貯存方式對農殘檢測樣品中有機氯類農藥檢測結果的影響

羅 成 周 如 * 李 輝 王婭玲 楊春亮 葉劍芝 曾邵東 林 玲 李 琪

（1中國熱帶農業科學院農產品加工研究所，廣東湛江 524000；2農業農村部農產品加工質量安全風險評估實驗室（湛江），廣東湛江 524000；3云南農業大學熱帶作物學院，云南昆明 650201）

蔬菜是菜食類草本植物的總稱[1]，能夠補充人體多種維生素和礦物質，能調節人體血液的pH值和預防疾病發生[2]。在蔬菜栽培過程中，為了保證蔬菜的產量，農藥施用量不斷增加，因而也帶來了新的食品安全問題——農藥殘留[3]。長期食用帶有農藥殘留的蔬菜，將會降低人體免疫力，誘發慢性疾病，造成人體急性或慢性中毒[4-6]。因此，為進一步保證飲食安全，需對果蔬進行農藥殘留日常檢測工作[7]。

目前使用的農藥，有些在短時間內可以降解成無害物質，但一些有機氯農藥殘留在環境中比較穩定、不易降解，能通過生物富集和食物鏈的作用，在人體內蓄積而危害健康[8]。由于現在農產品檢測中心數量和人員規模與現有樣品規模不匹配，部分地區的檢測中心無法在短時間內立即對每批次送檢的農產品做樣品前處理并進行檢測，樣品儲存會影響農產品的農藥殘留量，進而影響檢測結果。有研究表明，隨著時間的延長，農藥母體及其代謝物會有不同程度損失，從而影響試驗數據的準確性[9-10]。農藥穩定性與農藥自身理化性質、貯存條件、提取溶劑和樣品基質等因素相關。在實際檢測過程中，因樣品量大，樣品不能及時上機檢測，需要經過一段時間的貯存后才會被檢測[11-13]，其間樣品貯存的溫度、時間以及樣品中農藥的種類和濃度會影響最終的檢測準確性[14-17]。本文通過改變貯藏條件和農藥濃度，模擬分析不同貯存方式對檢測準確性的影響。

本文選用生菜作為基質樣品，通過對基質樣品進行加標貯存，并用氣相色譜儀進行檢測，分析不同貯存方式對甲氰菊酯、聯苯菊酯、乙烯菌核利等3種有機氯農藥穩定性的影響，從而為農殘檢測工作提供建議，也為有機氯類農藥檢測的研發提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試材料。測試所用蔬菜為生菜，購買于廣東省湛江市霞山區沃爾瑪超市。

1.1.2 試驗試劑。試驗試劑包括氯化鈉（分析純）、乙腈、正己烷（色譜純）。測試所用農藥為甲氰菊酯、聯苯菊酯、乙烯菌核利，濃度為100 μg/mL，購買于農業農村部環境保護科研監測所。

1.1.3 儀器設備。試驗儀器設備有氮吹儀（N-EVAP-24/112，美國 Organomaion公司）、多管旋渦混合儀（HD-2500，杭州佑寧儀器有限公司）、臺式高速器（H/T16MM，湖南赫西儀器裝備有限公司）、臺式低速離心機（TDZ4，湖南湘儀離心機儀器有限公司）、磁力加速攪拌器（Jan-79，金壇區城東光芒儀器廠）、高速冷凍離心機（CR22N，日本日立公司）、勻漿機[T25（S25N-25G），德國 IKA]、氣相色譜儀（7890A，美國安捷倫科技公司）、電冰箱（BCD-5654DS，中科美菱低溫科技股份有限公司）、冷柜（SC-412，海爾集團）、電子天平（DTT-A1000，美國康州HZ電子有限公司）、營養料理機、無菌注射器2 mL（上海正邦醫療科技有限公司）、0.22 μm 濾膜等。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準工作液的配制。將購買的甲氰菊酯、聯苯菊酯、乙烯菌核利3種農藥標準品配制成10 μg/mL儲備液混標，再配置成4 μg/mL的中間液混標，用于模擬試驗樣品的加標。根據上機測試需要，再配制成0.2 μg/mL的標準工作液。上述標準液貯存于4℃電冰箱中。

1.2.2 供試樣品的制備。參照《新鮮水果和蔬菜取樣方法》（GB/T 8855—2008）[18]的方法進行空白樣品制備，生菜取可食部分經縮分后切碎，充分混勻放入食品加工器，制成空白樣。按照試驗需要，向空白樣品中加入適量中間液混標，并充分攪拌、振蕩混勻后，每份樣品取50 g于樣品瓶中進行密封，并按相應試驗要求貯存。樣品檢測過1次后，不再使用，下次檢測再取出新的樣品，避免反復凍融對樣品產生影響（凍融試驗除外）。

1.2.3 貯存溫度和貯存天數對檢測準確性的影響測定。按甲氰菊酯、聯苯菊酯、乙烯菌核利3種農藥最終濃度為0.1 mg/kg制備供試樣品，于室溫（25℃）、冷藏（4℃）和冷凍（-20℃）條件下貯存。檢測貯存在室溫條件下的第 1、2、3天，冷藏、冷凍條件下第1、2、3、4、5天的樣品中3種農藥的殘留量（第1天為制樣當天，下同；室溫條件下樣品貯存到第4天時開始腐敗變質），以第1天的含量作為100%，計算各條件下3種農藥殘留率。

