(zhì)的碘值、皂化值，參考GB 5009.168—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脂肪酸的測定》第一法，采用氣相色譜法測定3 種液態(tài)脂質(zhì)脂肪酸組成。

1.3.2 動物造模、分組以及給藥設(shè)計(jì)

小鼠飼養(yǎng)環(huán)境溫度（22±2）℃、相對濕度（55±5）%，晝夜12 h交替。90 只小鼠（造模實(shí)驗(yàn)致死率10%，因此增加造模小鼠的數(shù)量以備用，后同）自由飲水進(jìn)食，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后隨機(jī)選取9 只作為空白對照組，其他81 只小鼠參考文獻(xiàn)[16]進(jìn)行造模。造模共進(jìn)行5 d，前3 d每只小鼠灌胃0.2 mL/d 7.5%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，后同）乙酸溶液，后2 d每只小鼠灌胃0.2 mL/d 6%乙酸溶液，建立消化性胃潰瘍模型。每次灌胃前斷食12～15 h，灌胃后0.5 h給食。造模期間空白對照組小鼠灌胃等體積蒸餾水。造模后的消化性胃潰瘍小鼠隨機(jī)分為8 組，每組9 只：模型組造模結(jié)束次日處死；模型對照組灌胃0.4 mL/d蒸餾水觀察小鼠自行愈合情況；陽性藥物組灌胃0.4 mL/d 0.75%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）西咪替丁濁液（用0.2%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）CMC-Na溶液溶解）；蛋黃油1、蛋黃油2及蛋黃油3組分別灌胃0.4 mL/d蛋黃油1、蛋黃油2及蛋黃油3濁液（分別在3 種蛋黃油中加入1/3體積蒸餾水，充分混合乳化制成濁液），即攝入0.3 g/d蛋黃油；磷脂組灌胃0.4 mL/d磷脂-玉米油濁液（將1.3.1節(jié)磷脂與玉米油等體積混合均勻后加入與混合物等體積的蒸餾水，充分混合乳化制成濁液），即攝入0.1 g/d磷脂；玉米油組灌胃0.4 mL/d玉米油濁液（在玉米油中加入1/3體積蒸餾水，充分混合乳化制成濁液），即攝入0.3 g/d玉米油。空白對照組小鼠灌胃0.4 mL/d蒸餾水。各組干預(yù)5 d后于次日脫頸處死（處死前斷食不斷水12 h），取胃體觀察胃竇潰瘍情況并進(jìn)行組織病理學(xué)及胃組織生化指標(biāo)分析。

1.3.3 胃竇觀察及胃潰瘍評分

取各組小鼠胃體，用生理鹽水沖洗后沿胃大彎剪開胃壁，沖洗胃中殘余食物，觀察胃竇潰瘍情況并拍照，并根據(jù)胃潰瘍評分標(biāo)準(zhǔn)[17]（表1）進(jìn)行潰瘍評分，結(jié)果取平均值。

表1 胃潰瘍評分標(biāo)準(zhǔn)[17]Table 1 Scoring criteria for gastric ulcer[17]

1.3.4 組織病理學(xué)分析

每組隨機(jī)剪取潰瘍部分胃組織（（1.0±0.5）cm×（1.0±0.5）cm）于10%（體積分?jǐn)?shù)）中性甲醛溶液固定24 h以上后進(jìn)行石蠟切片，蘇木精-伊紅染色后在顯微鏡下觀察胃組織中細(xì)胞結(jié)構(gòu)及炎性細(xì)胞的病變情況。

1.3.5 胃組織生化指標(biāo)測定

各組小鼠胃組織稱質(zhì)量后剪碎并加入生理鹽水，冰浴下均質(zhì)制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%組織勻漿，4 ℃、3 000 r/min離心10 min后收集上清液，置于-86 ℃冰箱中備用。分別參考SOD、MDA、NO、ET-1、GSH-Px試劑盒說明書測定相應(yīng)指標(biāo)。