1.2.4 貯存溫度和農藥殘留濃度對檢測準確性的影響測定。按甲氰菊酯、聯苯菊酯、乙烯菌核利3種農藥最終濃度分別為0.05、0.10、0.15 mg/kg制備供試樣品，于室溫、冷藏和冷凍條件下貯存。檢測貯存在室溫條件下第3天，在冷藏、冷凍條件下第5天的樣品中3種農藥的殘留量，以第1天的含量作為100%，計算各條件下3種農藥殘留率。

1.2.5 反復凍融對檢測準確性的影響測定。按甲氰菊酯、聯苯菊酯、乙烯菌核利3種農藥最終濃度為0.1 mg/kg制備供試樣品，于冷凍（-20℃）條件下貯存。 檢測同一份樣品在第 1、2、3、4、5 天（即凍融 0、1、2、3、4次）3種農藥的殘留量。 以第1天的含量作為100%，計算各條件下3種農藥殘留率。

1.3 檢測方法

參照《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》（NY/T 761—2008）[19]的方法。為了避免浪費，對樣品質量、溶劑體積進行了一定的修改，試驗方法與標準保持不變。

1.3.1 提取。稱取10.0 g試樣和5～7 g氯化鈉于試管中，加入乙腈20.0 mL，在多管旋渦混合儀中高速勻漿10 min，充分混勻后于高速冷凍離心機中離心5 min，使乙腈和水相充分分層，移取上清液5 mL于試管中。

1.3.2 凈化。將試管放在50℃左右的水浴鍋中加熱，管內緩緩通入氮氣，蒸發近干，加入2.0 mL正己烷，渦旋混勻，倒入弗羅里矽柱渦旋，在臺式低速離心機中離心1 min，取出移入樣品瓶中，供色譜測定。

2 結果與分析

2.1 貯存溫度和貯存天數對檢測準確性的影響

3種貯存條件下，3種農藥殘留率隨時間的變化趨勢如圖1所示。對比3種溫度貯存3 d內各農藥的殘留量可知，室溫條件下殘留率的減少幅度小于冷藏和冷凍，這可能是由于室溫條件貯存沒有溫差的變化過程，短時間內溫度的影響小于溫差造成的影響；隨著時間的延長，冷凍貯存則顯現出更好的效果，低溫條件下貯存，農藥降解速率變慢，檢測結果趨于平穩。因此，在短期內能完成檢測的樣品，可直接在室溫條件下進行貯存，而需要長期貯存的樣品，冷凍表現出更好的貯存效果。對比3種農藥在試驗結束時的殘留量可知，乙烯菌核利的殘留量最低，表明乙烯菌核利的穩定性較差，這也證明了農藥穩定性與自身理化性質相關。

圖1 貯存溫度和貯存天數對檢測準確性的影響

2.2 貯存溫度和農藥殘留濃度對檢測準確性的影響

3種貯存條件下，不同濃度的3種農藥在貯存3 d或5 d時的殘留率如圖2所示。由圖2可知，當3種農藥的初始濃度為0.05 mg/kg時，表現出更好的穩定性，在室溫條件下貯存3 d或在冷藏、冷凍條件下貯存5 d后仍能達到85%以上的殘留率；初始濃度為0.1 mg/kg和0.15 mg/kg的3種農藥在貯存3 d或5 d后的殘留率差異不大。

圖2 貯存溫度和農藥殘留濃度對檢測準確性的影響

2.3 反復凍融對檢測準確性的影響

由圖3可知，3種農藥反復凍融后殘留率均下降。樣品凍融2次后，3種農藥的殘留率分別為：乙烯菌核利79%、聯苯菊酯75%、甲氰菊酯73%，與未凍融相比分別下降了21個百分點、25個百分點、27個百分點；凍融3次后，3種農藥殘留率均在70%及以下，低于經濟合作與發展組織規定的以損失30%作為樣品穩定與否的判定依據[20]。因此，凍融3次后的樣品不宜再留存繼續作為樣品進行檢測來判定農殘是否超標。

圖3 反復凍融對檢測準確性的影響

3 結論

本研究測定室溫（25℃）、冷藏（4℃）以及冷凍（-20℃）3種貯存方式對3種有機氯農藥（乙烯菌核利、聯苯菊酯、甲氰菊酯）檢測結果的影響。研究表明，不同貯存方式對有機氯農藥測定結果有影響，貯存時間、貯存溫度以及凍融次數都會影響檢測結果的準確性；冷藏和及時檢測是減少農藥降解對準確性影響的主要手段。短期內檢測的樣品，可進行室溫貯存，而需要較長時間才能檢測的樣品冷凍貯存更好；當待測農藥為低濃度時，在貯存期間降解更少，檢測準確性更高；在檢測過程中，樣品貯存時間不宜過長，反復凍融次數不宜過多，否則會影響檢測準確性；農藥自身的理化性質對其貯存后的檢測準確性也有一定影響。