1.3.6 劑量驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

取1.3.1節(jié)制備的蛋黃油1和磷脂進(jìn)行小鼠消化性胃潰瘍劑量驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。取60 只小鼠參考1.3.2節(jié)方法進(jìn)行造模和干預(yù)，造模結(jié)束后將小鼠分為6 組（每組9 只）：模型組、模型對照組和高劑量（0.3 g/d）、低劑量（0.15 g/d）蛋黃油1組以及高劑量（0.1 g/d）、低劑量（0.05 g/d）磷脂組，模型組造模次日處死，其余組干預(yù)5 d后于次日處死。參考1.3.5節(jié)方法進(jìn)行胃組織生化指標(biāo)測定。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與單因素方差分析，采用Duncan multiplerange test法檢驗(yàn)進(jìn)行顯著性分析，P＜0.05為差異顯著。采用Origin軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同蛋黃油組分干預(yù)后小鼠胃竇潰瘍情況

胃竇觀察可以直觀反映潰瘍情況及胃黏膜受損程度，胃竇潰瘍評分可以對比潰瘍損傷的差異性。正常小鼠胃竇剪開后在日光燈下呈淡粉色（圖1A）；模型組胃體在燈光下為深紅色，出現(xiàn)異常褶皺，伴有胃黏膜潰爛、出血，潰瘍清晰可見（圖1B）；模型對照組相較模型組，潰瘍有一定好轉(zhuǎn)，但仍伴有非正常褶皺與對稱潰瘍血痕（圖1C）；蛋黃油1組褶皺均勻、顏色稍紅，相較于模型對照組有明顯愈合作用（圖1D）；蛋黃油2組仍有明顯對稱性出血潰爛，伴有點(diǎn)狀潰瘍，非潰瘍面顏色趨正常（圖1E）；蛋黃油3組顏色偏深，有少量點(diǎn)狀潰瘍以及褶皺，促進(jìn)愈合效果與蛋黃油1組接近（圖1F）；陽性藥物組胃體組織完整、顏色正常，無潰瘍以及血斑（圖1G）；磷脂組顏色較正常、無褶皺，有少量點(diǎn)狀潰瘍，愈合作用相較其他脂質(zhì)組（蛋黃油1、蛋黃油2、蛋黃油3與磷脂組，下同）較好（圖1H）；玉米油組有大量血痕以及點(diǎn)狀潰瘍，顏色較深，促進(jìn)愈合效果較差（圖1I）。

圖1 各組小鼠胃體解剖觀察圖Fig. 1 Photographs of gastric tissue of mice in each group

各組小鼠胃體潰瘍評分如表2所示，對比模型對照組，陽性藥物、蛋黃油1、蛋黃油3及磷脂組的潰瘍評分均顯著下降（P＜0.05），且在脂質(zhì)組中磷脂組的評分下降的趨勢最大，其效果接近陽性藥物。與模型對照組相比，玉米油組潰瘍評分變化不顯著（P＞0.05），由此可知磷脂-玉米油濁液中具有促進(jìn)潰瘍愈合效果的成分為磷脂。

表2 各組小鼠潰瘍評分Table 2 Ulcer scores of mice in each group

以上結(jié)果表明：1）給藥組（脂質(zhì)組、陽性藥物組和玉米油組，下同）均有一定促進(jìn)消化性胃潰瘍愈合作用，磷脂、蛋黃油3與蛋黃油1效果顯著，潰瘍評分較低，高潰瘍評分占比較少；2）脂質(zhì)組中磷脂對損傷的治愈效果強(qiáng)于其他蛋黃油組分，其次是蛋黃油1與蛋黃油3，蛋黃油2效果較差；3）使用磷脂-玉米油濁液灌胃的潰瘍愈合效果明顯強(qiáng)于單一使用玉米油，說明磷脂是促進(jìn)潰瘍愈合的有效成分。

2.2 組織病理學(xué)分析結(jié)果

白細(xì)胞滲出——炎性浸潤是炎癥反應(yīng)最重要的指征，游走出血管壁進(jìn)入組織間隙的白細(xì)胞即為炎細(xì)胞，炎細(xì)胞聚集即為炎性浸潤。而通過對樣品的病理學(xué)分析（將樣品經(jīng)過石蠟包埋染色等操作后在顯微鏡下觀察）可以觀察到炎細(xì)胞浸潤[18]聚集現(xiàn)象，胃潰瘍小鼠胃組織還可能出現(xiàn)明顯的出血性損傷、水腫、上皮細(xì)胞丟失與腺體脫落等現(xiàn)象[2]，上述現(xiàn)象也可以通過小鼠病理學(xué)分析進(jìn)行觀察。

圖2A為正常胃組織，細(xì)胞排列均勻，肌肉層結(jié)構(gòu)清晰，組織完整，無炎性細(xì)胞浸潤。模型組胃竇黏膜腺體受損嚴(yán)重，出現(xiàn)成片脫落現(xiàn)象，且炎性細(xì)胞大量聚集（圖2B）。給藥組均有一定促進(jìn)潰瘍愈合作用。其中蛋黃油2、蛋黃油3與玉米油組效果較差，均有炎癥浸潤、腺體脫落等異常組織結(jié)構(gòu)（圖2E、F、I）。而蛋黃油1、磷脂和陽性藥物組對于腺體完整性的保持效果明顯強(qiáng)于其他組別，炎性浸潤現(xiàn)象較少（圖2D、G、H）。與玉米油組相比，磷脂具有促進(jìn)潰瘍愈合效果。

圖2 各組小鼠胃組織病理形態(tài)（×100）Fig. 2 Pathological morphology of stomach tissues in mice from each group (× 100)

以上結(jié)果表明：1）蛋黃油1、磷脂促進(jìn)消化性潰瘍愈合能力較好，進(jìn)一步印證胃竇潰瘍觀察結(jié)果；2）蛋黃油3組胃竇潰瘍觀察愈合效果顯著，但組織病理學(xué)觀察結(jié)果表明愈合效果不佳；3）磷脂組潰瘍愈合效果明顯強(qiáng)于玉米油組，進(jìn)一步印證磷脂成分對潰瘍的愈合效果。

2.3 不同蛋黃油組分干預(yù)對小鼠胃組織生化指標(biāo)的影響

2.3.1 胃組織SOD活力、MDA含量及GSH-Px含量

胃組織在外因素刺激下會產(chǎn)生大量的氧自由基，引發(fā)體內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)與脂質(zhì)的過氧化反應(yīng)[19]。氧自由基可通過攻擊生物膜中多不飽和脂肪酸形成一系列脂質(zhì)過氧化物及其降解產(chǎn)物MDA等，導(dǎo)致組織損傷，引起和加劇炎癥反應(yīng)[20]。因此，組織內(nèi)的MDA含量可以間接反映細(xì)胞損傷程度，判斷潰瘍情況。SOD與GSH-Px是生物體內(nèi)氧自由基清除系統(tǒng)的重要防線[20]。兩者主要作用雖然有差異，但都可以反映炎癥的嚴(yán)重程度，酶活力越低，局部組織損傷越明顯，機(jī)體清除自由基能力弱，炎癥則趨于嚴(yán)重[21]。

如圖3所示，與模型對照組相比，脂質(zhì)組（除蛋黃油2組及蛋黃油3組外）胃組織SOD活力均極顯著提高（P＜0.01），其中磷脂和蛋黃油1對胃組織SOD活力的提升作用優(yōu)于陽性藥物。磷脂組相較玉米油組SOD活力明顯提高，說明磷脂干預(yù)具有提高SOD活力的作用。

圖3 各組小鼠胃組織SOD活力Fig. 3 SOD activity in gastric tissues of mice in each group

如圖4所示，與模型對照組相比，除蛋黃油3組外，各脂質(zhì)組MDA含量均顯著或極顯著下降（P＜0.05、P＜0.01），其中蛋黃油1組MDA含量降低效果更接近陽性藥物，其次是磷脂組。玉米油組相對模型對照組無顯著差異（P＞0.05），說明磷脂組中有效干預(yù)成分為磷脂。

圖4 各組小鼠胃組織MDA含量Fig. 4 MDA concentration in gastric tissues of mice in each group

如圖5所示，與模型對照組相比，除蛋黃油2組和玉米油組外，給藥組胃組織GSH-Px含量均顯著或極顯著提高（P＜0.05、P＜0.01），其中蛋黃油3組和磷脂組GSH-Px含量接近或高于陽性藥物組。與模型對照組相比，磷脂組GSH-Px含量極顯著提高（P＜0.01），但玉米油組未明顯改變，說明磷脂具有提高消化性胃潰瘍小鼠胃組織內(nèi)GSH-Px含量的作用。

圖5 各組小鼠胃組織GSH-Px含量Fig. 5 GSH-Px concentration in gastric tissues of mice in each group

如圖3～5所示，與模型組相比，模型對照組SOD活力、MDA含量以及GSH-Px含量變化不明顯；與模型對照組相比，陽性藥物組SOD活力、MDA含量以及GSH-Px含量變化明顯，證明藥物作用可靠有效。通過上述對小鼠胃組織SOD活力、MDA含量以及GSH-Px含量的綜合分析結(jié)果可以看出：1）蛋黃油1和磷脂對于胃組織應(yīng)激反應(yīng)有較好的抑制作用，并能夠較好地清除刺激產(chǎn)生的自由基，兩種脂質(zhì)都能顯著提升消化性胃潰瘍小鼠胃組織SOD活力與GSH-Px含量，同時抑制MDA的產(chǎn)生，有效起到促進(jìn)消化性胃潰瘍愈合的作用，且效果接近陽性藥物；2）對比上述磷脂組與玉米油組，磷脂組胃組織各生化指標(biāo)均有顯著變化，而玉米油組對于調(diào)整潰瘍胃組織上述指標(biāo)能力較差，因此推斷磷脂組干預(yù)物質(zhì)中的有效成分為磷脂。

2.3.2 胃組織NO與ET-1含量

內(nèi)源NO對血管有舒張作用，可以通過擴(kuò)張血管以增加胃黏膜血流量，降低血管通透性，抑制血小板聚集，從而起到保持胃黏膜上皮完整性促進(jìn)胃黏膜損傷愈合作用[22]。ET-1是一種具收縮血管活性的物質(zhì)，其能促進(jìn)氧化自由基、血小板激活因子等損傷因子增加，加重胃黏膜損傷[23]。NO與ET-1兩者共同構(gòu)成胃黏膜血流動力學(xué)平衡，ET-1可以增加內(nèi)皮細(xì)胞NO產(chǎn)生，該反應(yīng)負(fù)反饋調(diào)節(jié)ET-1的血管收縮，抑制NO產(chǎn)生[24]。因此，NO與ET-1含量是表征胃黏膜損傷的重要指標(biāo)。

如圖6、7所示，模型對照組與模型組NO及ET-1含量變化不顯著（P＞0.05），說明5 d內(nèi)小鼠不能將此指標(biāo)自行調(diào)節(jié)至正常水平。陽性藥物組的NO和ET-1含量較模型組發(fā)生明顯改變，證明陽性藥物有效。相較模型對照組，脂質(zhì)組中的NO含量除蛋黃油1組外變化均不顯著，說明只有蛋黃油1可以顯著升高胃組織NO。相對陽性藥物組，脂質(zhì)組都不能達(dá)到藥物升高組織NO含量的作用。

圖6 各組小鼠胃組織NO含量Fig. 6 NO concentration in gastric tissues of mice in each group

圖7 各組小鼠胃組織ET-1含量Fig. 7 ET-1 concentration in gastric tissues of mice in each group

如圖7所示，對比模型對照組，蛋黃油1、蛋黃油3和磷脂組胃組織ET-1含量均變化顯著（P＜0.05），說明三者能有效降低組織內(nèi)ET-1含量，且三者相較陽性藥物組ET-1含量差異不顯著（P＞0.05），說明其降低消化性胃潰瘍小鼠胃組織ET-1含量的能力較強(qiáng)。

以上結(jié)果表明：1）在消化性胃潰瘍小鼠的胃組織中，蛋黃油1可以通過降低ET-1含量、升高NO含量進(jìn)行血管擴(kuò)縮調(diào)節(jié)，促進(jìn)小鼠胃潰瘍損傷愈合；2）蛋黃油3與磷脂能夠顯著降低潰瘍胃組織內(nèi)ET-1含量，但其降低組織NO含量能力不明顯；3）磷脂組降低消化性胃潰瘍小鼠胃組織ET-1含量和升高NO含量效果明顯強(qiáng)于玉米油，說明磷脂組中磷脂起到降低消化性胃潰瘍小鼠胃組織ET-1含量和提高NO含量的作用。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：各組干預(yù)后胃竇潰瘍的愈合效果為磷脂＞蛋黃油3≥蛋黃油1＞蛋黃油2；各組干預(yù)后的組織病理形態(tài)愈合效果為磷脂＞蛋黃油1≥蛋黃油3＞蛋黃油2；各組干預(yù)后的胃組織SOD活力促進(jìn)效果為磷脂≥蛋黃油1＞蛋黃油2≥蛋黃油3；各組干預(yù)后的胃組織MDA含量降低效果為蛋黃油1≥磷脂＞蛋黃油2＞蛋黃油3；各組干預(yù)后的胃組織GSH-Px含量提升效果為磷脂＞蛋黃油3≥蛋黃油1＞蛋黃油2；各組干預(yù)后的胃組織NO含量提升效果為蛋黃油1＞磷脂≥蛋黃油2≥蛋黃油3；各組干預(yù)后的胃組織ET-1含量降低效果為蛋黃油3≥蛋黃油1≥磷脂＞蛋黃油2。

綜合考慮，本實(shí)驗(yàn)所制備4 種蛋黃油組分中蛋黃油1和磷脂對小鼠消化性胃潰瘍的促進(jìn)愈合效果最好，胃竇觀察結(jié)果表明兩組分干預(yù)后可明顯促進(jìn)小鼠胃潰瘍愈合，組織病理學(xué)分析結(jié)果表明兩組分抑制炎性因子的浸潤；此外，兩組分還能通過提高組織內(nèi)SOD活力、GSHPx含量和降低MDA含量來清除胃內(nèi)由乙酸刺激產(chǎn)生的自由基，保護(hù)胃黏膜，且通過調(diào)節(jié)內(nèi)部ET-1和NO含量舒張血管，抑制損傷因子水平增加，起到保護(hù)胃黏膜、促進(jìn)小鼠消化性胃潰瘍愈合的作用。分離出的其他脂質(zhì)雖也有一定效果，但綜合效果不如蛋黃油1和磷脂明顯。綜上，選擇蛋黃油1和磷脂進(jìn)行驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)。

2.4 驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

為了驗(yàn)證蛋黃油1和磷脂的有效性，采用高劑量（0.3 g/d）、低劑量（0.15 g/d）蛋黃油1及高劑量（0.1 g/d）、低劑量（0.05 g/d）磷脂干預(yù)消化性胃潰瘍小鼠。干預(yù)結(jié)束后，各組小鼠胃組織氧化應(yīng)激水平和炎癥水平分別如表3、4所示：1）對比模型對照組，蛋黃油1和磷脂的高劑量組氧化應(yīng)激水平和炎癥水平變化趨勢與2.3.1節(jié)結(jié)果一致；2）與高劑量磷脂干預(yù)相比，低劑量磷脂干預(yù)清除自由基與抑制過氧化反應(yīng)的能力較差，調(diào)節(jié)ET-1和NO含量能力也變?nèi)酰?）與模型對照組相比，0.15 g/d蛋黃油1干預(yù)5 d后，胃組織SOD活力、MDA含量與NO含量變化仍顯著，GSH-Px含量甚至高于高劑量蛋黃油1組，低劑量蛋黃油1干預(yù)后ET-1含量變化不顯著（P＞0.05），但對比模型對照組仍然有效果一定效果，說明0.15 g/d蛋黃油1干預(yù)也有良好的促進(jìn)小鼠消化性胃潰瘍愈合作用。

表3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)各組小鼠胃組織氧化應(yīng)激水平Table 3 Levels of oxidative stress in gastric tissues of mice from each group in validation experiments

表4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)各組小鼠胃組織炎癥水平Table 4 Levels of NO and ET-1 in stomach tissues of mice from each group in validation experiments

2.5 蛋黃油中液態(tài)脂質(zhì)組成及不同蛋黃油組分促進(jìn)小鼠消化性胃潰瘍愈合效果

碘值能夠反映油脂中脂肪酸的不飽和程度，是評價其不飽和度的重要指標(biāo)[25]。皂化值是樣品平均分子質(zhì)量的量度[26]，油脂皂化值反映其相對分子質(zhì)量，皂化值越大，油脂相對分子質(zhì)量越小[27]。如表5所示，3 種蛋黃油液態(tài)脂質(zhì)的碘值由高到低依次為蛋黃油1、蛋黃油2、蛋黃油3，皂化值由高到低依次為蛋黃油3、蛋黃油2、蛋黃油1。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，3 種液態(tài)脂質(zhì)中蛋黃油1促進(jìn)愈合效果最顯著。蛋黃油1是由蛋黃粉乙醇提取后脫去磷脂再溶解乙腈-乙醇等比例混合液的油脂，其碘值在實(shí)驗(yàn)所用油脂中最高，且高于一般動物性油脂，因此其不飽和程度較高；蛋黃油1皂化值在實(shí)驗(yàn)樣品中最低，脂質(zhì)相對分子質(zhì)量較大，推測可能與其不飽和脂肪酸相對含量高有關(guān)。蛋黃油1中多不飽和脂肪酸相對含量21.3%，n-3不飽和脂肪酸和花生四烯酸分別占總脂肪酸的1.3%和2.0%，均遠(yuǎn)高于其他兩種液態(tài)脂質(zhì)，這兩者都與炎癥愈合、抑制過氧化反應(yīng)有密切聯(lián)系[28-29]。因此，蛋黃油1中豐富的多不飽和脂肪酸可能是其在各實(shí)驗(yàn)組中促進(jìn)小鼠胃潰瘍愈合效果最佳的主要原因。

表5 蛋黃油中液態(tài)脂質(zhì)組分性質(zhì)Table 5 Properties of egg yolk oil components

蛋黃磷脂中最主要的成分就是卵磷脂，其占蛋黃固體總含量的22%與蛋黃脂類的50%[30-31]。卵磷脂功能性已有諸多研究，卵磷脂可以起到清除自由基的作用，改善破壞的生物膜系統(tǒng)[32]。此外卵磷脂還可以抑制氧化應(yīng)激與脂質(zhì)氧化，減輕炎癥反應(yīng)和星狀細(xì)胞活化[33]。以上研究與本實(shí)驗(yàn)中磷脂促進(jìn)消化性胃潰瘍的愈合作用相印證。

3 結(jié) 論

蛋黃油1和磷脂均可以通過抑制脂質(zhì)過氧化、清除自由基和調(diào)節(jié)血管擴(kuò)縮等促進(jìn)小鼠消化性胃潰瘍愈合。華苗爽等[16]采用蛋黃油干預(yù)胃潰瘍模型小鼠，其有效劑量為0.3 g/d；而本實(shí)驗(yàn)選取蛋黃油組分黃油1和磷脂分別進(jìn)行干預(yù)，有效劑量分別為0.15 g/d與0.1 g/d。蛋黃油1與磷脂中何種物質(zhì)具有保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)與抑制脂質(zhì)過氧化的作用，其中具體機(jī)制以及臨床應(yīng)用劑量等還需要進(jìn)一步研究。